腫瘤壞死因子

1、腫瘤壞死因子孫嗣國，馬保安，周勇，范清宇【關鍵詞】,腫瘤壞死因子stelastfratinandbneresrptininduedbyturnersisfatr【Abstrat】AI:Tinvestigatehetherturnersisfatr(TNF)aninduestelastfratinfrperipheralbldnnulearells(PBs)independentfreeptrativatrfnulearfatrkappaBligand(RANKL).ETHDS:PBsereulturedinthepresenefarphagelnystiulatingfatrSFandTNFi

2、nvitr.RANKLblkingagentRANK:FandneutralizingantiTNFantibdyererespetivelyaddedttheulture.Attheendftheulture,PBsulturednverslipserefixedandstainedfrtartrateresistantaidphsphatase(TRAP),aarkerfstelast.Launaresrptinndentineslies,afuntinalarkerfstelast,asalsbservedusingsanningeletrnirspyandlightirspy.RESU

3、LTS:TNFinduedthefratinfultinuleatedells(Ns)hihereTRAPpsitiveandshedevideneflaunaresrptinpitfratinndentineslies.RANK:FdidntinhibitthispresshileneutralizingantiTNFantibdypletelyblkedbththefratinfNsandlaunaresrptin.NLUSIN:InthepresenefSF,TNFandiretlyinduennulearphagytestelastpreursrstdifferentiateintst

4、elastiellsapableflaunaresrptin.【Keyrds】TNF;stelast;bneresrptin【摘要】目的：驗證腫瘤壞死因子TNF是否可以直接誘外周血單核細胞PBs分化為具有骨汲取作用的破骨細胞.要領：小白鼠PBs體外造就中參加TNF和白細胞介素1IL1及巨噬細胞克隆集落刺激因子SF；同時，別離參加細胞核因子B受體活化因子配體(RANKL)的拮抗劑RANK:F和抗TNF中和抗體.對造就終末細胞作構(gòu)造化學染色，檢測破骨細胞特性性標記物抗酒石酸磷酸酶TRAP的表達；并以象牙磨片上蟲蝕樣骨汲取陷窩的形成為指標檢測其生物學活性.效果：PBs體外造就形成大量TRAP陽性的多

5、核細胞Ns；象牙磨片上見到蟲蝕樣骨汲取陷窩，后者的面積對TNF呈劑量依靠性.RANK:F對此征象無按捺作用，而抗TNF中和抗體可完全阻斷該征象的產(chǎn)生.結(jié)論：TNF可以或許直接誘導PBs分化為具有骨汲取成效的破骨細胞.【關鍵詞】腫瘤壞死因子；破骨細胞；骨汲取0弁言破骨細胞是由單核巨噬體系的破骨細胞前體細胞分化而來的多核細胞(Ns).多種炎性及非炎性的骨與樞紐的病變，如骨質(zhì)疏松、風濕性樞紐炎、無菌性松動等都與破骨細胞代謝非常有關.比年來的研究表白腫瘤壞死因子(TNF)通過多種方法到場破骨細胞的分化及生物學活性的調(diào)控1,2.在本實行中，我們將小白鼠外周血單核細胞(peripheralbldnnule

6、arells,PBs)及RA246.7細胞體外造就，并參加TNF及其他因子，驗證TNF是否可以直接誘導破骨細胞前體細胞分化為具有骨汲取活性的破骨細胞.1質(zhì)料和要領1.1質(zhì)料1.2要領TRAP染色：玻璃蓋玻片于氣氛中晾干并用檸檬酸/丙酮結(jié)實細胞，根據(jù)試劑盒說明書作構(gòu)造化學染色檢測破骨細胞標記物TRAP的表達.甲苯胺藍染色及電鏡掃描(SE)：象牙磨片浸泡于NH4H(1l/L)30in、超聲波處置懲罰去除黏附的細胞及碎片后，蒸餾水潤洗并于氣氛中晾干.甲苯胺藍染色后，光學顯微鏡下檢測蟲蝕樣骨汲取陷窩的形成，并盤算蟲蝕樣骨汲取陷窩面積占象牙磨片總面子積的百分比.別的有一部門象牙磨片用梯度乙醇脫水、氣氛晾

7、干并覆以金粉涂層后做電鏡PhilipsSE505掃描.2效果3討論破骨細胞的成效和活性在骨代謝調(diào)治中起側(cè)重作用,TRAP陽性和骨汲取作用為其特性性標記.破骨細胞的形成依靠于破骨細胞前體細胞外貌的RANK與其配體(RANKL)之間的彼此作用；同時SF的存在也是破骨細胞分化及存活的需要條件3.骨庇護素PG是RANKL的餌受體，通過與RANK競爭結(jié)合RANKL從而按捺RANKL誘導的破骨細胞分化及骨汲取作用.很多細胞因子通過調(diào)治RANKL與PG之間的平衡來影響破骨細胞的溶骨作用4.比來Kd等5報道炎性細胞因子白細胞介素6IL6和IL11可以或許直接誘導破骨細胞分化而不依靠于RANKL/RANK作用機

