細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件

1、細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)TextTextText細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)TextTextText第一節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查第一節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查講授內(nèi)容顯微鏡的使用細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查方法細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察講授內(nèi)容顯微鏡的使用細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查方法細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡（light microscope） 暗視野顯微鏡（dark-field microscope） 相差顯微鏡（phase contrast microscope） 顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡（light microscope） 普通光學(xué)顯微鏡用油鏡放大1000倍，一般細(xì)菌均能清楚看到。暗視野顯微鏡用于檢查不染色的活細(xì)菌和螺旋

2、體的形態(tài)及運(yùn)動(dòng)觀察。 相差顯微鏡主要用于檢查不染色活細(xì)菌的形態(tài)及某些內(nèi)部結(jié)構(gòu)。普通光學(xué)顯微鏡用油鏡放大1000倍，一般細(xì)菌均能清楚看到。普通光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡暗視野顯微鏡 暗視野顯微鏡 倒置相差顯微鏡倒置相差顯微鏡顯微鏡油鏡的使用(一)低倍鏡對(duì)光，將光線調(diào)至最強(qiáng)程度(聚光器提高，光圈全部開放)。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小滴(不要過多，不要涂開)于接物鏡正下方標(biāo)本上。轉(zhuǎn)動(dòng)接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。顯微鏡油鏡的使用(一)低倍鏡對(duì)光，將光線調(diào)至最強(qiáng)程度(聚光器顯微鏡油鏡的使用(二)慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)

3、粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見到標(biāo)本的物象為止。轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清晰的程度。左手徐徐移動(dòng)推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。顯微鏡油鏡的使用(二)慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見顯微鏡的保護(hù)(一)顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實(shí)習(xí)臺(tái)上或裝入木箱內(nèi)。 顯微鏡放到實(shí)習(xí)臺(tái)上時(shí)，先放鏡座的一端，再將鏡座全部放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時(shí)與臺(tái)面接觸，這樣震動(dòng)過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易損壞。顯微鏡的保護(hù)(一)顯微鏡在從

4、木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂顯微鏡的保護(hù)(二)顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時(shí)，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許二甲苯拭去。顯微鏡用完后，取下標(biāo)本片，經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降，以免接物鏡與聚光器相碰。 顯微鏡的保護(hù)(二)顯微鏡須經(jīng)常保持清潔，勿使油污和灰塵附著。細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法不染色檢查法染色檢查法負(fù)染色法細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查方法不染色檢查法（一）不染色標(biāo)本檢查應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動(dòng)力和運(yùn)動(dòng)方式。常用方法：壓滴法、懸滴法、暗視野映光法。（一）不染色標(biāo)本檢查應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動(dòng)力和運(yùn)動(dòng)方式。1、壓滴法載玻片細(xì)菌懸液蓋

5、玻片1、壓滴法載玻片細(xì)菌懸液蓋玻片2、懸滴法鏡檢蓋玻片細(xì)菌懸液凹玻片2、懸滴法鏡檢蓋玻片細(xì)菌懸液凹玻片染色檢查法 細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，除能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列方式外，還可根據(jù)染色反應(yīng)將細(xì)菌進(jìn)行分類。染色檢查法 細(xì)菌標(biāo)本經(jīng)染色后，除能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)、大小、染色檢查法常用染料染料分天然染料和人工染料。依據(jù)助色基解離后的帶電情況，要將染料分為堿性和酸性兩種。堿性染料常以氯化物的形式存在，電離后帶正電荷。如美蘭、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等 。酸性染料電離后帶負(fù)電荷。如伊紅、剛果紅等 。染色檢查法常用染料染色檢查法染色的一般原理和程序細(xì)胞壁通性學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)?；瘜W(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸

6、鎂鹽有關(guān)。等電點(diǎn)學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)。染色檢查法染色的一般原理和程序染色檢查法染色的一般原理和程序染色材料準(zhǔn)備涂片制備染色。染色材料準(zhǔn)備要注意染液配制、玻片處理、標(biāo)本采集等幾個(gè)環(huán)節(jié)。 涂片制備是在玻片上制備菌膜的過程。通常是用接種環(huán)將細(xì)菌涂成1cm2cm大小菌膜，待自然干燥后經(jīng)固定處理再行染色。 染色是增加被染物折光性過程。根據(jù)形態(tài)學(xué)檢查要求可將染色法分為單染色法和復(fù)染色法。染色檢查法染色的一般原理和程序涂片干燥固定染色水洗、吸干鏡檢制備涂片標(biāo)本染色涂片干燥固定染色水洗、吸干鏡檢制備涂片標(biāo)本染色固定固定的目的在于：殺死細(xì)菌。 使細(xì)胞物質(zhì)凝固和增加細(xì)菌通透性。使菌膜較牢固地固定于玻片上，避免

7、其在染色過程中脫落。 固定可采用加熱法、凍干法、和化學(xué)法。 固定固定的目的在于：殺死細(xì)菌。 使細(xì)胞物質(zhì)凝固和增加細(xì)菌細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件堿性美藍(lán)液和石炭酸復(fù)紅液?jiǎn)稳旧ā救疽骸繅A性美藍(lán)液、石炭酸復(fù)紅液【方法】將上述某種當(dāng)液覆蓋于菌膜上，常溫染1min3min，水洗，待干或吸水紙印干，鏡檢?！窘Y(jié)果】菌體呈藍(lán)色或紅色。單染色法堿性美藍(lán)液和石炭酸復(fù)紅液?jiǎn)稳旧ā救疽骸繅A性美藍(lán)液、石炭酸復(fù)常用復(fù)染色方法 革蘭氏染色法 抗酸染色法 異染顆粒染色法莢膜染色法 芽孢染色法 鞭毛染色法 染色涂片保存法 常用復(fù)染色方法 革蘭氏染色法 革蘭染色（Gram stain）最經(jīng)典、最常用的染色方法。通過革蘭染色將

8、所有細(xì)菌分為G+菌和G-菌兩大類。革蘭染色（Gram stain）最經(jīng)典、最常用的染色方法。革蘭氏染色的步驟1. 涂片2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約1520秒，后立即用流水沖洗。5. 復(fù)染：滴加番紅染色液，染35分鐘，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。革蘭氏染色的步驟1. 涂片革蘭染色結(jié)果紫色革蘭陽性菌紅色革蘭陰性菌革蘭染色結(jié)果紫色革蘭陽性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌影響革蘭染色的因素

