如何找一個基因的啟動子序列呢

1、如何找一個基因的啟動子序列呢？、 UCSC（）網(wǎng)址：在 里擇物種比如 ， 輸入你的基因名 ，點 （）出現(xiàn)新的面，看到 ” 下的 了吧，它（）又回到了（）類似的頁面，此時，點擊 （ ）出現(xiàn)個新的頁面，選中 ，同時以輸入數(shù)值修改具體的序列區(qū)域，如 ，即示啟動子 區(qū)域（）擊“ 出現(xiàn)頁面中上面的序 - ” 就是你的人 動子 區(qū)域的 序列了、（）網(wǎng)址：在 “ 標題下 search 后的下框中選中種名 （人 框中 輸入基因名 PTEN，點擊 （）出現(xiàn)的新面中比較，但不要它，直接尋找 “Ensembl protein ” 字樣 的，對，也是第二個點擊它（）新出的頁面也亂，不過然不用管它，看到左側(cè)有點肉色（在

2、不知道么描述 了的那些選了嗎對，就 下面那一在里面 ” 點它（）現(xiàn)在的界就一目了了，在 “ 中輸入值確定啟子長度（默 認為 如 點擊 ；（）出現(xiàn)序列中，為紅色的是基因的外顯子，紅色之間黑色的列就是內(nèi)子，而 第一個紅色然就是第外顯子了那么開始的堿基一直到第一個紅色的堿間自然就 啟動子 的列啦這樣，你不查到了啟子，連它外顯子、內(nèi)含子序列也全部搞定了 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？、（）網(wǎng)址：（）具體使用法大同小，就是輸物種名、基因名，限定啟動子序列域不過有了前個，我想經(jīng)足夠用，個人感覺 庫容太小，很多因查不到 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？我以前回的，總結(jié)一 / / 如何找一個基因

3、的啟動子序列呢 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？ 一般也和 的一致，你的情況可能外。這就清楚了。 有七個顯子可 能有它自己理由。另外， 的因中 庫同時有 ensembl 和 的接，不從這個鏈看看。 此外，還可看一看這基因在物間的同源性以及它物種有幾個外顯子，做參考綜合 考慮一下。給你提供幾啟動子區(qū)查找的網(wǎng)，慢慢摸索會學到更多的。果蠅的 通常確定啟子的算法以分成兩 ,種根據(jù)啟子區(qū)各種錄信號 如 盒、 盒 結(jié)合對這些守信號及號間保守空間排列順序的識別進行預(yù)測。如 用 經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法定 盒、 盒、加位點 和 盒 的位置和距離 , / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？識別含 TATA 盒的動子。

4、根據(jù)轉(zhuǎn)錄因結(jié)合部位基因組中布的不平衡性 將錄因子結(jié)合部位分布密及 盒的 權(quán)重矩陣 結(jié)合來從因組 中別出啟動區(qū)3 。但述程序預(yù)測的 假陽性率較 每 23kb 出現(xiàn)個假陽性 ; 平每 出 現(xiàn)一個假陽。 另一種方法據(jù)啟動子序列的特進行預(yù)測。 從一組練序列中取出 啟動子區(qū)的境特征 并外顯子、含子和 端非翻區(qū)的特征及動子區(qū)加區(qū)分從而在基 因組中確定動子位置初來乍到，個技術(shù)貼、取目的基的 序，并且在 NCBI 的數(shù)據(jù)中查獲轉(zhuǎn)起始點、取轉(zhuǎn)錄起點為中心上下約各 ，若在此范內(nèi)出現(xiàn) ，到翻譯起始點終止 、用在線軟進行分析 本人是采取種軟件結(jié)的方法，于 和 假陽率較高，僅為參考， 而 的特異較高，結(jié)比較可信。同時，

