細(xì)胞生物學(xué)研究方法之細(xì)胞組分研究課件

1、第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法離心分離技術(shù)細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法特異蛋白抗原的定位與定性細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性放射自顯影技術(shù) 定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法 一. 細(xì)胞組分的分離方法差速離心和密度梯度離心離心技術(shù)用途： 離心是研究如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體等細(xì)胞器，以及各種大分子基本手段。一般認(rèn)為，轉(zhuǎn)速為10000-25000r/min的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)；轉(zhuǎn)速超過(guò)25000r/min，離心力大于89K者稱為超速離心機(jī)。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)80000r/min，離心力超過(guò)500Kg。是分離細(xì)胞器及各種大分子基本手段。（一）差速離心

2、Differential centrifugation沉降系數(shù)（sedimentation coefficient ）： 根據(jù)1924年Svedberg（離心法創(chuàng)始人-瑞典蛋白質(zhì)化學(xué)家）：顆粒在單位離心力場(chǎng)中粒子移動(dòng)的速度大分子沉降速度的量度，等于每單位離心場(chǎng)的速度：s=v/2r。 s是沉降系數(shù)，是離心轉(zhuǎn)子的角速度（弧度/秒），r是到旋轉(zhuǎn)中心的距離，v是沉降速度。 沉降系數(shù)以每單位重力的沉降時(shí)間表示：120010-13秒，10-13這個(gè)因子叫做沉降單位S，即1S=10-13秒， 差速離心是指低速與高速離心交替進(jìn)行，使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來(lái)，達(dá)到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個(gè)或幾個(gè)數(shù)

3、量級(jí)的顆粒，可以用此法分離。沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開(kāi)。如血紅蛋白的沉降系數(shù)約為4S。大多數(shù)蛋白質(zhì)和核酸的沉降系數(shù)在4S和40S之間，核糖體及其亞基在30S和80S之間，多核糖體在100S以上。樣品離心時(shí)，在同一離心條件下，沉降速度不同，通過(guò)不斷增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過(guò)程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開(kāi)，然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速，逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。特點(diǎn)：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級(jí)離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核線粒體溶酶體與過(guò)氧化物酶體內(nèi)質(zhì)

4、網(wǎng)與高基體核蛋白體?？蓪⒓?xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過(guò)密度梯離心再行分離純化。 Low speedHigh speedDifferential centrifugation離心圖像中表現(xiàn)幾個(gè)峰，說(shuō)明樣品中有幾個(gè)組分，每一個(gè)峰代表相應(yīng)組分的沉降界面，因此可以測(cè)定每一個(gè)組分的沉降系數(shù)值。根據(jù)峰的面積可以測(cè)量組分的濃度值 一個(gè)對(duì)稱的峰形，一般可以認(rèn)為樣品是離心均一的 （二）密度梯度離心速率區(qū)帶離心,沉降系數(shù)較接近的物質(zhì)分離的方法； 原理：不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。 密度梯度液的制備用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升

5、高的密度梯度；介質(zhì)（蔗糖、多聚蔗糖、氯化銫、甘油）介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時(shí)，粘度不高；2）PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時(shí)滲透壓不大；4）對(duì)細(xì)胞無(wú)毒。操作：離心前將樣品小心鋪放在密度梯度溶液表面，離心形成區(qū)帶。離心后不同大小、不同形狀、有一定沉降系數(shù)差異的顆粒在密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶；(1) 密度梯度配制好后, 應(yīng)十分小心放置, 任何搖動(dòng)或 溫度驟變都可能破壞梯度的結(jié)構(gòu); (2) 應(yīng)把握好加入樣品的體積, 不能超過(guò)梯度的分辨能力。直徑是2. 5cm 的離心管, 可加1. 03. 0ml 的樣品。 一般而言, 在較長(zhǎng)的梯度柱上鋪較薄的樣品帶, 能獲得較高的分

6、辨率, 具體的加樣量, 還要根據(jù)梯度的斜率、樣品在離心過(guò)程中的丟失量及經(jīng)驗(yàn)來(lái)判斷; (3) 加樣也是決定梯度離心效果的重要因素, 要盡量輕 巧, 避免樣品與梯度混合。2.等密度沉降 isopycnic sedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點(diǎn)：介質(zhì)密度高，斜率大，介質(zhì)最高密度大于被分離組分的最大密度。力場(chǎng)比速率沉降法大10100倍，需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentationDNA

7、特異性的顯示方法多糖的顯示方法脂類物質(zhì)的顯示細(xì)胞中各種酶的顯示蛋白質(zhì)顯色方法DNA特異性的顯示方法Feulgen反應(yīng)： 利用酸水解去除細(xì)胞中的RNA，僅保留DNA，并且除去DNA嘌呤脫氧核糖核酸的嘌呤，使脫氧核糖的醛基暴露，所暴露出的自由醛基與希夫試劑反應(yīng)呈紫紅色。多糖的顯示方法PAS（過(guò)碘酸希夫氏）反應(yīng) 利用過(guò)碘酸的強(qiáng)氧化作用破壞糖分子的CC鍵，使糖分子氧化產(chǎn)生雙醛基，自由的醛基與希夫試劑作用形成紫紅色產(chǎn)物。脂類物質(zhì)的顯示方法 對(duì)脂類物質(zhì)的染色應(yīng)用的是物理的擴(kuò)散原理。蘇丹類染料是脂溶性染劑，它溶于酒精但更易溶于脂肪，所以當(dāng)含有脂肪的標(biāo)本與蘇丹染料接觸時(shí)，它會(huì)脫離酒精而溶于脂類結(jié)構(gòu)中從而顯色（

8、深紅）。四氧化鋨:與不飽和脂肪酸反應(yīng)成黑色， 脂肪滴細(xì)胞中各種酶的顯示方法 由于酶易受外界條件影響而變性失活。因此對(duì)酶的顯示一般采取間接的方法進(jìn)行，對(duì)可以與酶發(fā)生特異性結(jié)合的底物進(jìn)行染色從而達(dá)到顯示酶的目的。因此在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中需在盡量保持酶的活性。細(xì)胞核紅色，酸性磷酸酶活性部位呈棕黃至棕黑色 蛋白質(zhì)顯色方法（1）茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)水解后產(chǎn)生的氨基酸可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì)外，所有的氨基酸及一切蛋白質(zhì)都能和茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)。 氨基酸與茚三酮在弱酸性溶液中共熱，反應(yīng)后經(jīng)失水脫羧生成氨基茚三酮，再與水合茚三酮反應(yīng)生成

9、紫紅色，最終為藍(lán)色物質(zhì)。脯氨酸等仲胺氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì)。該反應(yīng)可廣泛用于各種氨基酸的定性或定量測(cè)定。三、特異蛋白抗原的定位與定性： 免疫學(xué)是研究機(jī)體免疫系統(tǒng)組成、結(jié)構(gòu)和功能的一門獨(dú)立的前沿學(xué)科。 細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位法：免疫熒光技術(shù)和免疫電鏡技術(shù) 蛋白質(zhì)體外定性法：免疫印跡、放射免疫沉淀、蛋白質(zhì)芯片和質(zhì)譜分析基于免疫學(xué)中抗原抗體特異性反應(yīng)的原理而設(shè)計(jì)的。將抗體分子上加上不同的可供識(shí)別的標(biāo)記，從而顯示出某種蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布和定位?？乖乖贵w特異性結(jié)合免疫熒光標(biāo)記免疫酶標(biāo)記常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（明亮的黃綠色熒光 ）、羅丹明（呈橘紅色熒光 ）等。快速、靈敏、有特異性，但其分辨率

10、有限酶標(biāo)免疫法（enzyme-labeled antibody method）：常用的酶有辣根過(guò)氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。免疫電鏡技術(shù)是免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是在超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、抗體結(jié)合定位的一種方法學(xué)。提高分辨率 鐵蛋白免疫電鏡技術(shù)： 以鐵蛋白標(biāo)記抗體，再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過(guò)電鏡檢查，觀察到鐵蛋白抗體所在的位置，即抗原所在。免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金為標(biāo)記物，利用特異性抗原抗體反應(yīng)，在光鏡電鏡下對(duì)抗原或抗體物質(zhì)進(jìn)行定位、定性乃至定量研究的標(biāo)記技術(shù)。膠體金顆粒帶電情況 抗體和金顆粒的耦聯(lián)（圖出處：IV