9、操作因素涂片的厚薄；脫色時(shí)間的長(zhǎng)短。染液因素盧戈碘液放置時(shí)間過長(zhǎng)；95乙醇揮發(fā)；結(jié)晶紫與草酸銨混合時(shí)間太長(zhǎng)。細(xì)菌因素細(xì)菌種類；細(xì)菌菌齡等。影響革蘭染色的因素操作因素細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件革蘭氏染色法鑒別細(xì)菌革蘭氏染色法鑒別細(xì)菌抗酸染色法抗酸染色法是用于區(qū)分混合標(biāo)本中分枝桿菌屬細(xì)菌（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌）的鑒別染色方法?！驹怼客暾种U菌中含有分枝菌酸，能在加熱條件下與滲入細(xì)胞內(nèi)石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合，其細(xì)胞壁有阻止染料脫出作用。因此能抵抗鹽酸酒精脫色使菌體染成紅色，稱抗酸性細(xì)菌。非抗酸性細(xì)菌不含分枝菌酸，不能抵抗鹽酸酒精脫色，菌體被美藍(lán)復(fù)染成藍(lán)色?！救疽骸砍跞疽杭词克釓?fù)紅原液。脫色液、復(fù)染

10、液即堿性美藍(lán)液?？顾崛旧顾崛旧ㄊ怯糜趨^(qū)分混合標(biāo)本中分枝桿菌屬細(xì)菌（如結(jié)抗酸染色法【方法】將結(jié)核病人痰、麻風(fēng)病人鼻分泌物或麻風(fēng)病人皮膚刮取物，按涂片干燥固定過程制備涂片?！窘Y(jié)果】分枝桿菌呈紅色雜菌和背景物呈藍(lán)色?？顾崛旧ā痉椒ā繉⒔Y(jié)核病人痰、麻風(fēng)病人鼻分泌物或麻風(fēng)病人皮細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件異染顆粒染色法細(xì)菌異染顆粒是某些細(xì)菌（白喉?xiàng)U菌、鼠疫桿菌、結(jié)核桿菌等）常見的胞質(zhì)顆粒。奈瑟（Neisser）法是常用染色方法?！驹怼俊救疽骸考滓海簩⒚捞m0.1g溶于2ml無水乙醇，加5%冰醋酸5ml，再加蒸餾水至100ml，過濾備用。乙液：將俾斯麥褐1g溶于10ml無水乙醇，加蒸餾水至100ml

11、，過濾備用?！痉椒ā砍Ｒ?guī)制片后滴加甲液染1min，水洗。滴加乙液染1/2min，水洗，待干，鏡檢。異染顆粒染色法細(xì)菌異染顆粒是某些細(xì)菌（白喉?xiàng)U菌、鼠疫桿菌、結(jié)異染顆粒染色法【結(jié)果】菌體呈黃褐色，異染顆粒呈深藍(lán)色。【注意事項(xiàng)】由于異染顆粒是儲(chǔ)存營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)場(chǎng)所，因此就人工培養(yǎng)菌而言，應(yīng)注意培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)時(shí)間。一般認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)充分，顆粒多而大。營(yíng)養(yǎng)缺乏，顆粒少而小，甚至消失。如白喉?xiàng)U菌的培養(yǎng)，在培養(yǎng)基內(nèi)加入適量葡萄糖、血清及甘油有利于異染顆粒形成。異染顆粒染色法【結(jié)果】菌體呈黃褐色，異染顆粒呈深藍(lán)色。莢膜染色法莢膜是某些細(xì)菌分泌于胞壁外的一層較厚的粘稠性物質(zhì)。用普通培養(yǎng)基傳代細(xì)菌莢膜易丟失。莢膜染色可采

12、用動(dòng)物組織或組織液涂片。黑斯（Hiss）染色是常用的染色方法。【原理】【染液】甲液：將結(jié)晶紫或堿性復(fù)紅酒精飽和液5ml與95ml蒸餾水混合。乙液：20%硫酸銅水溶液?！痉椒ā吭谧匀桓稍锿科系渭蛹滓海⒒鸺訙厝?min，不水洗，直接滴加乙液沖去甲液，待干，鏡檢。莢膜染色法莢膜是某些細(xì)菌分泌于胞壁外的一層較厚的粘稠性物質(zhì)。莢膜染色法【結(jié)果】菌體和背景物呈藍(lán)紫色或紅色，莢膜呈淡藍(lán)紫色或淡紅色?！咀⒁馐马?xiàng)】不能加熱干燥或固定涂片，并避免水沖洗玻片，防止莢膜皺縮或脫失。莢膜莢膜染色法【結(jié)果】菌體和背景物呈藍(lán)紫色或紅色，莢膜呈淡藍(lán)紫色芽孢染色法芽孢染色可利用芽孢折光性強(qiáng)、不易著色特點(diǎn)，采用常溫單染色法，

13、用菌體顏色襯托亮圓芽孢?！救疽骸砍跞疽海?%孔雀綠水溶液。復(fù)染液：0.5%沙黃水溶液?！痉椒ā砍跞荆杭铀?滴3滴于小試管（0.75cm10cm）中，用接種環(huán)從培養(yǎng)基斜面上挑取較多菌苔于試管中，充分打勻，使成較濃稠菌液。加入初染液0.3ml0.4ml。將此管于沸水加熱15min20min。制備涂片：從試管中挑取菌液于潔凈玻片上，并涂成薄膜，待干后，通過火焰3次進(jìn)行固定。脫色：用水洗，使菌體脫色。復(fù)染：加復(fù)染液染色1min，水洗，待干后鏡檢。芽孢染色法芽孢染色可利用芽孢折光性強(qiáng)、不易著色特點(diǎn)，采用常溫芽孢染色法【結(jié)果】芽孢呈綠色，菌體呈紅色?！咀⒁馐马?xiàng)】菌液中應(yīng)含較多芽孢菌以保證涂片質(zhì)量。也可采用

14、先取菌制備涂片，再進(jìn)行初染脫色復(fù)染過程。但由于初染過程是用火焰直接加熱玻片，應(yīng)掌握好加熱溫度和加熱時(shí)間。芽孢染色法【結(jié)果】芽孢呈綠色，菌體呈紅色。鞭毛染色法鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官。由于其直徑只有10nm20nm，一般染色不能看到，故須先用媒染劑增粗鞭毛，再經(jīng)復(fù)染使其著色。【原理】【方法】涂片制備 染色：涂片通過火焰稍加熱，并趁熱用甲液覆蓋菌膜。將玻片離開火焰輕輕傾動(dòng)，見甲液由半透明變?yōu)椴煌该鳚鈧錉睿s4min以上）用稀酸液沖去甲液，水洗。加乙液后微微加熱玻片，見菌膜變黃（約3s左右），用稀酸沖去乙液，水洗。加丙液后立即用熱蒸餾水或自來水漂洗，然后常溫水洗，待干，鏡檢。鞭毛染色法鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器