5、利用 島預(yù)測，為輔助參考 、后，可以到小鼠的源區(qū)，進同源性比較，啟動子區(qū)域一定是高守區(qū)、此，可以步預(yù)測啟子區(qū)域的圍了。請高手多多教啟動子預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子預(yù)：此處亦有好，自己挑！以下內(nèi)容轉(zhuǎn)啟動子及轉(zhuǎn)因子結(jié)合點數(shù)據(jù)庫預(yù)測工具 - / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？ II for a 通常確定啟子的算法以分成兩 ,種根據(jù)啟子區(qū)各種錄信號 如 盒、 盒 結(jié)合對這些守信號及號間保守空間排列順序的識別進行預(yù)測。如 用 經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法定 盒、 盒、加位點 和 盒 的位置和距離 , 識別含 TATA 盒的動子。 根據(jù)轉(zhuǎn)錄因結(jié)合部位基因組中布的不平衡性 將錄因子結(jié)合部位分布密及 盒的 權(quán)重矩陣 結(jié)合來從因組 中別出

6、啟動區(qū)3 。但述程序預(yù)測的 假陽性率較 每 23kb 出現(xiàn)個假陽性 ; 平每 出 現(xiàn)一個假陽。 另一種方法據(jù)啟動子序列的特進行預(yù)測。 從一組練序列中取出 啟動子區(qū)的境特征 并外顯子、含子和 端非翻區(qū)的特征及動子區(qū)加區(qū)分從而在基 因組中確定動子位置 近來還有一程序?qū)⑸戏椒?島 信相結(jié)合。 島一段 或 更長的 序核苷酸 + C 的含量較并且 CpG 雙核苷酸的現(xiàn)頻率占 C 含的 5 0 以上。許脊椎動物啟動子區(qū)及 島的位置合。 ( / ) 搜通過 5 定技術(shù)構(gòu)建的第一外顯子數(shù)據(jù)庫識別一剪切點first ,結(jié)合 島信息確定啟動區(qū)。這種法使預(yù)測敏感性和特異性都明 顯提高。該序預(yù)測含 CpG 島啟動子

7、的敏性和特異都高于 % ,預(yù)測不含 島的啟 動子的精確相對略低 數(shù)據(jù)庫 收錄真核基因調(diào)區(qū)結(jié)構(gòu)和因表達方的信息 ,每條目對一個基因 應(yīng)用權(quán)重矩數(shù)據(jù)庫搜轉(zhuǎn)錄因子合部位的程序包括 轉(zhuǎn)錄因子搜程序 , )等等。盡管于 PWM 的搜索比敏感 但它最大的缺點就是假陽性率過高 在預(yù)測結(jié)果中有 多結(jié)合部位不真正具生物學功。 數(shù)庫經(jīng)實驗確定復(fù)合元件多 數(shù)據(jù)庫中錄了近 200 條經(jīng)實驗定的復(fù)合件的信息 如果轉(zhuǎn)錄因結(jié)合部位預(yù)測結(jié)果包含復(fù)合元件 顯比單個元件更有可能具生物學功 o - 程通過建立個轉(zhuǎn)錄因結(jié)合部位的 及其合作用的模 ,可預(yù)測序列的 復(fù)合元件。有一些程利用 數(shù)據(jù)庫已知的復(fù)元件去搜基因組序列。 / / 如何

8、找一個基因的啟動子序列呢？等是用來搜高含量基 的些算法可以對一組因簇中的 基因調(diào)控區(qū)行比較 以現(xiàn)其中存的高含量的基序 ,調(diào)元件可能存在于這些基序之中。在 查找可的啟動1、進入網(wǎng)站 。2、點擊 單，在 position 后面的搜索框內(nèi)寫入待查的基因名稱，點擊 getoutput。 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？3、出現(xiàn)一系列候選序列。當搜索用詞不特異的時候會出來太多的結(jié)果，只顯示 500 條。 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？4、點擊自己目的基因的結(jié)果鏈接，會出現(xiàn)該基因在染色體上的位置 (有時候會 直接跳到選擇 genome，mRNA 那一頁面可能是在搜索詞比較特異的情 況寫)，繼

