配伍對生化湯中阿魏酸溶出的影響

1、配伍對生化湯中阿魏酸溶出的影響【摘要】目的用反相-高效液相色譜法測定生化湯各配伍組合中的阿魏酸的含量，研究不同配伍對阿魏酸溶出的影響。方法采用L8(27)正交設(shè)計法,以HPL法測定各配伍樣品中阿魏酸含量。結(jié)果川芎和甘草對生化湯中阿魏酸的溶出量具極顯著的影響作用(P0.01);川芎和桃仁、川芎和甘草的交互效應(yīng)對阿魏酸的溶出量那么具顯著的影響作用(P0.05);而桃仁、桃仁和甘草的交互效應(yīng)、炮姜對阿魏酸的含量沒有顯著性影響(P0.05)。結(jié)論生化湯中川芎明顯增加生化湯中阿魏酸的溶出量，甘草及川芎和桃仁、川芎和甘草的兩兩交互效應(yīng)可顯著降低阿魏酸的含量。【關(guān)鍵詞】生化湯;配伍;阿魏酸;高效液相色譜Ab

2、strat：bjetiveTdevelpanRP-HPLethdfrdeterinatinfferuliaidindetinspreparedfrvariusbinatinsfthereipenaedShenghuaDetinandtinvestigatethententhangesfferuliaidindifferentdetins.ethdsntentfferuliaidineahdetinasdeterinedbyRP-HPLithL8(27)rthgnaldesign.ResultsSzehanLvageRhizeandLiqurieRthadexeedinglysignifiant

3、effetnthententfferuliaidinthisdetin(P0.01);SzehanLvageRhizeandPeahSeed,SzehanLvageRhizeandLiqurieRthadsignifianteffetnthententfferuliaidinthisdetin(P0.05);theeffetfPeahSeed,PreparedDriedGinger,PeahSeedandLiqurieRtnthententfferuliaidasntsignifiant.nlusinThententfferuliaidisinreasedbySzehanLvageRhizea

4、ndreduedbyLiqurieRt,SzehanLvageRhizeandPeahSeed,SzehanLvageRhizeandLiqurieRt.Keyrds：ShenghuaDetin;patibility;FeruliAid;HPL生化湯由當(dāng)歸、川芎、桃仁、炮姜及甘草等5味中藥組成，功能活血化瘀，調(diào)經(jīng)止痛。本方源自南宋末年的?女科秘要?，至清代被?傅青主女科產(chǎn)后編?收錄，阿魏酸可抑制血小板聚集、促進血小板的解聚、抗血栓的形成、解除血管平滑肌痙攣、抗氧化等藥理作用1，為方中主要有效成分。本實驗采用正交實驗法研究該方不同配伍對阿魏酸溶出的影響，以從化學(xué)角度討論生化湯的配伍組方機制。1儀

5、器與試藥1.1儀器ShiadzuL-10A高效液相色譜儀(日本島津)。包括SL-10AvpSystentrller;SPD-20ADAD;FV-10ALvp;SIL-20AAutSapler;L-Slutin1.22SP1(色譜數(shù)據(jù)工作站);自動雙重純水蒸餾器(型號SZ-93，上海亞榮生化儀器廠);UltrasniGeneratr(型號H66,無錫超聲電子設(shè)備);梅特勒托利多AE240電子天平(十萬分之一，瑞士ettlerTle-d)。甲醇(色譜純,美國J.T.BAKER公司);水為雙蒸水;其余試劑為分析純。1.2藥品對照品阿魏酸(批號：06081427)由上海同田生物科技提供。當(dāng)歸、川芎、桃

6、仁、甘草及炮姜等藥材由江蘇省徐州市藥材公司提供，經(jīng)徐州醫(yī)學(xué)院中藥教研室王健慧副教授鑒定，當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angeliasinensis(liv.)Diels的枯燥根2;川芎為傘形科植物川芎LigustiuhuanxingHrt.的枯燥根莖;桃仁為薔薇科植物桃Prunuspersia(L.)Batsh的枯燥成熟種子;炮姜為姜科植物姜ZingiberffiinaleRs.的枯燥根莖的炮制加工品;炙甘草為豆科植物甘草GlyyrrhizauralensisFish.的枯燥根及根莖的炮制加工品。2方法與結(jié)果2.1生化湯中阿魏酸的含量測定2.1.1色譜條件3色譜柱為Hypersil-18(大連伊利特出

7、品，2504.6,5);柱溫28，檢測波長320n，進樣量20l，流速1.0l/in。流動相A為0.5%冰醋酸水溶液,流動相B為甲醇;線性梯度洗脫,洗脫程序：05in,25%30%B;520in,30%50%B;2025in,50%25%B。2.1.2對照品溶液和供試品溶液的制備對照品溶液的制備：精細稱取阿魏酸對照品5.18g，50%甲醇水溶液溶解后，用流動相定容于5l棕色容量瓶中，得1.036g/l對照品貯備液。從中精細量取適量，用流動相配成濃度為0.0259，0.0518，0.1036，0.2072，0.3108，0.4144，0.5180g/l的系列標準工作液。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.供試

