2021 細(xì)胞工程實(shí)驗報告

1、2021 細(xì)胞工程實(shí)驗報告細(xì)胞工程試驗報告要求：1、因需上報細(xì)胞工程實(shí)驗成績，實(shí)驗報告要求每人一份。 2、請使用實(shí)驗報 告紙、手寫（不能打印）。實(shí)驗1 細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)置和無菌操作一、【實(shí)驗原理】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作， 避免微生物及其他有害因素的影響。一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)包括配液室、準(zhǔn)備 室和培養(yǎng)室。三室既相互連接又相對獨(dú)立，各自完成培養(yǎng)過程中的不同操作。二、【實(shí)驗?zāi)康摹苛私馀囵B(yǎng)室的設(shè)置和設(shè)備。 學(xué)習(xí)無菌概念和無菌操作要領(lǐng)。三、【操作步驟】1實(shí)驗室設(shè)置（1）配液室（2）準(zhǔn)備室（3）培養(yǎng)觀察室（4）儲藏室（5） 清洗滅菌室 2實(shí)驗室常用設(shè)備 （1）準(zhǔn)備室

2、的設(shè)備 （2）配液室的設(shè)備 （3） 細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)備 3無菌操作（1）無菌室的滅菌： 紫外燈無人時就要打開；進(jìn)無菌室要穿無菌服、戴帽子和口罩；每周清洗消毒一次；所用物品要以外科手術(shù)方式嚴(yán)格消毒；1室內(nèi)臺面要要保持潔凈，做完實(shí)驗后，用75%酒精或千分之三新潔爾滅棉 球擦拭超凈工作臺的臺內(nèi)、邊臺的臺面、倒置顯微鏡的載物臺等； 所用 物品要一次性準(zhǔn)備好； 瓶口要用酒精火焰消毒； 盡量減少出入。（2）實(shí)驗人員的無菌準(zhǔn)備： 肥皂洗手 穿好隔離衣 酒精棉球擦手四、【實(shí)驗報告】畫出本細(xì)胞培養(yǎng)室的草圖，標(biāo)明各室的必需設(shè)備。（1）準(zhǔn)備室的設(shè)備雙蒸餾水蒸餾器酸缸烤箱高壓鍋：玻璃器皿、解剖用具、部分液體、 塑料器具

3、等滅菌。不同物品其有效滅菌壓力和時間不同。儲品柜1:放置未消 毒物品。儲品柜2：放置已消毒物品。包裝臺：滅菌前的包裝用。準(zhǔn)備室 注意事項: 預(yù)防蒸餾器被烤干。 放置水池中的水滲出。 勿將酸液濺到 衣物或地面。勿將高壓鍋排氣閥和安全閥堵塞。已消毒物品應(yīng)與未消毒物 品分柜存放。 （2）配液室的設(shè)備天平（扭力天平和電子天平）：稱量用pH計：磁力攪拌器：超凈 工作臺：超凈工作臺的種類很多，有單面單人、單面雙人、雙面雙人或雙面四人等，其 工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)，使通過高效濾氣的空氣，徐徐通過臺面，這樣使工作環(huán) 境中具無菌而均勻的空氣。4C冰箱和低溫冰箱 CO2培養(yǎng)箱：定濃度的CO2對細(xì)胞生長，尤其是原代培

4、養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)有促進(jìn)作用 （5%）。定濃度的CO2可維持培養(yǎng)液恒定的pH。適用于開放培養(yǎng)，培養(yǎng)箱封口后， 可在一般恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，但是采用培養(yǎng)皿或多孔板培養(yǎng)時，則需要高濕度和 高CO2含量的空氣。它增加了濕度，箱體內(nèi)裝有水浴，可以保證培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度。2培養(yǎng)箱內(nèi)裝有紫外燈。通過氣體流量計可以調(diào)節(jié)CO2和空氣的比例。在水中可加入防腐劑（二氧乙酸）。可防止因CO2培養(yǎng)箱中濕度較高，易 長霉菌。離心機(jī)：CO2鋼瓶：液氮罐：儲品柜：用來存放雜物紫外燈：空氣凈化系統(tǒng)倒置顯微鏡3實(shí)驗2 器械的清洗與消毒、【實(shí)驗原理】在組織培養(yǎng)過程中，離體細(xì)胞對任何毒性物質(zhì)都十分敏感。毒性物質(zhì)包括解體 的微生物及細(xì)胞殘余物