9、續(xù) getoutput。 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？5、選擇 genome 這一項。6、promoter/upstream 前面的框中打勾一般的啟子長度大約為 2kb 右，這數(shù)字可以修改。為便觀察，可續(xù)修改下的幾個選項。這里選擇 CDS 大。 / 1911 / 19如何找一個基因的啟動子序列呢？7點擊 sequence 可得到結(jié)果UTR upstream 是分開的CDS 大寫的， 可以看到起始碼。copyATG 以前的序列進行啟動子分析。 以 genome 模板。在 Ensembl 查找能的啟子 1進入站，擇物種，入搜索的因名稱。 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？2出來 2

10、個結(jié)果本例中貌似是同一個。擊相應(yīng)鏈進入新頁。3貌似 個同的轉(zhuǎn)錄。點擊 Info 4新頁中即可看到 5 upstream sequence 。以在 Flanking of 后 面的框中修期望顯示序列長度一般啟動子最好選 2kb。后 所顯示上游序進行 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？分析。隨著基因工的發(fā)展常常需要建一種能高水平表達異源蛋白質(zhì)的表達載體啟子對外源 因的表達水影響很大是基因程表達載體的重要元件因研究啟動子克隆方法對研究 基因表達調(diào)和構(gòu)建表載體至關(guān)要。迄今為止國外尚見到有關(guān)動子克隆方法的綜述性報道國僅孫曉紅等就啟動子 結(jié)構(gòu)分類克方法和食菌中已經(jīng)離到的啟動子作過綜述。而近年來又有多改

11、進的隆 啟動子的方獲得了多面的成功本文就近年來進的啟動子克隆方法作綜述以促進對 啟動子分離術(shù)的應(yīng)用1 啟動克隆的幾種方法 利用啟動探針載體選啟動子啟動子探針載體是一有效、經(jīng)、快速分離基因啟動子的工具型載，包含 2 個本 部分：轉(zhuǎn)化元和檢測元。其中轉(zhuǎn)化單元含復(fù)制起點和抗生素抗性因于擇被轉(zhuǎn)化 細胞；檢測元則包括 1 個失去轉(zhuǎn)錄能且易于檢測的遺傳標記基因以及隆位點。利用啟動子針載體篩啟動子的程為，先選用 種適當限制性核內(nèi)切酶消化切割 染色體 ，然后將切割產(chǎn)生的 限制片群體及啟動子的針質(zhì)粒載體重組，并按照設(shè) 計的要求使隆的片段好插在緊報告基因的上游位置；隨后再把重混合物轉(zhuǎn)給寄主細 胞，構(gòu)建質(zhì)載體基因庫

12、，并檢報告基因的表達活性。當插入段同滿足 有基因啟子序列； 有翻譯始區(qū)；具有始 子； 插入方向正； 入片 端編碼區(qū)列抗性基因編碼區(qū)讀碼一致，則可能形成功能 的抗性融合因，從而動抗性基的表達。最早由 等在大腸桿中以四環(huán)素抗性基因作為報告基因構(gòu)建了啟動探針質(zhì)粒 克隆了一原核和真啟動子片段后 Donna 等以霉素抗性因作為報告基因， 等以大腸桿菌 為報基因，構(gòu)建酵母啟動探針質(zhì)?？寺×艘恍﹩幼悠?。 構(gòu)建啟動子針型載體較為常見檢測標記基因有 半乳糖酶基因 、霉素乙酰移 酶基因 、四環(huán)素性基因 和卡霉素抗性基 (Kan)。近年來，們漸漸較地使用 潮霉素 磷酸移酶( 基因作檢測標記基因李維等構(gòu)建了含有