15、官。由于其直徑只有10nm20鞭毛染色法【結(jié)果】菌體呈深紅色，鞭毛呈淺紅色?！咀⒁馐马?xiàng)】因甲液中雙氧水和三氯化鐵在空氣中時(shí)間過長(zhǎng)作用會(huì)降低，染色時(shí)，應(yīng)隨時(shí)少量添加二者。甲液媒時(shí)間短作用達(dá)不到，時(shí)間長(zhǎng)鞭毛可能過粗，操作可在媒染時(shí)間上加以調(diào)整。鞭毛染色法【結(jié)果】菌體呈深紅色，鞭毛呈淺紅色。負(fù)染色檢查法負(fù)染色法可觀察相對(duì)自然狀態(tài)下的細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)?！驹怼咳玖吓c活體標(biāo)本接觸時(shí)，由于染料帶負(fù)電荷與活體標(biāo)本表面所帶電荷性相似，故不具親和力，不能將菌體著色（死菌可被某些酸性染料如剛果紅著色）。而已著色的背景在顯微鏡下可襯托出透亮無色的菌體和莢膜的形態(tài)?！痉椒ā磕ū桨泛?堿性復(fù)紅法剛果紅法【應(yīng)用】用于觀察

16、活體標(biāo)本。如墨汁法觀察新型隱球菌，高倍鏡下可見圓形，厚壁，圍繞菌體的莢膜芽生現(xiàn)象。用于大致區(qū)別死菌和活菌數(shù)量。如剛果紅法。負(fù)染色檢查法負(fù)染色法可觀察相對(duì)自然狀態(tài)下的細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)。負(fù)染色檢查法負(fù)染色檢查法負(fù)染色檢查法【注意事項(xiàng)】菌液濃度與染液比例要適當(dāng)。如真菌菌液濃度應(yīng)低，細(xì)菌菌液濃度應(yīng)高。采用墨汁法要避免將高度電解物質(zhì)（如酸類）與其接觸，因它能使墨汁中膠體絮集，產(chǎn)生堆積沉淀現(xiàn)象，影響觀察效果。用載玻片與蓋玻片之間存有液體的濕片觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)防止液體外溢，必要時(shí)用蠟或凡士林封嚴(yán)四周。負(fù)染色檢查法【注意事項(xiàng)】菌液濃度與染液比例要適當(dāng)。如真菌菌細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察

17、細(xì)菌基本形態(tài)球菌細(xì)菌基本形態(tài)球菌細(xì)菌基本形態(tài)桿菌細(xì)菌基本形態(tài)桿菌細(xì)菌基本形態(tài)弧菌細(xì)菌基本形態(tài)弧菌細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)芽胞細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)芽胞細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)莢膜細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)莢膜細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)鞭毛細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)鞭毛食品和藥品中常見的細(xì)菌食品和藥品中常見的細(xì)菌腸桿菌科腸炎沙門氏菌傷寒沙門氏菌腸桿菌科腸炎沙門氏菌 金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus 金黃色葡萄球菌Staphylococcus aur鏈球菌屬釀膿鏈球菌Streptococcus pyogenes肺炎鏈球菌S.pneumoniae鏈球菌屬釀膿鏈球菌Streptococcus pyogene肉毒梭菌(Clostridium botuli

18、num)破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)肉毒梭菌(Clostridium botulinum)芽孢桿菌屬炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)枯草芽孢桿菌(B.subtilis)蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis)枯草芽孢桿菌(B.subtilis)蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)芽孢桿菌屬炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis假單胞菌屬假單胞菌屬霍亂弧菌vibrio cholerae霍亂弧菌vibrio cholerae幽門螺桿菌幽門螺桿菌乳桿菌屬嗜酸乳桿菌(Lactococcus acidophilus)乳乳桿菌(L.

19、lactis)保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)乳桿菌屬嗜酸乳桿菌(Lactococcus acidophi細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件嗜鹽桿菌屬(Halobacterium salinarium)嗜鹽球菌屬(H.morrhuae)嗜鹽桿菌屬(Halobacterium salinariu食品和藥品中常見的真菌曲霉屬青霉屬鐮刀菌屬毛霉根霉木霉交鏈孢屬單端孢霉屬頭孢霉屬酵母食品和藥品中常見的真菌曲霉屬木霉細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件急性病毒性胃腸炎由輪狀 、諾沃克、 類諾沃克、萼狀、星狀病毒引起。病毒性胃腸炎占美國(guó)發(fā)生的全部傳染性腹瀉的30%-40%，超過細(xì)菌和寄生

20、蟲性腹泄。常攻擊1-11月的嬰兒。乙肝、甲肝、戊肝、脊髓灰質(zhì)炎、朊病毒、慢病毒都可由水、食物傳播。食品和藥品中常見的病毒急性病毒性胃腸炎由輪狀 、諾沃克、 類諾沃克、萼狀、星狀病毒諾沃克病毒 乙肝病毒輪狀病毒星狀病毒諾沃克病毒 乙肝病毒輪狀病毒星狀病毒4 食品中常見的寄生蟲蛔蟲絳蟲囊蟲肝吸蟲（華枝睪吸蟲）：最嚴(yán)重的食源性寄生蟲旋毛蟲姜片蟲上述各種寄生蟲的蟲卵4 食品中常見的寄生蟲蛔蟲食品中常見的寄生蟲食品中常見的寄生蟲5 螨塵螨疥螨皮脂蠕螨體螨5 螨塵螨疥螨皮脂蠕螨體螨第二節(jié) 細(xì)菌培養(yǎng)法第二節(jié) 細(xì)菌培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)的目的是獲取純種、進(jìn)行鑒定與研究以及菌種的保存與傳代等。 運(yùn)用無菌操作技術(shù)

21、，提供適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)基質(zhì)（培養(yǎng)基），以及適宜的培養(yǎng)方法和條件是達(dá)到上述目的的關(guān)鍵。 細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)的目的是獲取純種、進(jìn)行鑒定與研究以及菌種的保無菌技術(shù) 操作要點(diǎn)1無菌室在使用前，用紫外燈照射30min60min進(jìn)行空氣消毒。2在進(jìn)行接種、傾注瓊脂平板時(shí)均須在無菌室、超凈工作臺(tái)或接種罩內(nèi)操作。3用接種環(huán)分離和移種細(xì)菌時(shí)，使用前后均需采用火焰滅菌。4凡打開或關(guān)閉無菌試管和燒瓶時(shí)，管口通過火焰2次3次，以殺滅可能吸附于管口或瓶口的細(xì)菌。開啟后的試管和燒燒應(yīng)盡量靠近火焰，且瓶口部切忌向上和長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中。操作時(shí)，不可造成含菌材料污染臺(tái)面和其它物體。無菌技術(shù) 操作要點(diǎn)無菌技術(shù) 操作要點(diǎn)5所用的物品均應(yīng)

22、進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，在使用過程中不得與未經(jīng)滅菌的物品接觸。6對(duì)病人采血或作穿刺、接種等，局部必須進(jìn)行消毒；自動(dòng)物體內(nèi)抽血或移種時(shí)，應(yīng)先剪去局部毛后，再進(jìn)行常規(guī)消毒。7工作完畢，室內(nèi)空氣用紫外燈照射30min、實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)真消毒洗手。8因?yàn)樯髟斐晌廴緯r(shí)，應(yīng)及時(shí)用消毒液處理。無菌技術(shù) 操作要點(diǎn)細(xì)菌培養(yǎng)培養(yǎng)基的制備細(xì)菌的接種和培養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌種的保存及保管細(xì)菌培養(yǎng)培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基（culture medium）是指人工配制的供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是用人工的方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按照各種細(xì)菌的需要而組合成的混合營(yíng)養(yǎng)料。 主要用途：繁殖及分離純種細(xì)菌；傳代和保存；鑒別細(xì)菌的種屬；研究細(xì)菌的

