過氧化氫酶活力的測定試驗報告

1、過氧化氫酶活力的測定實驗報告篇一：過氧化氫酶活性測定實驗29過氧化氫酶活性測定（高鎰酸鉀滴定法）過氧化氫酶普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植 物的代謝強度及抗寒、 抗病能力有一定關(guān)系，故常加以測定。一、原理過氧化氫酶（catalase ）屬于血紅蛋白酶，含 有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起 傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑?？筛?據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng) 系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的過氧化氫溶液，經(jīng)酶促反 應(yīng)后，用標準高鎰酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過 氧化氫。即可求生消耗的 H2O2的量。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（

2、一）材料：小麥葉片（二）儀器設(shè)備：1.研缽；2.三角瓶；3.酸式滴定 管；4.恒溫水浴；5.容量瓶。（三）試劑：1. 10%H2SO4; 2. 0.2 mol/L pH7.8 磷酸 緩沖液；3. 0.1mol/L 高鎰酸鉀標準液稱：取 KMnO4（AR 3.1605g，用新煮沸冷卻蒸儲水配制成 1000ml,再用0.1mol/L 草酸溶液標定；4. 0.1mol/L H2O2 市售 30%H2O次約等于 17.6mol/L ,取 30%H2O27夜 5.68ml ,稀釋至 1000ml,用標 準0.1mol/L KMnO4 溶液（在酸性條件下）進行標定；5.0.1mol/L 草酸：稱取優(yōu)級純

3、H2C2O4.2H2OI2.607g ,用蒸播水溶解后，定容至 1000ml o三、實驗步驟（一）酶液提取：取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至 25ml容量瓶中，用該 緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉(zhuǎn)至容量瓶中，用同一緩沖液 定容，4000rpm離心15min,上清液即為過氧化氫酶的粗提 液。（二）取50ml三角瓶4個（兩個測定，另兩個為對照）， 測定瓶加入酶液2.5ml ,對照加煮死酶液 2.5ml ,再力口入2.5ml 0.1mol/L H2O2同時計時，于30c恒溫水浴中保溫 10min, 立即加入 10%H2SO42.5mJ用0.1mol/L KMnO4

4、標準溶液滴定，至由現(xiàn)粉紅色（在 30min內(nèi)不消失）為終點。四、結(jié)果計算酶活性用每g鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的mg數(shù)表示：過氧化氫酶活性（H2O2mg/g/min） = （A B） x VT/（W x VSX 1.7 x t）式中：A對照KMnO4W定ml數(shù)；B酶反應(yīng)后KMnO4商定 ml數(shù)；VT提取酶液總量（ml）;VS反應(yīng)時所用酶液量（ml）； W羊品鮮重（g）; t反應(yīng)時 間（min）；1.71ml0.1mol/L KMnO4 相當于 1.7mgH2O2過氧化氫酶的活性測定在植物體中，黃素氧化酶類的代謝產(chǎn)物常包含H2OZ如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中的葡萄糖氧化酶、氨基酸氧化

5、酶、醛氧化酶等。H2O2的積累可導致破壞性的氧化作用，而過氧化物酶和過氧化氫酶則可以清除H2O2 是植物體內(nèi)重要的活性氧清除系統(tǒng)之一。其活性還與植物的抗逆性有密切關(guān)系，本實驗利用高鎰酸鉀 滴定法測定過氧化氫酶活性。一、原理：過氧化氫酶屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，H2O2則既是氧化劑，又是還原劑。R(Fe+2) + H2O2=R(Fe+3OH-)2R(Fe+3OH-)2 + H2O2=R(Fe+2)2+ 2H2a O2合并上式：2H2O2=2H2O O2據(jù)此，可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活 力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量(

6、反應(yīng)過量)的過氧化氫溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標準高鎰酸鉀溶液(在酸性條件下)滴定多余的過氧化氫。5H2O2+ 2KMnO務(wù) 4H2SOQ 5O2+ 2KHSO4+ 8H2O+ 2MnSO4即可求生消耗的H2O2量。二、儀器和用具：研缽、三角瓶50cm3X 4、鐵架、酸式滴定管、恒溫水浴、容量瓶三、試劑：10%H2SO4 0.2mol/l 磷酸緩沖液 pH7.8 ;0.1mol/l高鎰酸鉀標準液：3.1605gKMnO4 （AR） 用新 煮沸的蒸儲水配制成1000ml,用0.1mol/l的草酸溶液標定；0.1mol/l H2O2 : 市售 30%H2O狄約等于 17.6mol/l , 取30%H2