11、D Technology） 細(xì)胞外蛋白質(zhì)的分析蛋白電泳(SDS) 免疫印跡反應(yīng)(Western-Blot)蛋白質(zhì)芯片質(zhì)譜分析四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性 用核酸探針（放射性元素、熒光素標(biāo)記）確立特殊核苷酸序列在染色體上或在特殊類型細(xì)胞中的位置的方法稱為原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)。 把凝膠電泳分離開(kāi)的DNA片段，通過(guò)擴(kuò)散或電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，做成一個(gè)凝膠的復(fù)制品，這個(gè)過(guò)程叫做印跡。將硝酸纖維素膜與帶有放射性標(biāo)記的探針雜交，通過(guò)放射自顯影就可以辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊的核苷酸序列。 利用標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)某一特定的DNA序列的方法稱為Southern blo

12、t，檢測(cè)特定RNA序列的方法稱為Northern blot。人類染色體端粒DNA的熒光原位雜交照片 基因組原位雜交大小麥雜交后代中大麥遺傳物質(zhì)的鑒定以特異序列為探針鑒定rDNA在染色體上的分布 五、應(yīng)用放射自顯影技術(shù)研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動(dòng)態(tài)原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光，對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位和半定量研究的一種細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。利用同位素的放射自顯影，對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究；實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動(dòng)態(tài)和追蹤研究。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來(lái)顯示DNA，用3H-

13、UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)： 顯微分光光度測(cè)定技術(shù)和流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀原理：待測(cè)標(biāo)本制備成單細(xì)胞懸液通過(guò)熒光染色后進(jìn)入充滿鞘液的流動(dòng)室，鞘液壓力與樣品流壓力是不同的，當(dāng)二者的壓力差異達(dá)到一定程度時(shí)，鞘液裹挾著樣品流中細(xì)胞排成單列逐個(gè)經(jīng)過(guò)激光聚焦區(qū)。將細(xì)胞中感興趣的部分特異性的標(biāo)上熒光染料，那麼這些染料將在細(xì)胞通過(guò)激光檢測(cè)區(qū)時(shí)受激光發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光,通過(guò)一定波長(zhǎng)選擇通透性的濾色片,我們可將不同波長(zhǎng)的散射光、熒光信號(hào)區(qū)分開(kāi)來(lái)，并送到不同的光電倍增管中，經(jīng)過(guò)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)換、放大

14、，數(shù)字化處理，我們就可以在計(jì)算機(jī)直觀的統(tǒng)計(jì)染上各種熒光染料的細(xì)胞各自的百分率。 正負(fù)不同的電荷，液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，收集容器中從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。1、具有操作簡(jiǎn)便，只要將染色的單個(gè)細(xì)胞推入儀器中，就會(huì)得出數(shù)據(jù)。2、具有較高的靈敏度及測(cè)定速度，而且每次可測(cè)出許多數(shù)據(jù)，一般情況下，每秒可測(cè)5000個(gè)細(xì)胞，能迅速分析和記數(shù)大量細(xì)胞，并能準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)群體中熒光標(biāo)記細(xì)胞的比例。3、應(yīng)用廣泛，即可用于測(cè)定細(xì)胞活力、繁殖周期和細(xì)胞定型分析，也可區(qū)別死亡細(xì)胞、分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群，既可測(cè)定DNA和RNA、測(cè)凋亡峰，又可測(cè)蛋白含量，特別是胞漿蛋白。G1、G2、S三期 右側(cè)數(shù)字含義：M

15、ean G1=195.4即G1期DNA含量平均值為195.4；%G1=73.6即G1期細(xì)胞數(shù)占總數(shù)的73.6%； 顯微分光光度測(cè)定技術(shù) 利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對(duì)特異光譜的吸收，測(cè)定這些物質(zhì)（如核酸與蛋白質(zhì)等）在細(xì)胞內(nèi)的含量。 包括：紫外光顯微分光光度測(cè)定法 可見(jiàn)光顯微分光光度測(cè)定法第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞的培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞（primary culture cell） 傳代培養(yǎng)細(xì)胞（sub-culture cell）細(xì)胞株（cell strain） 正常二倍體，接觸抑制細(xì)胞系（cell line） 亞二倍體，接觸抑制喪失組織培養(yǎng)的意義植物細(xì)胞 類型： 原生質(zhì)體培養(yǎng)

