石斛組織培養(yǎng)

1、一、增殖、分化培養(yǎng)基的篩選1材料與方法1.1材料原球莖為實驗室培養(yǎng)（MS+4.0mM NAA+10%香蕉）1.2方法1.2.1培養(yǎng)基的配制表1影響因素與水平的設定水平培養(yǎng)基NAA(mg/L)馬鈴薯提取液1MS00%21/2MS0.2520%3-0.5-表2培養(yǎng)基試驗號培養(yǎng)基:NAA(mg/l)馬鈴薯提取液pH重復數(shù)11125.801021215.811031325.831042115.811052225.801062315.7910注：10各三角瓶，大瓶4個（容積200ml），小瓶6個（容積100ml）；大瓶注入培養(yǎng)基25ml，小瓶瓶中注入15ml培養(yǎng)基。1.2.2接種量超凈臺上，接入原球莖，

2、接入量如表3所示：表3各瓶接入的原球莖重量（g）瓶號小瓶大瓶試驗組1234567891010.410.450.410.400.52-0.441.251.171.201.1820.290.410.520.480.320.441.011.051.070.8830.300.400.390.440.420.221.081.020.650.9340.510.540.580.440.290.391.071.211.121.0050.390.360.290.570.460.410.840.971.290.9660.400.400.370.360.400.380.911.490.860.781.2.3指標的確

3、定與結果統(tǒng)計接種后77天統(tǒng)計原球莖重量、分化程度。2結果圖1各處理原球莖增殖、分化情況（從左至右處理號依次為：1、2、3、4、5、6）2.1增殖重量表4各瓶的原球莖增殖率（）瓶號試驗組12大瓶34567小瓶8910合計117.07-0.00 -57.69-122.73238.40229.91336.67175.42171.45220.56-100.00-80.063-52.50-45.45 -85.71-340.74126.47173.85-59.664-41.1835.19-13.79-90.91 3.45-41.035.61-16.5329.46-80.00-17.6255.13-68.9

4、7-84.21 -93.48242.86238.1493.80-6.2555.666-50.00-76.3252.7526.1726.7467.95-6.14注：-”表示材料已死亡。2.2分化情況表5各瓶的原球莖分化情況瓶號試驗組小瓶大瓶123456789101+2+3+4+5+ +6+注：“+”的數(shù)目表示分化程度（綜合考慮分化出芽的數(shù)量、葉片數(shù)量）。表4所示，大瓶中的存活率比小瓶中的存活率高，這與接種量、培養(yǎng)基量有 關，小瓶中培養(yǎng)基水分保持較為困難；增殖率以1號，即MS+20%馬鈴薯培養(yǎng)基 中最高。從表5可以看出該組的分化情況并非最好。因此，在后續(xù)試驗中可以選 用MS+20%馬鈴薯培養(yǎng)基為增

5、殖培養(yǎng)基。分化培養(yǎng)基以5號，即1/2MS+0.25mM NAA+20%馬鈴薯為佳。二原球莖輻照特性第一次輻照輻照時間：2008年2月29日統(tǒng)計時間：2008年4月11日培養(yǎng)基：1/2MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA統(tǒng)計項目：存活率表6不同劑量照射后原球莖存活率劑量（Gy）各重復存組活率總存活率（）CK4/4，8/8，8/8，9/9，9/9，5/5100254/7，5/6，5/8，5/7，7/9，6/6，2/570.83503/9，6/7，4/7，1/648.28753/7，3/4，4/562.51003/7，10/13，5/10，4/956.411254/6，1/5，7/

6、7，3/7，10/11，5/6751500/5，1/3，6/12，3/7，2/425.810 0255075100125150劑量（Gy）圖2石斛原球莖的劑量效應曲線第二次輻照輻照時間：2008年4月4日 統(tǒng)計時間：2008年6月25日培養(yǎng)基：MS+20%馬鈴薯統(tǒng)計項目：存活率劑量（Gy）100劑量（Gy）10080）%（60率活40存200表7不同劑量照射后原球莖存活率劑量（Gy）各重復存組活率總存活率（）CK100406/9，6/7，7/11，5/8，5/8，1/7，8/9，4/5，7/8，5/5，7/772.62801/6，0/10，3/5，0/6，0/8，5/6，2/10，0/10，2

7、/4，0/1020.651201/7，4/6，4/7，3/8，3/6，0/8，1/7，5/8，1/6，0/8，0/9，2/9231601/7，0/10，1/6，0/6，6/9，8/9，0/6，0/9，4/9，4/6，6/835.292000/8，0/8，0/9，1/8，2/8，6/9，3/6，4/8，0/8，0/816圖3石斛原球莖的劑量效應曲線三石斛抗逆性實驗（一）、真菌、細菌返接實驗1抗菌實驗1.1材料與方法1.1.1材料細菌：X-1-Y、X-2、X-1-R、ER2，平板培養(yǎng)真菌：1-1、7（分離自石斛莖部），平板培養(yǎng)石斛分化苗（自分化培養(yǎng)基）1.1.2方法將以分化的石斛苗（4-5株）轉入

8、生根壯苗培養(yǎng)基中（MS+2mM NAA+10% 香蕉），培養(yǎng)約7天后，用接種環(huán)挑取帶菌瓊脂塊將X-1-Y、X-2、X-1-R、ER2、 1-1、7轉入石斛苗基部。各瓶接中3塊，均勻分布于石斛苗周圍。2結果2.1真菌對石斛組培苗生長的影響圖4真菌與石斛共培養(yǎng)（從左至右為：CK圖4真菌與石斛共培養(yǎng)（從左至右為：CK、1-1、7,接種后14 d）圖5真菌與石斛共培養(yǎng)（從左至右為：CK、1-1、7，接種后240 d）2.2細菌對石斛組培苗生長的影響圖6細菌與石斛共培養(yǎng)（從左至右為：CK、X-1- Y、X-1- R圖6細菌與石斛共培養(yǎng)（從左至右為：CK、X-1- Y、X-1- R、X-2、ER2接種后1

9、4 d）圖6細菌與石斛共培養(yǎng)（從左右為：CK、X-1- Y、X-1- R、X-2、ER2，接種后240 d）圖6與細菌共培養(yǎng)后的石斛苗（CK、X-1- Y、X-1- R、X-2、ER2，接種后240 d）（二）無糖、無激素條件下培養(yǎng)及該條件下的抗菌實驗1.1材料于方法1.1.1材料1-1-M （經(jīng)16 kGy 60Co射線輻照后變異的菌株，該菌株表現(xiàn)未生長緩慢）， 平板培養(yǎng)。培養(yǎng)基：1、無激素培養(yǎng)基：MS+3%蔗糖+0.8%瓊脂2、無糖、無激素培養(yǎng)基：MS+0.8%瓊脂寬葉、窄葉石斛苗：自生根壯苗培養(yǎng)基1.1.2方法各處理見表8：表8材料處理處理 號石斛 苗培養(yǎng)基真菌（1-1）浸染重復數(shù)（瓶，5株/瓶）1寬葉1+102-1032+24-35窄葉1+106-1072+28-3注：“+”表示接種1-1，-”表示未接種。3結果在無激素培養(yǎng)基中，寬葉、窄葉石斛苗均不能耐受1-1的浸染（如圖7）。窄 葉植株分蘗出寬葉植株，寬葉植株新芽沒有變化。圖7無激素培養(yǎng)基中石斛苗的生長情況（從左至右為：寬葉、寬葉（1-