13、hph 抗性因的啟動子 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？探針型載體 ，直接在大桿菌中分黃孢原毛革菌基因啟動子。先用 酶 黃孢原毛平菌基因總 ，及用 酶切的 相連，轉(zhuǎn)大腸桿菌用間接篩 選法從氨芐霉素和潮素抗性平上篩選重組子，得到 6 個雙抗組子 pCH6)，電泳 檢測插入片分別命名 再用生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將重組子別轉(zhuǎn)化黃原毛平革， 對獲得的轉(zhuǎn)子進行復(fù)，僅 的轉(zhuǎn)平板上有定生長的落，說明了 片段在黃孢 原毛平革菌具有啟動因表達的能法不要知道具體基因的序列機篩選啟子， 避免了引物計，能獲大量的啟子片段。利用 技術(shù)克隆啟動子即根據(jù)發(fā)表基因序列設(shè)計引物克隆基因的啟動子，由于 PCR 法簡便捷，近年人 們較

14、多采用方法克隆因啟動子蘇寧等根據(jù)報道的水葉綠體 啟動基因序列計 5啟動子序列引物，以 稻葉綠體 為模板， 擴增 基因 5 啟動子區(qū)的段，酶切克隆到 的 和 位，構(gòu)建測序載體質(zhì)粒 pZ16S ，進行列測定結(jié)果表明所克隆的片段為 ， 含有 序列同比較結(jié)果明所克隆的片段及水稻葉綠體 16SrRNA 啟動子序列有 的同源性。上述的 PCR 法簡便快捷、操簡單，是人們較為廣泛使用的技術(shù)。環(huán)狀 環(huán)狀 包括 和 2 種 都根據(jù)一端已 知序列設(shè)計嵌套式引進行 。 是 年 最早提出的一基于 PCR 的改進的染色體步行方法。 的實驗序包括，基因組 經(jīng)酶切后 連接酶進行連接，產(chǎn)生狀 片 段；以環(huán)化物為底物用根據(jù)已片

15、段設(shè)計的反向引物進行 PCR 擴增從而得到有未知片 段的擴增產(chǎn)流程如圖 1 所示。韓志勇等以 I-PCR 術(shù)為基礎(chǔ)克隆了轉(zhuǎn)基因稻的外源因旁側(cè)序用小量法提轉(zhuǎn)基 因水稻的總 總 DNA 用 倍量的制內(nèi)切酶進行過夜酶切，酶切片段行自連接然 后根據(jù)工程粒的 T-DNA 區(qū)設(shè) 2 對向引物進行套式 擴旁側(cè)序列。建立了適合處 理大量材料克隆轉(zhuǎn)基水稻中外基因旁側(cè)序列的技術(shù)體系。在 1 周內(nèi)克了 個基因水 稻株系中外基因的旁序列，長在 之間。 法速、高效穩(wěn)定，操相 對簡單，花少， 引物設(shè)計比方便。 是 Jones 等提的利用末端反向重復(fù)序列及已知序互補配對成 環(huán)狀單鏈模，有效增了引物及板結(jié)合的特異性。反應(yīng)需要

16、 3 個根據(jù)已序列設(shè)計引物， 3 個引物已知序列內(nèi)呈線性排列其中第 3 個引可作為接使用可及已知列互補配對形 成鍋柄狀單模板。其程為，首酶切基因組 ，產(chǎn)生 或 粘末端，然后連接上合適的 接頭 ，連接好后最用核酸外切 I 除去多余的頭，由于接上的接頭及已知序列 是反向重復(fù)列，變性的 DNA 鏈可退火形成鍋柄狀單鏈模板，之后分別用 個單引進行 3 次 增，能有效地擴增 9kbp 大片段未知列流程如 示 。黃君健等成地應(yīng)用 技術(shù)正常的人周血單核細胞基因組 中擴端粒催化亞 基 基 端上游旁序列獲得了 因翻譯始位點上游 的基組 序列。首先酶切消化因組 ，得到帶 的 5突端的 DNA 片段。然后利用已知的

