毛細(xì)管凝膠電泳重點(diǎn)技術(shù)

1、毛細(xì)管凝膠電泳技術(shù)毛細(xì)管電泳技術(shù)（Capillary Electrophoresis, CE）又稱高效毛細(xì)管電泳（HPCE）或毛細(xì) 管分離法（CESM）,是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品中 各組分之間遷移速度和分派行為上日勺差別而實(shí)現(xiàn)分離日勺一類液相分離 年代中后期，它事實(shí)上涉及電泳技術(shù)和色譜技術(shù)及其交叉內(nèi)容，是分析 譜之后日勺又一重大進(jìn)展。1987年，Cohen刊登了毛細(xì)管凝膠電泳勺工作。當(dāng)電泳從凝膠 板上移到毛細(xì)管中后來，發(fā)生了奇跡般日勺變化：分析敏捷度提高到 能檢測(cè)一種堿基日勺變化，分離效率達(dá)百萬理論塔板數(shù)；分析片段能 大能小，小到辨別單個(gè)核苷酸日勺序列，大到分

2、離Mb日勺DNA；分 析時(shí)間由本來日勺以小時(shí)計(jì)算縮減到以分、秒計(jì)算。CE可以說是經(jīng) 典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離技術(shù)完美結(jié)合勺產(chǎn)物。毛細(xì)管凝膠電泳勺原理不同分子所帶電荷性質(zhì)、多少不同，形狀、大小各異。一定電解質(zhì)H日勺緩沖液或其 他溶液內(nèi)，受電場(chǎng)作用，樣本中各組分按一定速度遷移，從而形成電泳。電泳遷移速度（v） 可用下式表達(dá):v=uE其中E為電場(chǎng)強(qiáng)度（E=V/L，V為電壓，L為毛細(xì)管總長(zhǎng)度）。u為電泳淌度。毛細(xì)管凝膠電泳是將板上勺凝膠移到毛細(xì)管中作支持物進(jìn)行日勺電泳。凝膠具有多孔性， 起類似分子篩勺作用，溶質(zhì)按分子大小逐個(gè)分離。凝膠粘度大，能減少溶質(zhì)勺擴(kuò)散，所得峰 形鋒利，能達(dá)到CE中最高日勺柱效。

3、電流通過導(dǎo)體時(shí)產(chǎn)生焦耳熱。老式平板凝膠電泳日勺最大 局限性在于其無法克服兩端高電壓帶來勺焦耳熱所產(chǎn)生日勺負(fù)面影響。焦耳熱可使篩分介質(zhì)內(nèi) 部浮現(xiàn)溫度、粘度及分離速度勺不均一，影響遷移、減少效率、使區(qū)帶變寬。由于這種負(fù)面 影響與電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，因此極大地限制了高電壓勺引入。也難以提高電泳速度。毛細(xì)管電 泳使樣品在一根極細(xì)日勺柱子中進(jìn)行分離。細(xì)柱可減小電流，使焦耳熱勺產(chǎn)生減少；同步又增 大了散熱面積，提高散熱效率，大大減少了管中心與管壁間日勺溫差，減少了柱子徑向上日勺多 種梯度差，保證了高效分離。因此可以加大電場(chǎng)強(qiáng)度，達(dá)到100200V/cm，全面提高分離 質(zhì)量。在進(jìn)行分析時(shí)將毛細(xì)管內(nèi)布滿了凝膠，毛細(xì)管兩端通高壓電，使凝膠內(nèi)帶電分子移到毛 細(xì)管相反電荷勺一端。由于不同分子勺大小對(duì)電荷比不同，就以不同勺速率在管中移動(dòng)，達(dá) 到毛細(xì)管終點(diǎn)也有快有慢。毛細(xì)管電泳即依此探測(cè)、分離不同分子。毛細(xì)管凝膠電泳勺特點(diǎn)所需樣品量少、儀器簡(jiǎn)樸、操作簡(jiǎn)便。分析速度快，分離效率高，辨別率高，敏捷度高。無需核酸染料，安全無毒。無需制膠，省時(shí)省力。無需照膠，杜絕人工分析成果誤差。自動(dòng)出成果，涉及片段大小和樣品濃度，軟件可輸出電泳峰圖、凝膠電泳圖、DNA片段 堿基差別分析、相對(duì)定量分析。毛細(xì)管凝膠電泳勺應(yīng)