7、O2溶液5.68ml稀釋至1000ml,用標準0.1mol/l KMnO給液（在酸性條件下） 進行標定。四、方法：.酶液提?。喝⌒←溔~片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至 25ml容量瓶中，將研缽沖洗干凈，沖洗液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，并用同一緩沖液定容，4000rpm離心，上清液即為過氧化氫酶粗提液。.取50ml三角瓶4個（兩個測定兩個對照），測定加入酶液2.5ml ,對照為煮死酶液.5ml; 再加入 2.5ml 0.1mol/l H2O2 ,同時計時間， 于30 c恒溫水浴中保溫10分鐘，立即加入 10%H2SO4 2.5ml。.用0.1mol/l KMnO標準溶3滴定 H

8、2O2至生現(xiàn)粉紅 色（在30分鐘內(nèi)不消失）為終點。.結(jié)果計算：酶活性用每克鮮重樣品在10分鐘內(nèi)分解H2O2的毫克數(shù)表示：（A-B）*Vt/V1*1.7酶活（酶分解的 H2O2 mg/g 鮮重）=W式中：A-對照用 KMnO4 ml數(shù) B -酶反應(yīng)后KMnO4定ml數(shù)V t-酶液總量ml V 1-反應(yīng)所用酶液量 mlW 樣品鮮重（g）-1ml 0.1mol/l KMnO4相當于 1.7mg H2O2注意.所用KMnO4容液及H2O2溶液使用前要經(jīng)過標 定，0.1mol/l H2O2 要新配制。實驗48過氧化物酶活性的測定（比色法）過氧化物酶是植物體內(nèi)普遍存在的、活性較高的一種酶， 它與呼吸作用、

9、光合作用及生長素的氧化等都有密切關(guān)系，在植物生長發(fā)育過程中，它的活性不斷發(fā)生變 化，因此測量這種酶，可以反映莫一時期植物體內(nèi)代謝的變化。一、原理在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，該物質(zhì)在 470 nm處有最大吸收，可用分光光度計測量 470 nm的吸光度變化測定過氧化 物酶活性。二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料馬鈴薯塊莖。（二）試劑. 100 mmol / L磷酸緩沖液pH6.0 （見附錄）。.反應(yīng)混合液：100 mmol / L磷酸緩沖液（pH6.0 ）50 mL于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚 28以l ，于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木酚溶解，待溶液冷卻后

10、，加入30 %過氧化氫19以l ,混合均勻，保存于冰箱中。（三）儀器設(shè)備分光光度計，研缽，恒溫水浴鍋，100 mL容量瓶，吸管，離心機。三、實驗步驟.稱取植物材料1g ,剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以 4000 r / min離心15min，上清液轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，殘渣再用5 mL磷 酸緩沖液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，貯于低溫下備用。.取光徑1 cm 比色杯2只，于1只中加入反應(yīng)混 合液3 mL和磷酸緩沖液1mL，作為對照，另1只中加入反應(yīng)混合液 3 mL和上述酶液1mL （如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒表記錄時間，于分光光度計上測量波長470

11、nm下吸光度值，每隔1min讀數(shù) 一次。四、結(jié)果計算以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以AA 470/min , g （鮮重）表示之。也可以用每 min內(nèi)A 470變化0.01 為1個過氧化物酶活性單位（ u ）表7K 0過氧化物酶活性u/（ g min ）=式中：A A 470 反應(yīng)時間內(nèi)吸光度的變化。W 一一植物鮮重，g。T 提取酶液總體積，mL os 測定時取用酶液體積 ，mL omin蒲圻貝母 Fritillaria puqiensis G.D.Yu et G.Y.Chen 是貝母屬中一新種，其有效成分生物堿含量較高，止咳效果 顯著1, 2o其中的蒲貝酮堿的效果與可待因相似，且無