16、 （體細(xì)胞培養(yǎng)） 單倍體細(xì)胞培養(yǎng)（花藥培養(yǎng)） Hela細(xì)胞（左）、CHO細(xì)胞（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 右）的培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)： 將動(dòng)、植物細(xì)胞或組織從機(jī)體內(nèi)取出分散成單細(xì)胞懸液，給予必要的生長(zhǎng)條件，讓其在培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖的過(guò)程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程：取材 分離細(xì)胞 選擇相同類型的細(xì)胞 貼壁培養(yǎng) 傳代（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)（primary culture cell）:培養(yǎng)來(lái)自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群。傳代培養(yǎng)（subculture cell）:原代培養(yǎng)的細(xì)胞在生長(zhǎng)一定時(shí)間以后，就會(huì)由于營(yíng)養(yǎng)成分的消耗、代謝產(chǎn)物的積累以及接觸抑制等因素而停止生長(zhǎng)，因此必需將細(xì)胞傳到新的培養(yǎng)瓶中去使其繼續(xù)生長(zhǎng)。細(xì)胞系（cel

17、l line）：原代培養(yǎng)細(xì)胞成功傳代即為細(xì)胞系。細(xì)胞株：原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不易傳下去了，細(xì)胞生長(zhǎng)出現(xiàn)停滯，但有極少數(shù)細(xì)胞可能渡過(guò)危機(jī)而傳下去，這些細(xì)胞一般又可順利傳代40-50代，并且保持染色體的二倍體數(shù)量及接觸抑制的行為。這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞株。細(xì)胞系：由細(xì)胞株傳至50代后又出現(xiàn)危機(jī)不能再傳下去，但是如果有部分細(xì)胞發(fā)生了遺傳突變就有可能在體外培養(yǎng)的條件下無(wú)限制地傳下去。這些細(xì)胞具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系的特點(diǎn)是染色體發(fā)生明顯變化，失去接觸抑制的特性。實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來(lái)源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞Henrietta

18、 Lacks BHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉(cāng)鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP20骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國(guó)地鼠Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 細(xì)胞培養(yǎng)的意義可以在離體條件下觀察研究細(xì)胞生命活動(dòng)的規(guī)律；觀察細(xì)胞對(duì)于各種生物活性物質(zhì)的反應(yīng)；通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)可以獲得大量性狀相同的細(xì)胞，是一種良好的實(shí)驗(yàn)材料。（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長(zhǎng)發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無(wú)性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)

19、行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：比較容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)，如DNA；便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。單倍體培養(yǎng)：通過(guò)花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。Plant Cell CultureAnimal Cell Culture (三)、非細(xì)胞體系 來(lái)源于細(xì)胞，而不具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但包含了進(jìn)行正常生物學(xué)反應(yīng)所需的物質(zhì)（如供能系統(tǒng)和酶反應(yīng)體系等）組成的體系即為非細(xì)胞體系（cell-free system）。 用途：研究DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜泡運(yùn)輸機(jī)制以及細(xì)胞核裝配等。 二、細(xì)胞

20、工程 細(xì)胞工程是一種在細(xì)胞水平上運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的方法改變生物遺傳性狀的生物工程。細(xì)胞融合(fusion)與細(xì)胞雜交(hybridization)技術(shù)單克隆抗體（monoclone antibody）技術(shù) 細(xì)胞拆合與顯微操作技術(shù)其它技術(shù) 遺傳分析（mutant, knock out, knock in） （一）細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交技術(shù) 通過(guò)培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程稱為細(xì)胞融合（cell fusion）或細(xì)胞雜交。同核體：相同基因型的細(xì)胞融合而成。異核體：不同基因型的細(xì)胞融合而成。自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。誘發(fā)融合：異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘

21、導(dǎo)劑處理才能融合。 誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法：動(dòng)物細(xì)胞融合： 生物方法（仙臺(tái)病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒 ）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（電擊和激光）。植物細(xì)胞融合：先用纖維素酶去掉顯微素壁（二）單克隆抗體技術(shù)克?。╟lone）：亦稱無(wú)性系。指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群。單克隆抗體技術(shù)B淋巴細(xì)胞能分泌特異抗體，但不能長(zhǎng)期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞可以在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，但不分泌特異抗體。于是Kohler和Milstein 1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，獲1984年諾貝爾獎(jiǎng)。將免疫淋巴與骨髓瘤細(xì)胞融合在一起，形成雜交瘤細(xì)胞。這種細(xì)胞既能夠像腫瘤細(xì)胞那樣長(zhǎng)期進(jìn)行無(wú)性繁殖，又能像淋巴細(xì)胞那樣分泌抗體。而且由于這種抗體可以是由單一的無(wú)性繁殖細(xì)胞系的細(xì)胞產(chǎn)生的，故又可以稱單克隆抗體。 單克隆抗體制備過(guò)程 注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