實(shí)驗(yàn)一 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

1、 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課 微生物學(xué)與免疫學(xué) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、凝集試驗(yàn) 人類ABO血型鑒定 二、沉淀試驗(yàn) 雙向擴(kuò)散三、普通光學(xué)顯微鏡（油鏡）的使用和維護(hù)四、大小吞噬試驗(yàn) 五、E花環(huán)試驗(yàn)六、淋轉(zhuǎn)試驗(yàn) 一、經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)凝集反應(yīng) 凝集反應(yīng)顆粒性抗原（細(xì)菌和紅細(xì)胞等），當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適量電解質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。 玻片凝集反應(yīng)：定性試驗(yàn)，常用于已知抗體來鑒定未知抗原。 試管凝集反應(yīng)：定性和半定量試驗(yàn)，常用于已知抗原來檢測(cè)血清中的相應(yīng)的特異抗體及其含量。顆粒性抗原抗體可見的凝集塊直接凝集反應(yīng) ABO血型系統(tǒng)是人類最常見和最重要的血型系統(tǒng)，含A、B、H抗原。根據(jù)

2、紅細(xì)胞表面所含抗原命名，紅細(xì)胞膜上含A抗原者為A型血；含B抗原者為B型血；同時(shí)含A、B抗原者為AB型血；不含A及B抗原者為O型血。 玻片凝集反應(yīng)ABO血型鑒定(學(xué)生操作） 抗A 抗B血型鑒定結(jié)果 A型 B型 AB型 O型 中國(guó)人的血型比例 A型血型：28%， B型血型：24%， O型血型：41%， AB型血型：7% 型血人 平靜、認(rèn)真、耐心、心地善良、多愁善感。有時(shí)他們也固執(zhí)，精神緊張。 東西方人最大的差別在于型血人的多少，亞洲型人數(shù)位居全球人之冠。 型血人淡泊，樂天，乍看時(shí)讓人覺得冷漠且不太有禮貌，其實(shí)型人向來大而化之，不注重交際手腕，屬于個(gè)性爽朗、開門見山型。他對(duì)人有懇切，有深深的人情味，

3、非常喜歡熱鬧。型血人自我肯定意識(shí)很強(qiáng)，所以常常喜歡推翻別人的意見，雖然他往往是并無惡意。 818 型人領(lǐng)袖欲高，擅爭(zhēng)斗、有能力達(dá)到既定的目標(biāo)，他們堅(jiān)信自己的力量，在感到強(qiáng)烈嫉妒和過分自負(fù)時(shí)極易沖動(dòng)而不能自制。自殺概率較高。 在統(tǒng)計(jì)上：德、日民族的血型以型人居多。型者一般都具有雙重性格，一方面心思細(xì)密，極力壓抑自己，不傷害別人，積極服務(wù)別人；但另一方面又無法信任別人。型血人非常注意修飾外觀，對(duì)新事物最感興趣關(guān)心和敏感，所以說總是站立在時(shí)代尖端上。交友上，型血，一旦成為你的知心朋友，就會(huì)對(duì)你特別照顧和講信用。 818 型人 為數(shù)極少，科研人員知之不詳。他們的性格還是個(gè)未解之謎。 一般來說型兼具有和

4、型人的氣質(zhì)特征，秘以在氣質(zhì)方面不統(tǒng)一，缺少一貫性，也就是在性格方面充滿矛盾，易怒、煩躁。但他對(duì)事物皆有客觀的看法，凡事要求合理化。型人經(jīng)常擅于譏諷，多喜歡交際活動(dòng)，但也厭惡攀附權(quán)貴式的合理化。型人內(nèi)心對(duì)人的喜惡表現(xiàn)得很強(qiáng)烈，卻絕不會(huì)形之于色。 818二、經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng) 沉淀反應(yīng)（precipitation）一種血清學(xué)反應(yīng)。可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電介質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的沉淀物。沉淀反應(yīng)的抗原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等。 沉淀反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法大體可分為環(huán)狀法、絮狀法、瓊脂擴(kuò)散法三種基本類型。 環(huán)狀沉淀反應(yīng) 主要用于抗原的定性試驗(yàn)。如炭疽的診斷（Ascoli氏試

5、驗(yàn)）。絮狀沉淀反應(yīng) 如診斷梅毒的康氏反應(yīng)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 利用可溶性抗原與抗體在半固體瓊脂內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)散，若抗原與抗體對(duì)應(yīng)，并且比例適當(dāng)，就會(huì)出現(xiàn)白色沉淀線。 可分為單向瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)和雙向瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)。雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 雙向瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)（學(xué)生操作）1瓊脂平板的制備：取已溶化的鹽水瓊脂10ml傾注于直徑6cm的平板。待瓊脂凝固后，用打孔器按下圖 打孔。2加樣：于中央孔加入AFP抗體，2、5 孔加入待測(cè)的樣品，第1,4孔加AFP抗原作陽(yáng)性對(duì)照，第3、6孔加入生理鹽水作對(duì)照。用移液器加樣，均為50微升。3將平板放入置37溫箱中，24 小時(shí)后取出觀察結(jié)果。1,4: 陽(yáng)性對(duì)照3,6： 陰性7： AFP抗體2,