17、 列設(shè)計 PCR 物常規(guī)的 PCR 方法增出 大約 的基組特異片， 序列分析為 的基組 片段。根得到的基因組 序列的息，確定 的引 物退火區(qū)，合成了 磷酸化的接寡核苷酸和 條基因特異引物，其中連接寡核苷酸 5端 的 4 個堿基 及上述酸內(nèi)切酶消化產(chǎn)生的 5突出端 GATC 互補后連接寡核苷酸及基 因組酶切產(chǎn)連接，以接產(chǎn)物為應(yīng)模板，進行 ，使模自身進行退 -伸反應(yīng)，以形 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？成 構(gòu)。后以單鏈 模板， 條基因特序列為引進行嵌套 ， 最終獲得了 1 條 含 基因啟動子 片 等利用進的 ，形 成 結(jié)構(gòu)之前 末連上 ddCTP 使引物錯配的機率減少特異性增。他們從類 基

18、因組 已知點側(cè)翼擴增了 4 的片段未知序列 是目前能夠增距已知列 最遠的未知 DNA 序列的法，有很高的特異性。利用載體或頭的染色步行技術(shù)隆基因啟動子這類方法的一步都是切基因組 DNA ，連接體或接，既可以 等質(zhì)粒體， 也可以使用 DNA 等噬菌體載體只選用的載體有合適的切位點同樣根實驗需要接 頭既可以是鏈也可以單鏈，然根據(jù)基因組 DNA 序列計的特異引和載體的用引物或 接頭序列進擴增。利用載體的 PCR 等利用的特異性引 對小鼠傷寒菌組氨酸轉(zhuǎn)運縱子為起進行連續(xù)行。以 為載。用 和 AraI 酶基因 組 ， 和 酶切體 DNA ，后連接基因片段和載片段，用據(jù)基因組 DNA 序 列設(shè)計的特引物和

19、載的通用引進行擴增由于非特異段沒有單特引物結(jié)合位點 使有載體連非特異片，也無法到大量擴增，而使特異片段得到有擴增。利用接頭的 王新國等用銜接頭的法計位于單 DNA 兩端互補的顛末端重復(fù)序，增加了應(yīng)的特異，在胡蘿卜 型轉(zhuǎn)化酶基因啟動子的克隆方面取了新的 進展。首先胡蘿卜基組 分別用 PvuI 、 酶切，并設(shè)計 1 個接頭 長鏈序列和 個銜頭短鏈序，并在銜接頭短鏈的 3 末端帶 個氨的銜接頭能夠阻止 聚合酶催化銜接頭短的延伸同時銜接頭的長鏈和短鏈之間是反向重復(fù)序?qū)⒚盖衅?此銜接頭連，取連接物做模板以銜接頭引物和基因特異引物做 在首 中只 限定的遠端因特異引有結(jié)合位，當基因特異引物延伸產(chǎn)生的 DN

20、A 鏈通過接頭時，能 產(chǎn)生銜接頭物的結(jié)合點 才能以接頭引物基因特異物進行指擴增一方， 如果非特異成產(chǎn)生了 兩都有雙銜接頭序列的 產(chǎn)時種 產(chǎn)物在次變性 后，單鏈 DNA 末端的接頭反向復(fù)序列將成鍋柄結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)比引物-模板雜更穩(wěn)定，能 抑制非特異列的指數(shù)長。最后到主要的 PCR 產(chǎn)物為 、 、 和 。將 銜接頭系的 產(chǎn)克隆、測序源性比較得到 個新的胡卜 型轉(zhuǎn)酶基因 啟動子序列它含有似于 和 CAAT 的元件在啟動子的上游區(qū)域多個 富含區(qū)，該啟子的發(fā)現(xiàn)于研究植中的糖代謝具有重要的意義。接頭物的相對置如圖 所示。3這種方法具便于操作實驗線路單的優(yōu)點，但是特異性較差，產(chǎn)物進一步雜驗證。 法 等在擴增