23、生理及生化特性；制造菌苗、疫苗或其它微生物制劑。 培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基（culture medium）是指人工培養(yǎng)基培養(yǎng)基幾乎是一切對(duì)微生物進(jìn)行研究和利用工作的基礎(chǔ)任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長(zhǎng)所需要六大營(yíng)養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長(zhǎng)因子、水任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理；常規(guī)高壓蒸汽滅菌： 1.05kg/cm2,121.315-30分鐘；0.56kg/cm2,112.615-30分鐘培養(yǎng)基培養(yǎng)基幾乎是一切對(duì)微生物進(jìn)行研究和利用工作的基礎(chǔ)任何培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 蛋白胨（peptone） 、肉浸液 、牛肉浸膏（beef extract） 、酵母浸膏（yeast ext

24、ract） 、糖類 、血液 、雞蛋和動(dòng)物血清 、生長(zhǎng)因子 、無機(jī)鹽類 。水分凝固物質(zhì) 瓊脂（agar）、明膠、蛋白、血清等 抑制劑和指示劑 抑制劑和指標(biāo)劑不是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需物質(zhì)，而是用于選擇、鑒定細(xì)菌和結(jié)果判斷。 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 培養(yǎng)基的種類 （一）按用途的分類 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basal medium） 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基（nutrient medium） 增菌培養(yǎng)基（enrichment medium） 選擇性培養(yǎng)基（selective medium） 鑒別培養(yǎng)基（differential medium） 厭氧培養(yǎng)基（anaerobic medium） （二）按物理性狀分類液體培養(yǎng)基（l

25、iquid medium）半固體培養(yǎng)基（semisolid medium）固體培養(yǎng)基（solid medium）（三）按成分分類合成培養(yǎng)基（synthetic medium）天然培養(yǎng)基（undefined medium）培養(yǎng)基的種類 （一）按用途的分類（二）按物理性狀分類（三）按按用途不同分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，與培養(yǎng)基中的特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特

26、征變化牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括血液、血清、酵母浸膏、動(dòng)植物組織液等在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)按用途不同分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需按物理狀態(tài)不同分類solid medium固體培養(yǎng)基liquid medium液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%瓊脂含量一般為0.2%-0.7%不加任何凝固劑semisolid medium半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、

27、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究 按物理狀態(tài)不同分類solid medium固體培養(yǎng)基liqu 各種培養(yǎng)基固體基斜面半固體 各種培養(yǎng)基固體基斜面半固體臨床常用的培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：肉湯，普通瓊脂平板營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：血液瓊脂培養(yǎng)基，巧克力血培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：SS瓊脂培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：EMB瓊脂培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基臨床常用的培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：肉湯，普通瓊脂平板培養(yǎng)基制備的一般程序 培養(yǎng)基種類雖多，但其制備的基本程序是相似的，即調(diào)配、溶化、矯正pH、過濾澄清、分裝、滅菌、檢定七個(gè)步驟。保存：培養(yǎng)基的貯存主要是防止干涸、變質(zhì)和污染三個(gè)方面。 培養(yǎng)

28、基制備的一般程序 培養(yǎng)基種類雖多，但其制備的基本程序是相細(xì)菌培養(yǎng)基的配制和滅菌細(xì)菌培養(yǎng)基的配制和滅菌二、細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù) 大多數(shù)細(xì)菌都可用人工的方法進(jìn)行培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)繁殖，以便進(jìn)一步觀察和研究各種生物學(xué)特性。培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，根據(jù)研究的目的和細(xì)菌生長(zhǎng)的需要，要采用不同的接種技術(shù)和培養(yǎng)方法。接種技術(shù)一般分為分離培養(yǎng)法和純種細(xì)菌接種法 二、細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù) 大多數(shù)細(xì)菌都可用人工的方法進(jìn)行培養(yǎng)，（一）接種工具接種工具有接種環(huán)、接種針、玻璃涂布棒 接種針用于穿刺接種細(xì)菌，接種環(huán)用于固體、液體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種。L型玻璃棒：用于瓊脂平板涂布接種細(xì)菌。接種針用于穿刺接種細(xì)菌，接種環(huán)用于固體、液體培養(yǎng)基的細(xì)菌接

29、種。L型玻璃棒：用于瓊脂平板涂布接種細(xì)菌。（一）接種工具接種工具有接種環(huán)、接種針、玻璃涂布棒 接種針用（二）接種環(huán)境接種罩、生物安全柜或無菌室內(nèi)進(jìn)行. 三級(jí)生物安全柜（二）接種環(huán)境三級(jí)生物安全柜（三）細(xì)菌接種的基本程序殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本滅菌接種環(huán)接種（三）細(xì)菌接種的基本程序殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺細(xì)菌接種的基本程序取菌種試管和待接種的斜面試管滅菌接種環(huán)細(xì)菌接種的基本程序取菌種試管和待接種的斜面試管滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本沾取標(biāo)本接種接種接種后滅菌接種環(huán)接種后滅菌接種環(huán)（四）細(xì)菌的接種方法平板劃線接種法 斜面接種法 半固體

30、培養(yǎng)基接種法 液體培養(yǎng)基接種法 （四）細(xì)菌的接種方法平板劃線接種法 平板劃線接種法目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌。方法：曲線劃線法分區(qū)劃線法傾注平板法平板涂布接種法平板劃線接種法目的：使混合的細(xì)菌呈單方法：平板劃線接種法1曲線劃線接種法多用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)咽拭、棉拭所取的培養(yǎng)物。方法：用接種環(huán)蘸取標(biāo)本少許，或咽拭、棉拭培養(yǎng)物直接輕輕涂布于平板上1/5處，然后左右來回以曲線形式作連續(xù)劃線接種，注意線與線之間既要留有適當(dāng)?shù)木嚯x，又要盡可能地利用效面積 。平板劃線接種法1曲線劃線接種法方法：平板劃線接種法2分區(qū)劃線接種法 適用于含菌量較多的標(biāo)本。第一區(qū)劃線滅菌接

31、種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)平板劃線接種法2分區(qū)劃線接種法 第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)1234接種方法培養(yǎng)結(jié)果1321234接種方法培養(yǎng)結(jié)果132注意事項(xiàng)：1. 區(qū)和區(qū)之間要滅菌2. 區(qū)不要接上區(qū)3. 用力適當(dāng)，不要?jiǎng)澠骗傊砻?. 注意無菌操作1. 區(qū)和區(qū)之間要滅菌2. 區(qū)不要接上區(qū)3. 用力適當(dāng)，不要?jiǎng)澠骗傊砻?. 注意無菌操作注意事項(xiàng)：1. 區(qū)和區(qū)之間要滅菌2. 區(qū)不要接上平板劃線接種法3傾注平板法 用于細(xì)菌計(jì)數(shù)。被檢材料內(nèi)若含有兩種或兩種以上的細(xì)菌時(shí)，可借溶化的瓊脂將細(xì)菌沖散；待瓊脂冷凝后，已分散的細(xì)菌被固定而在原地形成菌落。 平板劃線接種法3傾注平板法被檢材料內(nèi)若含