8、制.TNF是一種非常緊張的炎性因子，它具有多種生物學成效，包羅調(diào)治炎性反響、免疫應答、調(diào)亡和抗病毒反響等.在骨骼體系中，TNF可以或許按捺細胞外基質(zhì)沉積并刺激基質(zhì)金屬卵白酶的合成1、而且它還可以促進溶骨性細胞因子如SF和RANKL的表達2.Kbayashi等6和Kud等7先后報道了TNF體外直接誘導老鼠和人的破骨細胞分化成為具有骨汲取活性的破骨細胞，而且IL1可以或許顯著加強這種破骨細胞的活性.然而La等8那么以為TNF單獨不克不及夠誘導的破骨細胞分化，只能在最低容許濃度RANKL存在的條件下才氣誘導破骨細胞形成.我們的效果與Kabayashi和Kud研究小組的效果同等，表現(xiàn)TNF可以或許直接

9、誘導小鼠PBs中破骨細胞前體細胞分化為具有骨汲取活性的成熟的破骨細胞.原始細胞造就24h未見TRAP陽性細胞，象牙磨片上也未見骨汲取陷窩形成，表白原始造就細胞中不含有破骨細胞.顛末914d造就后，TNF誘導PBs分化為TRAP陽性的具有骨汲取活性的Ns.而且，象牙磨片上蟲蝕樣骨汲取陷窩的面積隨TNF的劑量增長而增大，提示破骨細胞的活性對TNF表示出劑量依靠性.抗TNF中和抗體可以或許阻斷這一歷程，而RANKL阻斷劑RANK:F對這一歷程無明顯影響，表白這種作用是由TNF介導而不依靠于RANKL/RANK作用機制的.TNF誘導形成的破骨細胞與RANKL誘導形成的破骨細胞差異；前者的體積小而且所含

10、細胞核的數(shù)目少.這種相對較小的TRAP陽性的多核細胞和單核細胞與gp130細胞因子如IL6誘導形成的細胞相似5.itten等9曾在斑馬魚模子中不雅察到單個核破骨細胞可以形成小而淺的蟲蝕樣汲取陷窩.Quinn等10也報道過在研究破骨細胞體外模子時見到TRAP陽性的單核細胞，但其性子尚不明晰.我們在實行中也不雅察到TRAP陽性的單核細胞，筆者以為它們是處于馬上交融狀態(tài)的破骨細胞前體細胞；但是這種細胞是否具有骨汲取活性還不明晰，必要作進一步的研究.在多種病理條件下，如風濕性樞紐炎和人工樞紐置換術后無菌性松動，局部構(gòu)造中TNF程度都有所升高，作為一種炎性分子，TNF通過多種途徑到場骨代謝歷程.我們的實

11、行效果進一步證實，TNF可以直接誘導破骨細胞分化并刺激其活性從而在骨代謝中發(fā)揮緊張作用.因此針對TNF的治療大概成為防范和治療這些疾病的有用方法.【參考文獻】1SiikDA,hangDL,luiS.Interliukin1andturnersisfatrdereasellagensynthesisandinreaseatrixetallprtEinaseativityinardiafibrblastsinvitrJ.irRes,2000;86(12):1259-1265.2KubtaA,HasegaaK,SugurT,etal.Turnersisfatralphaprtestheexpress

12、infsteprtegerininrheuatidsynvialfibrblastsJ.JRheuatl,2022;31(3):426-435.3BlairH,AthanasuNA.ReentadvanesinstelastbilgyandpathlgialbneresrptinJ.HistlHistpathl,2022;19(1):189-199.4HfbauerL,HikK,henD,etal.RegulatinfsteprtegerinprdutinbyandrgensandantiandrgensinhuansteblastilineageellsJ.EurJEndrinl,2002;

13、147(2):269-273.5Kd,SabkbarA,ItnagaI,etal.Interleukin6andinterleukin11supprthuanstelastfratinbyaRANKLindependentehanisJ.Bne,2022;32(1):1-7.6KbayashiK,TakahashiN,JiiE,etal.TurnersisfatrsalphastiulatesstelastdifferentiatinbyaehanisindependentftheDF/RANKLRANKinteratinJ.JExped,2000;191(2):275-286.7Kud,FujikaaY,ItnagaI,etal.Prinflaatryytkine(TNF/IL1)indutinfhuanstelastfratinJ.JPathl,2002;198(2):220-227.8LaJ,TakeshitaS,BarkerJE,etal.TNFinduesstelastgenesisbydiretstiulatinfarphagesexpsedtperissivelevelsfRANKligandJ.JlinInves,2000;106(12):1481-1488.9ittenPE,HansenA,HallBK.Featuresfnandultinuleatedbne