21、端采用“”形接頭以減少接引物的單物擴增。其原理是接 頭引物處于Y接頭的 個分單鏈上，列及接頭樣，只有及特異引物引導(dǎo)合成了接的互 補序列后，頭引物才退火參及增，流程如圖 。方衛(wèi)國等嘗將 法引入到昆蟲原真菌的分生物學研并取得成功建立了 合于球孢白菌和金龜綠僵菌 體系。在已隆的類球孢白僵菌類枯桿菌蛋白基因 的礎(chǔ)上，用 法，克隆到該因的啟動子 先酶切球孢僵菌基因 ，然后及Y形接相連，取接產(chǎn)物做板，先以基因特異 引物 做線性增，再以線性擴增產(chǎn)物模板，以頭引物和因特異引物 做指數(shù)擴增，只 有當線性擴時合成了有接頭引的互補單鏈，接頭引物才能及其發(fā)退火，參指數(shù)擴增 從而有效防了接頭引的單引物增。最后得 產(chǎn)物，

22、進序列分析確定為 的上 游啟動子序。在應(yīng)用 法時，切酶的選擇關(guān)重要。的內(nèi)切酶生適合 PCR 擴增的片段，太大 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？太小都不行為了得到適的內(nèi)切，需要從眾多的內(nèi)切酶中篩選。研表明同物種有自 己合適的內(nèi)酶。 法延的起始片段以是基因 片段，也以是 cDNA 片，在 延伸 片段時的引物要避開內(nèi)含和外顯子邊界內(nèi)含子的置未知的情況下， 可考慮多合 2 條特異物，以提擴增未知片段的機率。該方法假陽性低、效率，理論 上能擴出所目的片段 很早就有用機引物的 ，但由無法有效控制由隨機引物引發(fā)的非特異產(chǎn)物的產(chǎn)生， 所以一直未廣泛應(yīng)用近年來由 IJiu 等計的 又叫熱不對交錯 PCR

23、，解決了這問題，后來有研究表明，經(jīng)改良過 成功地從 突變體中克到外源插基因的旁序列，從而為啟動子的克隆提供了效的新方。在利用特異物和隨機物進行 中般有 3 產(chǎn)物生由特異性引物和并引物 擴增出的產(chǎn)； 由同一異性弓 l 物擴增出產(chǎn)物； 由同一簡并引物擴增出的產(chǎn)物。在 反中，其中后 種目標產(chǎn)物可以通過以嵌套的特異引物進行后續(xù)反應(yīng)消除。 的 基 本 原 理 是 利 用 目 序 列 的 已 知 序 列 設(shè) 計 3 個 嵌 套 特 異 性 引 物 ，簡稱 ， 約 ，用它分別和 個有低 值的短的隨簡 并引物 ，約 組合，基因組 為模板根引物的 長短和特異的差異設(shè)不對稱的度循環(huán)，通過分級反應(yīng)來擴增特異物 流程

24、如圖 示。 共分 次反。第一次反包括 5 高特異、 次特異、 次較低異性反 應(yīng)和 個熱不對稱超級循環(huán)。 5 次高特異性應(yīng)，使 sp1 已知序列退火并延伸，增加 目標序列的度； 次低異性的反應(yīng)簡并引物合到較多目標序列； 次低特異性 反應(yīng)使 種物均模板退火，隨后進行 次超級環(huán)。經(jīng)上反應(yīng)得到不同濃度的 種類型產(chǎn)物：特性產(chǎn)物型和非特異產(chǎn)物 ( 型和型 ) 。第二次應(yīng)則將第一級反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋 1000 倍作模板，通 次熱不稱的超循環(huán)，使異性產(chǎn)物選擇地擴增，而非特異 產(chǎn)物含量極。第三次應(yīng)又將第次反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋作模板，再設(shè)置通的 反應(yīng)或不 對稱超級循，通過上 次 應(yīng)可獲得已知序列鄰近的目標序列。 等曾用構(gòu)的