32、有兩種或兩種平板劃線接種法4.平板涂布接種法：用于測(cè)定標(biāo)本中活菌數(shù)和藥敏實(shí)驗(yàn)細(xì)菌接種。 平板劃線接種法4.平板涂布接種法：斜面接種法1劃線接種法 2穿刺劃線接種法 瓊脂斜面培養(yǎng)基接種法 主要用于純培養(yǎng)和保存菌種，或細(xì)菌的某些鑒別試驗(yàn)。 斜面接種法1劃線接種法 2穿刺劃線接種法 瓊斜面接種法1劃線接種法 2穿刺劃線接種法 瓊脂斜面培養(yǎng)基接種法 主要用于純培養(yǎng)和保存菌種，或細(xì)菌的某些鑒別試驗(yàn)。 斜面接種法1劃線接種法 2穿刺劃線接種法半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基穿刺接種法 穿刺接種法 ，用于保存菌種或觀察細(xì)菌動(dòng)力。半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基穿刺接種法 液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法可觀察細(xì)

33、菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象或用作生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。 液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法可觀察細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)細(xì)菌的接種方法細(xì)菌的接種方法（五）細(xì)菌的培養(yǎng)方法將上述已接種細(xì)菌的培養(yǎng)基置37恒溫培養(yǎng)箱中孵育1824h，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象。根據(jù)細(xì)菌對(duì)氧氣的需求不同，可將細(xì)菌培養(yǎng)分為需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法、厭氧培氧法。（五）細(xì)菌的培養(yǎng)方法將上述已接種細(xì)菌的培養(yǎng)基置37恒溫培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)方法需氧培養(yǎng)法（一般培養(yǎng)）適用于需氧菌和兼性厭氧菌培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度：37（采用恒溫培養(yǎng)箱）。培養(yǎng)時(shí)間：1824h。二氧化碳培養(yǎng)法適用于奈瑟菌屬和布魯菌屬等苛養(yǎng)菌培養(yǎng)?？刹捎脿T缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱、化學(xué)法。細(xì)菌培養(yǎng)方法需氧培養(yǎng)

34、法（一般培養(yǎng)）厭氧培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法：厭氧菌的培養(yǎng)基分為二類，即液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。 厭氧培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法：厭氧菌的培養(yǎng)基分為二類，即液體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基 在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)進(jìn)行如下工作：（1）煮沸培養(yǎng)基10min15min，急速冷卻，立即接種。（2）在培養(yǎng)基中加入0.05%0.1%的瓊脂，使對(duì)流現(xiàn)象減少到最低限度。不適宜于絕對(duì)厭氧菌的培養(yǎng)。（3）厭氧菌初代培養(yǎng)，需培養(yǎng)48h后才能初步觀察。若標(biāo)本直接鏡檢為陽性，而48h培養(yǎng)后不見生長(zhǎng)，可從液體培養(yǎng)基中再轉(zhuǎn)種平板現(xiàn)象。液體培養(yǎng)基 在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)進(jìn)行如下工作：皰肉培養(yǎng)基（cooked meat medium） 肉渣中含有谷胱甘肽及不飽和脂肪酸，前者可發(fā)生

35、氧化還原發(fā)應(yīng)，降低環(huán)境中的氧化勢(shì)能，后者經(jīng)肌肉中正鐵血紅素觸酶作用后，能吸收水環(huán)境中的氧氣，加之液面用凡士林封閉，造成缺氧狀態(tài)。接種時(shí)，先將培養(yǎng)基表面凡士林融化，斜持試管片刻，使凡士林粘附于管壁一側(cè)，種入標(biāo)本，使與肉渣充分混合，再加熱溶化凡士林，使之覆蓋在培養(yǎng)基表面，置孵箱中培養(yǎng)。皰肉培養(yǎng)基（cooked meat medium） 肉渣中含固體培養(yǎng)基厭氧罐培養(yǎng)法 厭氧氣袋法 培養(yǎng)箱法 抽氣換氣法 氣體發(fā)生袋法（Gas-Pak法） 厭氧培養(yǎng)箱厭氧產(chǎn)氣袋厭氧罐固體培養(yǎng)基厭氧罐培養(yǎng)法 厭氧氣袋法 培養(yǎng)箱法 抽氣換氣法 三、細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象固體培養(yǎng)基上細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

36、 細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象三、細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象固體培養(yǎng)基上細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象1、細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落（colony） 定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。純培養(yǎng)（pure culture） ：從固體培養(yǎng)基上挑一個(gè)菌落，移種到另一個(gè)培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)出來的細(xì)菌即為純種，也稱為純培養(yǎng) 。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性。菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。1、細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落（colony） 菌落與菌苔菌落菌苔菌落與菌苔菌落菌苔細(xì)菌菌落的特征一般都較小，菌落與培養(yǎng)基結(jié)合不緊密，用接種針容易

37、挑起，多數(shù)表面較光滑、濕潤(rùn)、較粘稠，易挑取，質(zhì)地均勻，色澤多樣。細(xì)菌菌落的特征一般都較小，菌落與培養(yǎng)基結(jié)合不緊密，用接種針容單菌落（clone)菌落（R型）菌苔(lawn)細(xì)菌的群體形態(tài)單菌落（clone)菌落（R型）菌苔(lawn)細(xì)菌的群體形細(xì)菌生物學(xué)檢驗(yàn)基本技術(shù)課件細(xì)菌菌落特征：常見的平面正面圖細(xì)菌菌落特征：常見的平面正面圖細(xì)菌菌落特征：剖面圖細(xì)菌菌落特征：剖面圖菌落的三個(gè)類型1.光滑型菌落（Smooth type Colony） 又稱S型2.粗糙型菌落（Rough type Colony） 又稱R型3.粘液型菌落（Mucoid type Colony） 又稱M型菌落的三個(gè)類型1.光滑型

38、菌落（Smooth type Co菌落（S型）culture plate菌落（S型）culture plate菌落(R型)菌落(R型)影響菌落形態(tài)的因素各種微生物在一定條件下形成的菌落，其形態(tài)特征有一定的穩(wěn)定性和專一性，因而可以作為識(shí)別、鑒定菌種的一個(gè)依據(jù)，但也受某些因素的影響，觀察時(shí)應(yīng)加以注意。1、鄰近菌落2、培養(yǎng)時(shí)間3、培養(yǎng)基成分4、培養(yǎng)溫度影響菌落形態(tài)的因素各種微生物在一定條件下形成的菌落，其形態(tài)特雜菌污染巧克力平板雜菌污染巧克力平板菌落生長(zhǎng)示意圖菌苔(lawn)菌落生長(zhǎng)示意圖菌苔(lawn)鑒別及選擇培養(yǎng)基EMB瓊脂平板上大腸菌菌落具有金屬光澤SS瓊脂平板上大腸菌為粉紅菌落鑒別及選擇培

