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文檔簡介

1、生化分析儀常用分析方法課件生化分析儀常用分析方法課件主要內(nèi)容一、概述二、檢測(cè)的基本原理三、常用分析方法終點(diǎn)法固定時(shí)間法連續(xù)監(jiān)測(cè)法比濁法主要內(nèi)容一、概述終點(diǎn)法固定時(shí)間法連續(xù)監(jiān)測(cè)法比濁法一、概述 (一)自動(dòng)生化分析儀是集電子學(xué)、光學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和各種生物化學(xué)分析技術(shù)于一體的臨床生物化學(xué)檢測(cè)的主要工具一、概述 (一)自動(dòng)生化分析儀是集電子學(xué)、光學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)和(二)自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)自動(dòng)生化分析儀主要由樣品處理系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)組成(二)自動(dòng)生化分析儀基本結(jié)構(gòu)自動(dòng)生化分析儀主要由樣品處理系統(tǒng)生化分析儀常用分析方法課件生化分析儀常用分析方法課件樣品處理系統(tǒng)樣品架和樣品盤試劑架和試劑盤加液器

2、:包括定量吸量器和加樣針攪拌器:由電機(jī)和攪拌棒組成樣品架和樣品盤試劑架和試劑盤加液器:包括定量吸量器和加樣針攪檢測(cè)系統(tǒng)光路系統(tǒng):前分光光路、后分光光路分光裝置:濾光片和單色器比色杯:反應(yīng)杯信號(hào)檢測(cè)器:光電信號(hào)轉(zhuǎn)換恒溫裝置:保持恒溫,25、30、37清洗裝置:吸液針、吐液針、擦拭刷光路系統(tǒng):前分光光路、后分光光路分光裝置:濾光片和單色器比色計(jì)算機(jī)系統(tǒng)樣品和試劑的識(shí)別樣品和試劑的自動(dòng)吸加、混合及恒溫結(jié)果計(jì)算及打印數(shù)據(jù)處理樣品和試劑的識(shí)別樣品和試劑的自動(dòng)吸加、混合及恒溫結(jié)果計(jì)算及打二、檢測(cè)的基本原理 (一)自動(dòng)生化分析儀是根據(jù)光電比色原理來測(cè)量體液中某種特定化學(xué)成分的儀器二、檢測(cè)的基本原理 (一)自

3、動(dòng)生化分析儀是根據(jù)光電比色原理(二)原理:分析儀中的單色器將光源發(fā)出的復(fù)色光分成單色光,特定波長的單色光通過裝有樣品溶液的比色杯,光電轉(zhuǎn)換器將透射光轉(zhuǎn)換為電信號(hào)后送入信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析(二)原理:分析儀中的單色器將光源發(fā)出的復(fù)色光分成單色光,特(三)自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)項(xiàng)目常包括肝功能、血糖、血脂、腎功能、心肌酶譜、骨代謝、尿蛋白等,例如AST、ALT、GGT、LDH、TBA、TG、TC、ALP、GLU、UREA、UA、LDL、HDL、CK、TP等(三)自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)項(xiàng)目常包括肝功能、血糖、血脂、腎功能生化分析儀常用分析方法課件三、生化分析儀常用分析方法常用方法終點(diǎn)法固定時(shí)間法連續(xù)監(jiān)測(cè)法比

4、濁法三、生化分析儀常用分析方法終點(diǎn)法固定時(shí)間法連續(xù)監(jiān)測(cè)法比濁法(一)終點(diǎn)法(end assay)概述分類一點(diǎn)終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法(一)終點(diǎn)法(end assay)一點(diǎn)終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法概述1)終點(diǎn)法(end assay):樣本中待測(cè)物與試劑發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)生成系統(tǒng)可檢測(cè)的產(chǎn)物,當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物不再增加,吸光度不改變,根據(jù)平衡點(diǎn)吸光度的大小即能算出被測(cè)物濃度。概述2)正向終點(diǎn)法:多數(shù)化學(xué)反應(yīng)利用產(chǎn)物在某一波長處具有很強(qiáng)的光吸收,隨反應(yīng)的進(jìn)行吸光度升高,到終點(diǎn)時(shí) 吸光度最大。生化分析儀常用分析方法課件生化分析儀常用分析方法課件3)負(fù)向終點(diǎn)法:少數(shù)被測(cè)物本身在某波長處具有光吸收,經(jīng)化學(xué)反應(yīng)后隨著被測(cè)