5、以及非營養(yǎng)的化學(xué)物質(zhì)，因此對新采用和重新使用的培養(yǎng) 皿等培養(yǎng)用品都要嚴(yán)格清洗和消毒。二、【實(shí)驗?zāi)康摹?學(xué)習(xí)并掌握細(xì)胞培養(yǎng)使用的器皿、器械的洗滌和消毒。三、【操作步驟】1清洗（1）玻璃器皿的清洗步驟：按浸泡f刷洗f浸酸f沖洗等四步程序進(jìn)行。浸泡：新購進(jìn)的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)， 故先用自來水浸泡過夜、水洗，然后再用2%5%鹽酸浸泡過夜或煮沸30min，水 洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進(jìn)行。 用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清 水浸泡。刷洗：用軟毛刷、優(yōu)質(zhì)洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)

6、：浸泡 后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會損害器皿的表面 光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)洗滌劑。禁止用 去污粉。因其中含有砂粒。會嚴(yán)重破壞玻璃器皿的光潔度。特別注意刷洗瓶角部 位。酸浸之前要把洗滌劑沖干凈。浸酸：將器皿浸泡于清潔液24h,如急用也不得少于4h。清潔液由重鉻酸鉀、 濃硫酸及蒸餾水配制而成，具有很強(qiáng)的氧化作用，去污能力很強(qiáng)。經(jīng)清潔液浸泡 后，玻璃器皿殘留的末刷洗掉的微量雜質(zhì)可被完全清除。沖洗：先用自來水充分沖洗，吸管等沖流lOmin,瓶皿需每瓶灌滿、倒掉， 反復(fù)10次以上。然后再經(jīng)蒸餾水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干備用。對已用 過的

7、器皿，凡污染者必先經(jīng)煮沸30min或放3%鹽酸中浸泡過夜，未污染者可不 需滅菌處理，但仍要刷洗、清潔液浸酸過夜，沖洗等。（2）塑料器皿清洗自來水充分浸泡f沖洗一2%NaOH浸泡過夜一自來水沖洗一2%5%鹽酸浸泡 30minf自來水沖洗f蒸餾水漂洗3次f晾干f紫外線照射30min（或先用75%酒 精浸泡、擦拭，再用紫外線照射30min）。凡能耐熱的塑料器皿，最好經(jīng) 101.3kPa（121.3C）高壓滅菌。4（3）膠塞等橡膠類處理新購置者先經(jīng)自來水沖洗f2%NaOH煮沸15minf自來水沖洗一2%5%HCl煮沸 15minf自來水沖洗5次以上f蒸餾水沖洗5次以上f蒸餾水煮沸l(wèi)Omin,倒掉 沸水

8、讓余熱烘干瓶塞等?；蛘麴s水沖洗晾干，整齊擺放于小型金屬盒內(nèi)經(jīng) 101.3kPa高壓滅菌。（4）金屬器械的清洗 新購進(jìn)的金屬器械常涂有防銹油，先用沾有汽油的紗布擦去油脂，再用水洗凈，最后用酒精棉球擦拭，晾干。用過的金屬器械應(yīng)先以清水煮沸消毒，再擦拭干凈。 使用前以蒸餾水煮沸l(wèi)Omin,或包裝好以101.3kPa高壓15min。（5）除菌濾器的處理用過的濾器將濾膜去除，用三蒸水充分洗凈殘余液體，置干燥箱中烘干備用。2包裝包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染，所以經(jīng)清洗烤干或晾干的器材， 應(yīng)嚴(yán)格包裝后再行消毒滅菌處理。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、 鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。

9、包裝分為局部包裝和全包裝兩類，前者 用于較大瓶皿，一般用硫酸紙和牛皮紙將瓶口包扎好；后者適于較小培養(yǎng)瓶皿、 吸管、注射器、金屬器械和膠塞等，以下為常用瓶皿、吸管、無菌衣帽等的包裝 方法，其它物品可參照處理。瓶類：硫酸紙罩以瓶口，外罩二層牛皮紙用繩扎緊。小瓶皿、膠塞、刀剪等器械可裝人飯盒，飯盒再以牛皮紙包好，繩扎好。吸管、滴管口用脫脂棉塞上（不要太緊或太松）裝人消毒筒內(nèi)，濾器、濾瓶、橡皮管等都要用牛皮紙包好瓶口等，外罩一層牛皮紙包好，再用包布包好。無菌衣、帽、口罩，均以牛皮紙或包布包好，繩扎好。3消毒滅菌 嚴(yán)格的消毒滅菌對保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化 學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學(xué) 消毒劑等。四、【實(shí)驗報告】寫出細(xì)胞工程實(shí)驗室常用消毒滅菌的方法和適用范圍。熱滅菌：玻璃器皿，160170C, 90120min 或 180C4560min。蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不 變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、 塑料器