39、養(yǎng)基EMB瓊脂平板上大腸菌菌落具有金屬光澤SS瓊2、細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象生長(zhǎng)特性包括：發(fā)育程度：以有無生長(zhǎng)，微弱、中等、旺盛來表示。渾濁度：有無渾濁以及渾濁的程度（以混、中等、微混、透明表示）；均勻渾濁、有顆粒；絮狀生長(zhǎng)。液體表面性狀：有無表面生長(zhǎng)及生長(zhǎng)的性狀，如膜狀（厚?。?、環(huán)狀、皺狀或呈顆粒狀。其它：有無色素，有無氣味，有無產(chǎn)酸情況，有無氣體產(chǎn)生。2、細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象生長(zhǎng)特性包括：細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象沉淀生長(zhǎng)渾濁生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象沉淀生長(zhǎng)渾濁生長(zhǎng)表面生長(zhǎng) 細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌膜菌沉淀均勻渾濁對(duì)照 細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌膜菌

40、沉淀均勻渾濁對(duì)照3、細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺線邊緣模糊。無鞭毛細(xì)菌：只沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線邊緣清晰。3、細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有鞭毛細(xì)菌：細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有動(dòng)力 現(xiàn)象無動(dòng)力 現(xiàn)象細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有動(dòng)力無動(dòng)力 四、菌種的保存和保管菌種的保存菌種的保管四、菌種的保存和保管菌種的保存（一）菌種的保存必須注意以下問題：（1）控制傳代次數(shù)（2）用典型菌落傳代（3）通過易感動(dòng)物恢復(fù)固有特性 菌種保存方法：固體培養(yǎng)基保存法 半固體穿刺保存法 干燥保存法 液氮超低溫保存 （一）菌種的保存必須注意以下問題：菌種保存方法：

41、固體培養(yǎng)基保存法 普通瓊脂斜面保存法 適合于營(yíng)養(yǎng)要求不高細(xì)菌的保存。 血瓊脂斜面保存法 適合于對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高細(xì)菌的保存 。雞蛋斜面保存法 適合保存Vi抗原的沙門氏菌屬細(xì)菌及含表面抗原的細(xì)菌 固體培養(yǎng)基保存法 普通瓊脂斜面保存法半固體穿刺保存法適合于腸道桿菌及葡萄球菌等一般細(xì)菌的保存。 當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)良好后，在其表面加一層無菌的液體石蠟，以全部浸泡后高出1cm為宜，在4冰箱中，一般細(xì)菌可保存數(shù)月。凡需特殊培養(yǎng)的細(xì)菌，則分別選用各自適宜的培養(yǎng)基進(jìn)行保存。 半固體穿刺保存法適合于腸道桿菌及葡萄球菌等一般細(xì)菌的保存。 干燥保存法干燥保存法是將細(xì)菌體內(nèi)的水分蒸發(fā)掉，使細(xì)菌處于代謝停滯的狀態(tài)，從而達(dá)到長(zhǎng)期保存的

42、目的。干燥保存法有多種，如砂土干燥保存法，明膠保存等，其中最好的方法是冷凍真空干燥保存法 。 干燥保存法干燥保存法是將細(xì)菌體內(nèi)的水分蒸發(fā)掉，使細(xì)菌處于代謝干燥保存法準(zhǔn)備安瓿管制備脫脂牛奶 制備菌液 分裝菌液 預(yù)凍 真空干燥 封管 復(fù)蘇培養(yǎng) 干燥保存法準(zhǔn)備安瓿管預(yù)凍 液氮超低溫保存 將菌種保存在-150196超低溫的液氮中。材料 ：菌種 、培養(yǎng)基 、設(shè)備 、試劑 。方法和步驟 ： 準(zhǔn)備安瓿管 制備保護(hù)劑 制備細(xì)菌懸液 加保護(hù)劑 分裝菌液 凍結(jié) 保存 復(fù)蘇培養(yǎng) 液氮超低溫保存 將菌種保存在-150196超低溫的液氮（二）菌種的保管一般細(xì)菌大多保存在4冰箱中，但霍亂弧菌、綠膿假單胞菌及糞產(chǎn)堿桿菌需在

43、室溫保存，而腦膜炎奈瑟氏菌、淋病奈氏菌及初次分離的流感嗜血桿菌需保存于37孵箱中。保管的菌種應(yīng)做好鑒定記錄，設(shè)專人負(fù)責(zé)，建立菌種登記本。非干燥菌種注意定期傳代或必要的重復(fù)鑒定，以防菌種變異。（二）菌種的保管一般細(xì)菌大多保存在4冰箱中，但霍亂弧菌、綠第三節(jié) 細(xì)菌的生化鑒定第三節(jié) 細(xì)菌的生化鑒定細(xì)菌常見的生化反應(yīng)糖類代謝試驗(yàn)蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn) 碳源和氮源利用試驗(yàn) 呼吸酶類試驗(yàn) 其它酶類試驗(yàn) 糖類發(fā)酵試驗(yàn)氧化-發(fā)酵試驗(yàn)（OF試驗(yàn)） 甲基紅（methyl red, MR）試驗(yàn) V-P（Voges-Proskauer）試驗(yàn) -半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)） 吲哚（indole）試驗(yàn)（又稱靛基質(zhì)試驗(yàn)）2氨基酸

44、脫羧酶試驗(yàn)3精氨酸雙水解酶試驗(yàn)4苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)5硫化氫試驗(yàn)6明膠液化試驗(yàn)7尿素酶試驗(yàn)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)2丙二酸鹽利用試驗(yàn)3醋酸鹽利用試驗(yàn)4馬尿酸鈉水解試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)2過氧化氫酶（觸酶）試驗(yàn)3硝酸鹽還原試驗(yàn)卵磷脂酶試驗(yàn)2DNA酶試驗(yàn)3凝固酶試驗(yàn)細(xì)菌常見的生化反應(yīng)糖類代謝試驗(yàn)糖類發(fā)酵試驗(yàn)吲哚（indole糖發(fā)酵試驗(yàn)原理 多糖單糖丙酮酸酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)pH 指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、半固體發(fā)酵管、微量發(fā)酵管試劑：酚紅、溴甲酚紫等結(jié)果:培養(yǎng)基呈酸性變色應(yīng)用：觀察細(xì)菌對(duì)糖度的分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定糖類代謝實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)原理糖類代謝實(shí)驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)

45、象結(jié)果描述酸性變色、有氣泡分解糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣酸性變色、無氣泡分解糖產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣培養(yǎng)基不變色不分解糖糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述酸性變色、有氣泡分解糖糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基pH維持在4.4以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應(yīng)。此為甲基紅試驗(yàn)陽性。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水試劑：甲基紅試劑結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌糖類代謝實(shí)驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步生成大量混合酸葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試

