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文檔簡介

1、現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)一、TEM樣品包埋塊的制備2實(shí)驗(yàn)步驟切取1mm3左右大小的組織塊，立即放入PBS（pH7.2)配制的2.5%戊二醛中固定1小時。用0.1molPBS緩沖液沖洗三次每次510分鐘。1鋨酸固定1小時，然后用緩沖液沖洗三次每次510分鐘。丙酮脫水：3050708090100100 每級510分鐘浸透：脫水劑：包埋劑=3：1 1小時 脫水劑：包埋劑=1：3 過 夜3包埋聚合：45 oC 12h 60 oC 24h4磷酸緩沖液（Phosphate Buffer Saline, PBS）0.2molL-1 PBS 配制A液：Na2HPO4 .2H2O 35.61g 加DDW 至 100

2、0mlB液：NaH2PO4 .H2O 27.6g 加DDW 至 1000ml5不同pH磷酸緩沖液的配制pH 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6A液 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5 43.5(ml)B液 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5 6.5(ml)6Epon812包埋液的配制 Epon812樹脂 20ml DDSA 4.6ml MNA 15.3ml DMP-30 0.8ml7實(shí)驗(yàn)二、支持膜與膠體金的制備8膠體金的制備檸檬酸三鈉法 0.01%氯金酸（HAuCl4)水溶液100ml加熱至沸騰，加1.5ml 1%檸檬酸三鈉水溶液，出現(xiàn)橙紅色。金顆粒大小與檸檬酸三鈉的關(guān)系檸檬酸三鈉（ml) 4 1.5 1.0 0.75金顆粒的直徑（nm) 15 30 50 609膠體金與標(biāo)記蛋白的配比膠體金pH的調(diào)節(jié)：用0.1mol K2CO3調(diào)到pH9.0取7支2ml離心管分別加入1ml膠體金再向每支管中加入1ml不同濃度的牛血清白蛋白混合均勻后分別加入0.1ml10%NaCl混合均勻后按照下圖觀察顏色的變化確定出包裹膠體金蛋白的量10膠體金與標(biāo)記蛋白的比例 40 35 30 25 20 15 10 蛋白含量mg11試驗(yàn)三、TEM

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