12、成癮性，已被國家新藥辦立項進行一類新藥開發(fā)。但由于蒲 圻貝母以野生為主，連年的采挖已使其資源逐漸枯竭，難以 為新藥開發(fā)提供資源保證，為此我們對其進行了組織培養(yǎng)。 蒲圻貝母鱗莖切塊培養(yǎng) 22d左右，可直接從切片邊緣長生多 個小鱗莖，以后小鱗莖逐漸長大。 為了探討鱗莖發(fā)生的機理， 并為研究提高組培貝母鱗莖的生長率，誘發(fā)多鱗莖形成的方 法，我們在培養(yǎng)的不同時期取材，對鱗莖形成過程中的可溶 性蛋白，過氧化物酶及酯酶同工酶的酶譜變化進行了分析。1材料和方法材料蒲圻貝母F.puqiensis 取自湖北省蒲圻市，經(jīng)中國藥科 大學生藥教研室李萍博士鑒定。新鮮的蒲圻貝母鱗莖在流水下沖洗 3h, 0.1%氯化汞表

13、面 消毒20min ,無菌水沖洗 5次，切成 0.5cm x 0.5cm x 0.2cm 的小塊接種于 MS附加BA 2mg/L-1 , IAA 1mg/L-1 的培養(yǎng)基 上，在25c黑暗條件下培養(yǎng)，獲得無菌材料。分別在培養(yǎng)的 不同時間取材，并以未進行培養(yǎng)的新鮮貝母鱗莖為對照，進 行可溶性蛋白，過氧化物酶及酯酶同工酶酶譜分析。方法試劑的配制與凝膠的制備：參考文獻：3的方法。分離膠濃度為 7.5%,間隔膠濃度為2.5%。樣品制備：稱取新鮮的貝母鱗莖 1g,在低溫冰箱 內(nèi)放置1h后，加少許石英砂，加 3ml提取緩沖液（0.1mol/L pH 8.0 的 Tris-HCl 緩沖液，其中含 0.5mo

14、l/L 蔗糖，0.06mol/L 抗壞血酸，0.006mol/L 半胱氨酸），在低溫下研磨后離心 20min, 5000r/min ,取上清液置-20 C下保存。電泳：采用垂直板式聚丙烯酰胺凝膠電泳，加入 澳酚藍作為指示染料。穩(wěn)定電流強度為1224mA可溶性蛋白的點樣量為50以l ,用含0.05%考馬斯亮藍的12.5%三氯乙 酸溶液染色4ho過氧化物同工酶的點樣量為30以l ,用抗壞血酸-聯(lián)苯胺染液染色，具組成為抗壞血酸70.4mg,聯(lián)苯胺儲存液20ml（2g聯(lián)苯胺溶于18ml文火加熱的冰醋酸中，再 加水72ml） , 0.6%過氧化氫20ml,水60ml。酯酶同工酶的點 樣量為50以l ,按

15、薛應(yīng)龍：4方法，即凝膠在0.2mol/L ,Tris-HCl緩沖液（pH 7.1）預浸10min,然后移入含有7%昔酸 -a-蔡酯的丙酮溶液0.5ml ,堅牢藍 12.5mg, 0.2mol/LTris-HCl 緩沖液（pH 7.1）1ml ，水 23.4ml的染色液中染色 1030min,棕紅色的同工酶譜帶即呈現(xiàn)。2結(jié)果與分析按譜帶顏色的深淺程度將其劃分為重帶、次重帶、輕帶,并按遷移率的大小劃分為3個區(qū)，Rf在0.10.3為慢速區(qū)（A）,在0.40.6為中速區(qū)（B）,在0.70.9為快速區(qū)（C）篇二：過氧化氫酶活性的測定華南農(nóng)業(yè)大學實驗報告專業(yè)班次11農(nóng)學一班 組別XX30010110題目

16、影響 酶促反應(yīng)的因素 姓名 梁志雄日期【實驗原理】1、酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)，作為催化劑，與一般的有機和 無機的催化劑相比較，有其相同之處，但也有其特異性。酶 促反應(yīng)的速度要比一般的催化劑催化的反應(yīng)速度要快得多， 本實驗比較生馬鈴薯糜（含活潑過氧化氫）、熟馬鈴薯糜（已 將過氧化氫鈍化）、鐵粉對于這個反應(yīng)的催化效果，放生的 氧氣氣泡越多，反應(yīng)速度越快。酶的重要特性之一就是其催化的專一性，一種酶只能催 化一個反應(yīng)或者是一類反應(yīng)。本實驗分別研究淀粉酶和蔗糖 酶的專一性。根據(jù)蔗糖酶和淀粉酶催化的反應(yīng)方程式可知， 反應(yīng)生成的單糖都是還原糖，利用還原糖與本乃狄試劑試劑 中的銅離子反應(yīng)，生成轉(zhuǎn)紅絲的Cu2O沉