46、劑培養(yǎng)基變紅甲基紅試驗(yàn)葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)（V-P試驗(yàn)）原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結(jié)合，生成紅色化合物。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色：應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌糖類代謝實(shí)驗(yàn)（V-P試驗(yàn)）原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅VP試驗(yàn)脫酸葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅

47、VP試驗(yàn)葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅脫酸葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸p蛋白質(zhì)類代謝試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)苯丙氨酸脫氨試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)類代謝試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。培養(yǎng)基：蛋白胨水試劑：靛基質(zhì)試劑（含對(duì)二甲基氨基苯甲醛）結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+ 培養(yǎng)基液面為黃色： 應(yīng)用：用于腸道桿菌的鑒定蛋白質(zhì)

48、代謝實(shí)驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)原理：細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生靛基質(zhì)試驗(yàn)原理色氨酸酶色氨酸 靛基質(zhì)（吲哚） 玫瑰靛基質(zhì)（玫瑰吲哚）對(duì)二甲基氨基苯甲醛靛基質(zhì)試驗(yàn)原理色氨酸酶色氨酸 靛基質(zhì) 玫瑰靛基質(zhì)對(duì)二甲基靛基質(zhì)試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色絡(luò)合物。培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基結(jié)果：培養(yǎng)基 變黑 為陽性，不變黑為陰性應(yīng)用：常用于腸道桿菌的鑒定蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫苯丙氨酸脫氨實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，可使培養(yǎng)基中的苯丙氨酸脫氨，形成苯丙酮酸

49、，后者與三氯化鐵作用，形成綠色化合物。培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂試劑：10三氯化鐵結(jié)果：加入試劑后培養(yǎng)基呈現(xiàn)綠色為陽性應(yīng)用：多用于腸道桿菌的鑒定蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)苯丙氨酸脫氨實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，可使培養(yǎng)基苯丙氨酸脫氨試驗(yàn)原理苯丙氨酸苯丙氨酸脫氨酶苯丙酮酸10三氯化鐵綠色化合物苯丙氨酸脫氨試驗(yàn)原理苯丙氨酸苯丙氨酸脫氨酶苯丙酮酸10三氯尿素酶試驗(yàn)原理：產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基試劑：酚紅指示劑結(jié)果：培養(yǎng)基變紅：+ 培養(yǎng)基不變色應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒定蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)原理：產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨尿素酶試驗(yàn)原理

50、尿素尿素酶氨+CO2培養(yǎng)基pH升高酚紅呈堿性變色尿素酶試驗(yàn)原理尿素尿素酶氨+CO2培養(yǎng)基pH升高酚紅呈堿性變枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽 作為唯一碳源，細(xì)菌生長(zhǎng)過程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應(yīng)。培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基試劑：溴麝香草酚藍(lán)（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍(lán)色）結(jié)果：培養(yǎng)基變藍(lán)：+ 培養(yǎng)基不變色：應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒別枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香草酚藍(lán) 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍(lán)培養(yǎng)

51、基枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香糖類代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法結(jié)果注意事項(xiàng)糖類發(fā)酵 試驗(yàn) 鑒定細(xì)菌糖發(fā)酵培養(yǎng)基接種 、培養(yǎng)顏色變化、產(chǎn)氣無菌氧化-發(fā)酵試驗(yàn)（OF試驗(yàn)） 區(qū)分細(xì)菌的代謝類型 穿刺接種、培養(yǎng) 顏色變化一支接種后滴加溶化的無菌凡士林甲基紅（MR）試驗(yàn) 腸桿菌科內(nèi)細(xì)菌的鑒別 接種葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，35培養(yǎng)23d 紅色為陽性，桔紅色為弱陽性，黃色為陰性。 V-P試驗(yàn) 區(qū)別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌 Barritt氏法紅色為陽性 -半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)） 遲緩發(fā)酵乳糖的細(xì)菌之快速鑒定黃色為陽性反應(yīng) 大量接種培養(yǎng)物 ONPG試驗(yàn)溶液必須有適當(dāng)?shù)木彌_ 產(chǎn)

52、生黃色素的細(xì)菌不宜做此試驗(yàn) 糖類代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法結(jié)果注意事項(xiàng)糖類發(fā)酵鑒定蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法 結(jié)果吲哚試驗(yàn)（靛基質(zhì)試驗(yàn)） 腸桿菌科細(xì)菌的鑒定純培養(yǎng)物接種蛋白胨水培養(yǎng)基，35培養(yǎng)24h48h，沿管壁徐徐加入Kovac氏試劑或歐氏試劑0.5ml，分為兩層，觀察。兩層液體交界處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性。氨基酸脫羧 酶試驗(yàn)通過檢測(cè)細(xì)菌對(duì)氨基酸之羧基的分解能力來鑒別細(xì)菌待檢菌接種于氨基酸培養(yǎng)基及對(duì)照培養(yǎng)基，35培養(yǎng)14d培養(yǎng)基由黃色變紫色為陽性，黃色為陰性，對(duì)照（無氨基酸）為黃色。精氨酸雙水 解酶試驗(yàn)?zāi)c桿菌科的鑒定、假單胞菌屬的鑒定 含精氨酸的氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及

53、對(duì)照培養(yǎng)基。指示劑顏色轉(zhuǎn)為堿性時(shí)為陽性。即溴甲酚紫轉(zhuǎn)為紫色，酚紅轉(zhuǎn)為紅色。苯丙氨酸脫 氨酶試驗(yàn) 腸桿菌科 細(xì)菌被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂斜面須在5min內(nèi)作出判斷，出現(xiàn)綠色為陽性。蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法 結(jié)果腸桿菌蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法結(jié)果硫化氫試驗(yàn) 檢測(cè)細(xì)菌對(duì)含硫化合物分解能力待檢菌接種三糖鐵培養(yǎng)基，35培養(yǎng)1-2d。醋酸鉛試紙培養(yǎng)基培養(yǎng)基變黑色為陽性。 試紙呈黑色為陽性。 明膠液化試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)菌能否液化明膠將待檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，20培養(yǎng)57d，觀察。半固體培養(yǎng)基不再凝固為陽性。尿素酶 試驗(yàn)?zāi)c桿菌科的鑒定將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基，35培養(yǎng)1824h時(shí)，

54、觀察結(jié)果，陰性應(yīng)繼續(xù)觀察4d。培養(yǎng)基變紅為陽性，不變?yōu)殛幮缘鞍踪|(zhì)代謝試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法結(jié)果硫化氫檢測(cè)細(xì)菌對(duì)含碳源和氮源利用試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法 結(jié)果檸檬酸鹽利用試驗(yàn)常用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。被檢菌接種于檸檬酸鹽瓊脂平板上，35培養(yǎng)14d，觀察。培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钐m色為陽性，不變色為陰性。丙二酸鹽利用試驗(yàn)用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定被檢菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基，于35培養(yǎng)2448h后觀察結(jié)果。培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色為陽性，顏色無變化為陰性。醋酸鹽利用試驗(yàn)用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定將被檢菌接種于醋酸鹽培養(yǎng)基上，于35培養(yǎng)7d，逐日觀察結(jié)果。斜面上有菌落生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變?yōu)樗{(lán)色為陽性。馬尿酸鈉水