8、品溶液的制備：按處方配比稱取生化湯各味藥材飲片(當(dāng)歸24g，川芎9g，桃仁6g，甘草2g，炮姜2g)及缺當(dāng)歸、川芎陰性方,分別加全方生藥量的10倍水，微沸煎煮3次,1h/次，過濾，合并濾液，濃縮至1l藥液含1g藥材,備用。精細汲取上述樣品液2.5l，置10l容量瓶中，加水定容至刻度,離心(4000r/in)15in，上清液經(jīng)0.45濾膜濾過，配制成供試品溶液。依法進樣測定，對照品、供試品、陰性對照色譜圖見圖13。圖1對照品HPL圖譜(1-阿魏酸，tR=15.312)圖2供試品HPL圖譜圖3陰性對照品溶液HPL圖譜2.1.3線性關(guān)系考察精細汲取前“對照品溶液的制備項下已制備的各不同濃度的對照品溶

9、液20l注入色譜儀，測定峰面積，以阿魏酸濃度(g/l)為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),進展線性回歸,得回歸方程為Y=1.055210-8X+5.25110-3,r=0.9997,阿魏酸在0.02590.5180g/l之間呈良好的線性關(guān)系。2.1.4精細度實驗精細移取供試品20l，重復(fù)進樣6次(每針間隔約30in)，測定峰面積，計算其RSD為0.498%。2.1.5重復(fù)性實驗取生化湯處方藥材,按供試品溶液制備方法處理，制成6份供試品溶液,按上述色譜條件進樣測定,結(jié)果平均含量為0.08029g/l，RSD為0.830%。2.1.6穩(wěn)定性實驗取同一份供試品溶液，在配制后0，2，4，6，8，12

10、，24h進樣，測定阿魏酸含量，其RSD=0.564%，說明24h內(nèi)溶液穩(wěn)定。2.1.7回收率實驗精細移取0.15l含量的生化湯水煎液9份，每3份分別精細參加濃度為0.1036g/l的阿魏酸對照液0.10，0.12，0.15l，依次測定阿魏酸含量。結(jié)果見表1。2.2不同配伍條件對阿魏酸含量的影響2.2.1正交設(shè)計固定當(dāng)歸，以川芎、桃仁、炮姜、甘草為4因素，程度設(shè)為“有和“無，并考慮兩兩交互作用，因素程度見表2。表1加樣回收率測定結(jié)果表2因素程度2.2.2供試品溶液的制備按前“供試品溶液的制備項下方法，實驗安排及測定結(jié)果見表3。表3正交設(shè)計2.2.3結(jié)果分析直觀分析結(jié)果顯示，對阿魏酸的影響為：川芎

11、甘草川芎桃仁川芎甘草桃仁甘草桃仁炮姜。方差分析結(jié)果見表4。表4方差分析由表4可以看出，川芎和甘草對生化湯中阿魏酸的溶出量具極顯著的影響作用(P0.01);川芎和桃仁、川芎和甘草的交互效應(yīng)對阿魏酸的溶出量那么具顯著的影響作用(P0.05);而桃仁、桃仁和甘草的交互效應(yīng)對阿魏酸的含量沒有顯著性影響(P0.05)。3討論本實驗采用L8(27)正交設(shè)計及EXEL軟件對生化湯中的阿魏酸含量進展分析，結(jié)果說明，在P0.01程度下，川芎明顯增加生化湯中阿魏酸的溶出量，甘草的參加明顯抑制了阿魏酸的溶出;在P0.05程度下，川芎和桃仁、川芎和甘草的交互效應(yīng)顯著降低阿魏酸的含量;桃仁、桃仁和甘草的交互效應(yīng)及炮姜對阿魏酸的溶出影響無顯著性。筆者分析，川芎可增加阿魏酸溶出，是因為川芎本身含有阿魏酸，與當(dāng)歸的阿魏酸具加和性，與當(dāng)歸起協(xié)同作用;甘草可明顯抑制阿魏酸溶出，可能是由于甘草中含有酸性皂苷成分，從而抑制了有機酸成分-阿魏酸的溶出;而川芎和桃仁交互可降低阿魏酸含量的機制，有待于深化討論。筆者在實驗中曾嘗試使用二極管陣列檢測器同時測定阿魏酸和川芎嗪的含量，以使實驗結(jié)論更具說服力，流動相先后更換了甲醇-冰醋酸;乙腈-冰醋酸;甲醇-磷酸;甲醇-磷酸鹽等系統(tǒng)，但由于川芎嗪在全方中含量過低，仍未成功建立適宜的色譜條件。擬在下一步實驗進程中，建立生化湯全方的指紋圖譜，