25、含有潮素抗性基 ( 的雙表達載體 化真菌， 后利用 法克隆得到的真菌轉(zhuǎn)化子基因組 T-DNA 入?yún)^(qū)的旁序列并取了成 功。根據(jù) 區(qū)的 基因設(shè)了擴增右界的 3 個引物 ，以擴增左邊界的引 物 HAS4 另外根據(jù)不同的化子分別計了簡并物 ADl 引物位如圖 所 示。在首輪 PCR ，以 為引物擴右邊界以 擴增左界，然取首輪 產(chǎn)物為模板 進行二次 二次 PCR 產(chǎn)為模板 為模板進行三輪 PCR 將 3 輪的 產(chǎn)進行電泳分結(jié)果表明采 方法成 地從突變體獲得了帶 左右界的旁側(cè)序而證明 法有效地擴增基 因旁側(cè)序列方法，為動子的克又增添了 可行的方法。 不需 前任何 操作免了環(huán)化連接度快異性效高， 靈敏，在分

26、生物學研的各個領(lǐng)都有廣泛的應(yīng)用。2討論以上介紹的種方法基代表了現(xiàn)的啟動子克隆方法分別有不同的特和適用范 圍。利用啟動子針載體篩啟動子時不需知道具體的基因序列避免了引設(shè)計能獲 得大量的啟子片段；缺點是需構(gòu)建 1 個梭質(zhì)粒，庫、轉(zhuǎn)化篩選，工作量大，費時 費力，而且隆、亞克的過程繁。因此在基因的遺傳背景不是很清時往過探針載 / / 如何找一個基因的啟動子序列呢？隨機篩選啟子。而 法的主要點是簡便快捷、操簡單；其缺點是只能擴增兩端已知列間的 區(qū)且擴增特異性較其用條件是建立在對基因序列十分清楚的基礎(chǔ)上只有知道因的 全序列根據(jù)已知序設(shè)計引物擴增出基因的啟子此因序列楚的情況下 們首先想到就是 PCR 法。

27、法操作單，克服文庫篩選克隆、亞克隆的繁瑣步驟，對實驗條件要求不，花 費少，在 法基礎(chǔ)上，增加了 環(huán)化過程從而可以增只有一序列已知的 ， 由于不需要計和合成量昂貴的苷酸接頭此免了物設(shè)計和有頭而產(chǎn)生非特異性 產(chǎn)物的麻煩然而由于直克隆已知列外的未知 域依于 的環(huán)性而環(huán)化連接 過程中常常生多聯(lián)體成副產(chǎn)物甚是主要產(chǎn)物導(dǎo)致非異擴增造成了閉環(huán)雙的 的 PCR 擴增效率差經(jīng)常得不滿意的結(jié)果，同時酶切片段太長也會使擴增效下降。其用 于尋找只有端序列已的 未知 DNA 段進擴增。相對于 ， 經(jīng)過設(shè)計形的是鍋柄狀單鏈 DNA 模板，而有效增加了引物及模 板結(jié)合的特性 能夠完全部嵌套式擴增，因而產(chǎn)物有非常高的特異性缺

28、點是也 在 環(huán)化連接的弊端，但及 I-PCR 相，其 產(chǎn)物的特異性已大大增加目前，P-PCR 可以擴增位已知位點翼的大于 的人基因組 DNA 的啟子，是目前止能擴增離已 知序列最遠 序列的方因而常于擴增大片段的未知序列。利用載體的 PCR 克隆啟子有實設(shè)計簡便的優(yōu)點在因組 中入含合適酶位點 的載體基于 PCR 法的又創(chuàng)新之處而其實驗作較為繁特異差使用套式 ， 仍然有幾條泳條帶，而特異性物需雜交進一步確定。利用接頭的 PCR 克隆啟子的優(yōu)是避免了 環(huán)改的接頭可以通過形成鍋結(jié)構(gòu) 有效抑制非異性序列擴增但設(shè)和合成大量的核苷酸接頭價格昂貴此外用常規(guī)加接 頭的方法來隆啟動子往往有接非特異產(chǎn)物產(chǎn)生特異性較低特產(chǎn)物需雜確定由于 利用接頭的 PCR 法需要 化，通適用于尋找知 cDNA 周圍