55、解試驗(yàn)用于鏈球菌的鑒定（1）三氯化鐵法（2）茚三酮法（1）出現(xiàn)穩(wěn)定的沉淀物為陽性，輕搖后沉淀物溶解為陰性（2）出現(xiàn)紫色為陽性。 碳源和氮源利用試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)方法 結(jié)果呼吸酶類試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)方法 結(jié)果氧化酶 試驗(yàn)可用于弧菌科，奈瑟氏菌屬，假單胞菌屬細(xì)菌的鑒定（1）取濾紙片沾取待測(cè)菌落少許，加試劑一滴，觀察顏色變化。（2）用滴管吸取試劑，直接將一滴滴在待測(cè)菌菌落上，觀察顏色變化。陽性者立即呈現(xiàn)粉紅色或紅色，顏色逐漸變深至深紫色。過氧化氫酶（觸酶） 試驗(yàn)用于革蘭氏陽性球菌的初步分群挑取1環(huán)固體培養(yǎng)基上的待測(cè)菌菌落，放于潔凈玻片上或試管內(nèi)，滴加3%過氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果。30

56、s內(nèi)有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性，無氣泡產(chǎn)生者為陰性。 硝酸鹽還原試驗(yàn)細(xì)菌鑒定 待測(cè)菌株接種到硝酸鹽培養(yǎng)基中，351824h培養(yǎng)后，加入0.1ml甲，乙液等量混合液于試管內(nèi)，觀察結(jié)果。出現(xiàn)紅色為陽性，無顏色變化為陰性。呼吸酶類試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)名稱實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)方法 結(jié)果可用于其它酶類試驗(yàn)卵磷脂酶試驗(yàn) ：用于細(xì)菌的鑒定 DNA酶試驗(yàn) ：細(xì)菌鑒定 凝固酶試驗(yàn) ：常用于鑒別葡萄球菌 其它酶類試驗(yàn)卵磷脂酶試驗(yàn) ：用于細(xì)菌的鑒定 細(xì)菌生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)細(xì)菌生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)第四節(jié) 藥物敏感試驗(yàn)第四節(jié) 藥物敏感試驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn)（drug sensitivity test）是指在體外測(cè)定藥物抑制或殺死細(xì)菌能力的試驗(yàn)。目的：指導(dǎo)臨床

57、醫(yī)師準(zhǔn)確選藥，避免盲目追求大劑量治療造成藥物中毒，或嚴(yán)重感染時(shí)給藥劑量不足而耽誤治療；進(jìn)行菌株耐藥的流行病學(xué)調(diào)查，以了解致病菌耐藥性的變遷情況，以便在宏觀上控制耐藥菌的發(fā)生、擴(kuò)散和發(fā)展；進(jìn)行耐藥菌監(jiān)測(cè)，為醫(yī)院感染控制部門提供防治耐藥菌株的依據(jù)；進(jìn)行細(xì)菌耐藥機(jī)理的研究，新藥研究及評(píng)估。 藥物敏感試驗(yàn)（drug sensitivity test）一、藥敏試驗(yàn)種類1、 紙片擴(kuò)散法2、稀釋法 3、E測(cè)定法（epsilometer test.E test）4、自動(dòng)化藥敏測(cè)定儀5、分子生物學(xué)方法一、藥敏試驗(yàn)種類1、 紙片擴(kuò)散法紙片擴(kuò)散法 將浸有抗菌藥物的濾紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四

58、周擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，因而在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制而形成一個(gè)抑菌環(huán)。 紙片擴(kuò)散法 將浸有抗菌藥物的濾紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，稀釋法 將一濃度的抗菌藥物進(jìn)行一系列的不同倍數(shù)稀釋通常為雙倍稀釋后，與一定濃度的被試菌株混合，經(jīng)培養(yǎng)后觀察最低抑菌濃度即MIC（minimal inhibitoryconcentration）。用肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)試管內(nèi)肉湯濁度判斷結(jié)果者稱“試管稀釋法”。用瓊脂平板進(jìn)行試驗(yàn)，以平板中有無菌落生長(zhǎng)判斷結(jié)果，稱“瓊脂稀釋法”。 稀釋法 將一濃度的抗菌藥物進(jìn)行一系列的不同倍數(shù)稀釋通常為雙倍E測(cè)定法 將抗菌藥物放置于5mmx50mm的不透明薄型塑料帶

59、上，其濃度按log2梯度遞減，共含15個(gè)不同稀釋度的抗菌藥。平板反面是相應(yīng)的藥物濃度標(biāo)記，將含藥塑料帶代替抗生素紙片，其余操作步驟與瓊脂擴(kuò)散法相同。 E測(cè)定法 將抗菌藥物放置于5mmx50mm的不透明薄型塑料帶藥敏試驗(yàn)的種類 根據(jù)測(cè)試菌株的種類不同，藥敏實(shí)驗(yàn)又分為：需氧菌及兼性厭氧菌藥敏試驗(yàn)：包括一般藥敏試驗(yàn)和聯(lián)合藥敏試驗(yàn)；厭氧菌藥敏試驗(yàn)結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)真菌藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)的種類 根據(jù)測(cè)試菌株的種類不同，藥敏實(shí)驗(yàn)又分為：紙片擴(kuò)散法稀釋法聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)需氧菌及兼性厭氧菌的藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法需氧菌及兼性厭氧菌的藥敏試驗(yàn)需氧菌及兼性厭氧菌的藥敏試驗(yàn)材料 ：培養(yǎng)基 Mueller-Hinton（M-H）培養(yǎng)基 、干燥抗菌藥物紙片 接種物的準(zhǔn)備 試驗(yàn)步驟 結(jié)果判讀 紙片擴(kuò)散法 需氧菌及兼性厭氧菌的藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法 接種物的準(zhǔn)備選擇瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落45個(gè)，用接種環(huán)挑其上部移至4ml5ml大豆蛋白消化液中，置3537中培養(yǎng)2h8h,用生理鹽水或肉湯校正菌液濃度與0.5麥?zhǔn)瞎?。在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)不良的細(xì)菌，如流感嗜血菌，淋病奈瑟氏菌，可直接從培養(yǎng)18h24h的平板上挑取菌落，用生理鹽水或肉湯中制備接種菌液，立即與濁管比較，使達(dá)到約1.5億菌/ml的標(biāo)準(zhǔn)濁度。接種物的準(zhǔn)備選擇瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落45個(gè)，用接種環(huán)挑試驗(yàn)步驟用無菌棉拭子蘸取已制備的菌液（將多余菌液靠管壁擠