6、5：待檢血清注意事項(xiàng)1 加樣時(shí)不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。2 反應(yīng)時(shí)間要適宜，時(shí)間過長(zhǎng)，沉淀線可解離而導(dǎo)致假陰性、不出現(xiàn)或不清楚。三、 油鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察 （一）顯微鏡的構(gòu)造機(jī)械部分： 鏡座、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、推動(dòng)器、粗動(dòng)螺旋、 微動(dòng)螺旋等光學(xué)部分：聚光器、物鏡、目鏡 分辨力 D=/2N.A. 可見光的波長(zhǎng)為0.40.7微米，平均波長(zhǎng)為0.55微米 。 （1）減低波長(zhǎng)； （2）增大折射率； （3）加大鏡口角來提高分辨力。 4、從接目鏡內(nèi)觀察，上調(diào)聚光器，使光線充分照明。用粗調(diào)節(jié)旋鈕將載物臺(tái)徐徐下降（或鏡筒上升），當(dāng)出現(xiàn)物像一閃后改用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至最清晰為止。如油鏡已離

7、開油面而仍未見到物象，必須再?gòu)膫?cè)面觀察，重復(fù)上述操作。5、觀察完畢。上升鏡筒轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使油鏡物鏡偏位。用干凈擦鏡紙沾二甲苯擦去鏡頭上的油跡，最后再用擦鏡紙擦去殘留在鏡頭上的二甲苯（注意向一個(gè)方向擦拭） 。6、將顯微鏡各部分還原，放回箱中。 四、免疫細(xì)胞及其功能測(cè)定 淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)（標(biāo)本片觀察） T 細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)或特異性抗原刺激后，可出現(xiàn)代謝旺盛、蛋白質(zhì)和核酸合成增加、細(xì)胞體積增大并能進(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞，此稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低，可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平，因此，可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一。正常值6080。 淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)

8、 1- 正在分離Tcell 2-淋巴母細(xì)胞 ；3-過渡型 4 -靜止TcellE花環(huán)形成試驗(yàn)(標(biāo)本片觀察） 人的T淋巴細(xì)胞膜表面有綿羊紅細(xì)胞的受體（稱為E受體）。在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，T細(xì)胞能與SRBC結(jié)合，經(jīng)染色后，顯微鏡下可見由紅色的SRBC圍繞紫色的T細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)，形似玫瑰花環(huán)，稱為E花環(huán)。 在室溫與數(shù)分鐘內(nèi)形成花環(huán)的T細(xì)胞，稱為活性E花環(huán)形成細(xì)胞（Ea）。 在4冰箱過夜后形成花環(huán)的T細(xì)胞，稱為E花環(huán)形成細(xì)胞總數(shù)（Et）。它反映機(jī)體血液中成熟T細(xì)胞的總數(shù)。 E花環(huán)形成試驗(yàn)T細(xì)胞SRBC 五、吞噬細(xì)胞及其功能（標(biāo)本片觀察）小吞噬細(xì)胞：主要是指中性粒細(xì)胞 大吞噬細(xì)胞：?jiǎn)魏思?xì)胞和巨噬細(xì)胞 肝臟中的枯否細(xì)胞、肺臟中的塵細(xì)胞、神經(jīng)組織中的膠質(zhì)細(xì)胞 中性粒細(xì)胞小吞噬中性粒細(xì)胞細(xì)菌大吞噬雞血紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞雞血紅細(xì)胞 試驗(yàn)報(bào)告要求1、自己動(dòng)手操作的試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理與目的實(shí)驗(yàn)步驟現(xiàn)象 結(jié)果討論2、老師講解，自己未作的實(shí)驗(yàn) 寫實(shí)驗(yàn)原理3、看標(biāo)本片 請(qǐng)按要求畫圖 生物科學(xué)圖芽胞營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞菌體特征：營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞直桿形，芽胞位于菌體頂端，呈鼓槌狀細(xì)菌名稱：破傷風(fēng)梭菌放大倍數(shù)：物鏡目鏡染色方法：SF芽胞染色 實(shí)驗(yàn)廢品處理用過的玻片、打孔器放入鋁鍋（水池邊臺(tái)）裝自己血液的試管和滴管（膠頭取下，放回原位），采血針放入鋁鍋！其他如鑷子、飯盒、膠塞、裝酒精和碘酒的試劑瓶、模板、