17、淀，因此可以利用這個反應(yīng)是否有磚紅色沉淀產(chǎn)生來判斷是否有產(chǎn)物還原糖 生成，從而確定莫種底物的存在是否有酶促反應(yīng)的發(fā)生。在3中不同的pH條件下，比較淀粉酶催化淀粉水解能力的大小，反應(yīng)后加碘液，藍色越深，證明淀粉殘留越多， 該反應(yīng)的酶活性越低。藍色越淺，淀粉殘留越少，該反應(yīng)的 酶活性越高。4、5、在0C、37C、70 C 3個溫度條件下，淀粉酶催化反應(yīng) 后淀粉的殘余情況，加碘液后藍色越深，殘余淀粉越多，該 反應(yīng)酶活性越低。能夠使酶促反應(yīng)速度升高的化學物質(zhì)稱為激活劑。能夠 使酶促放映速度下降的化學放映物質(zhì)稱為抑制劑。本實驗在 淀粉酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)中分別加入一定濃度的NaCl和CuSO4比較反應(yīng)后淀粉

18、的殘余量。藍色越深，酶活性越低，藍色越 淺，酶活性越高?！緦嶒灢牧虾驮噭狂R鈴薯塊莖處理、淀粉酶、1%1粉溶液、蔗糖酶粗酶液、 本乃狄試劑、碘液、2%氧化氫溶液、2姆糖溶液、緩沖液、 氯化鈉溶液、硫酸銅溶液 【實驗步驟】1、配制適宜濃度的唾液淀粉酶溶液2、酶催化的高效性實驗，取四支試管，編號 14,按照 表1加入過氧化鈉和各種催化物質(zhì)，立即觀察各管氣泡由 現(xiàn)的情況，在下表中填入數(shù)據(jù)2、酶催化的專一性實驗，取試管 6支，編號16,按照 表2的順序加入試劑，并進行保溫處理，處理后將各管的顏色變化記錄在表2中，把顏色變化填入表 2中表2酶催化 的專一性實驗3、pH對酶促反應(yīng)的影響實驗， 取試管3支，

19、編號13, 按照表3的順序加進相應(yīng)的試劑和保溫處理，最后加入碘液 觀察各個試管顏色的變化4、溫度對于酶促反應(yīng)的影響實驗，取試管3支，編號13,按照表4的順序加入相應(yīng)的試劑和保溫處理，最后 加入碘液后觀察各管顏色的變化表4溫度對于酶促反應(yīng)的影響實驗5、酶的激活與抑制劑實驗，去試管 3支，編號13,按 照表5的順序加入試劑和保溫處理，觀察各試管中顏色變化【實驗記錄】 記錄情況在表格中【實驗結(jié)論】上述的5個實驗，探究了酶的高效性、專一性，還有溫 度、pH激活劑與抑制劑對于酶活性的影響，從實驗現(xiàn)象可 以知道，酶作為催化劑，與一般的有機和無機催化劑相比較， 催化能力較強，一種酶只能催化一個或者是一類反應(yīng)

20、，酶具 有高度的特異性，由于酶的結(jié)構(gòu)關(guān)系，酶只有在最適宜溫度 和pH的條件下，才能發(fā)揮最大的催化作用，該溫度稱為最 適溫度，該pH稱為最適pH,最后一個實驗，我們知道了激 活劑可以提高酶促反應(yīng)的速度，而抑制劑即可以使酶促反應(yīng) 的速度下降，利用這兩種物質(zhì)，在工業(yè)生產(chǎn)中，就可以根據(jù) 生產(chǎn)的要求適當控制酶反應(yīng)的速度。篇三：實驗2過氧化氫酶活性測定實驗2過氧化氫酶活性測定（高鎰酸鉀滴定法）一、實驗?zāi)康氖煜び玫味ǚy定過氧化氫酶活性。二、實驗原理過氧化氫酶普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定關(guān)系；過氧化氫酶（catalase ）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫 分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化 氫則既是氧化劑又是還原劑?？筛鶕?jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的過氧化氫溶液，經(jīng) 酶促反應(yīng)后，用標準高鎰酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多 余的過氧化氫。即可求生消耗的 H2O2的量。5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 = 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4三、實驗器材1材料：植物葉片2儀器設(shè)備：研缽； 酸式滴定管