5、物的消耗吸光度下降。生化分析儀常用分析方法課件生化分析儀常用分析方法課件分類分類一點(diǎn)終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法分類一點(diǎn)終點(diǎn)法兩點(diǎn)終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法(one point end assay)1)定義:在反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)選擇一個(gè)測(cè)光點(diǎn)的吸光度計(jì)算待測(cè)物濃度,主要用于單試劑的測(cè)定。如圖一點(diǎn)終點(diǎn)法(one point end assay)生化分析儀常用分析方法課件2)計(jì)算公式Cu=AuCs/As=AuKK=Cs/AsCu為待測(cè)物濃度Cs為標(biāo)準(zhǔn)液(校準(zhǔn)品)濃度Au為待測(cè)物終點(diǎn)吸光度值A(chǔ)s為標(biāo)準(zhǔn)液終點(diǎn)吸光度值(K為校準(zhǔn)系數(shù))2)計(jì)算公式Cu=AuCs/As=AuKK=Cs/AsC3)臨床應(yīng)用臨床常用于測(cè)定總蛋白、白蛋白

6、等的濃度3)臨床應(yīng)用臨床常用于測(cè)定總蛋白、白蛋白等的濃度兩點(diǎn)終點(diǎn)法(two point end assay)1)定義:常應(yīng)用于具有雙試劑的測(cè)定項(xiàng)目中,第一試劑(R1)通常只含緩沖液等成分,它與樣本一般不起特異性反應(yīng),在第二試劑(R2)加入前,選擇某一點(diǎn)讀取吸光度值A(chǔ)1,它是由樣品本身或第一試劑與樣品非特異性反應(yīng)引起,相當(dāng)于樣品空白;加入第二試劑(R2)后經(jīng)過一段時(shí)間反應(yīng)達(dá)終點(diǎn)(平衡)后選擇第二個(gè)點(diǎn)讀取吸光度A2,根據(jù)兩個(gè)吸光度差,計(jì)算出待測(cè)物濃度。如圖兩點(diǎn)終點(diǎn)法(two point end assay)生化分析儀常用分析方法課件2)計(jì)算公式 (因加入R2后總體積不同,需要根據(jù)體積進(jìn)行校正,式中

7、a為體積校正因子,目前全自動(dòng)生化分析儀均具有自動(dòng)校正功能,不必手工校正)Cu=(A2-aA1)Ka=(Sv+R1v)/(Sv+R1v+R2v)K=Cs/As2)計(jì)算公式Cu=(A2-aA1)Ka=(Sv+R1v)3)臨床應(yīng)用兩點(diǎn)終點(diǎn)法能有效消除樣本溶血(hemolysis)、黃疸(icterus)和脂濁(lipo-turbid)等造成的光吸收干擾常用于臨床酶法測(cè)定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐等的測(cè)定3)臨床應(yīng)用(二)固定時(shí)間法(fixed-time assay)概述計(jì)算公式臨床應(yīng)用(二)固定時(shí)間法(fixed-time assay)概述1)固定時(shí)間法(fixed-time assay

8、):指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)測(cè)光點(diǎn),此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度,亦非終點(diǎn)吸光度,即樣品和試劑混合后讀取延滯期后的吸光度A1和反應(yīng)一定時(shí)間的吸光度A2,這兩點(diǎn)的吸光度差值用于計(jì)算結(jié)果。如圖概述生化分析儀常用分析方法課件2)快速反應(yīng)干擾物:在樣本中含有明顯干擾待測(cè)物反應(yīng)的物質(zhì)時(shí),固定時(shí)間法能有效去除這些干擾,提高特異性。某些干擾物比待測(cè)物更快與試劑發(fā)生反應(yīng)。3)慢反應(yīng)干擾物:一些干擾物在待測(cè)物反應(yīng)完全后才開始發(fā)生反應(yīng)。生化分析儀常用分析方法課件計(jì)算公式 C=(A2-A1)K K為校準(zhǔn)系數(shù)K=Cs/As計(jì)算公式 C=(A2-A1)K K臨床應(yīng)用 主要應(yīng)用于樣本中有物質(zhì)明顯干擾待測(cè)物反應(yīng)的情況,如

9、苦味酸法測(cè)定肌酐、溴甲酚氯法測(cè)定血清白蛋白等臨床應(yīng)用 主要應(yīng)用于樣本中有物質(zhì)明顯干擾待測(cè)物反應(yīng)的情況(三)連續(xù)監(jiān)測(cè)法(continuous monitoring assay) 概述計(jì)算公式常用分類兩點(diǎn)速率法多點(diǎn)速率法(三)連續(xù)監(jiān)測(cè)法(continuous monitoring概述1)連續(xù)監(jiān)測(cè)法(continuous monitoring assay):又稱速率法(rate assay),是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí),連續(xù)選取時(shí)間吸光度曲線的線性期內(nèi)(如圖)4個(gè)以上測(cè)光點(diǎn)測(cè)定吸光度,計(jì)算單位時(shí)間吸光度變化值 A/min,其大小與被測(cè)酶活性成正比。概述生化分析儀常用分析方法課件2)正向連續(xù)

10、監(jiān)測(cè)法:指反應(yīng)吸光度升高的反應(yīng)3)負(fù)向連續(xù)監(jiān)測(cè)法:指反應(yīng)吸光度降低的反應(yīng)生化分析儀常用分析方法課件計(jì)算公式酶活性(U/L)=A/minK代謝物濃度Cu=A/minK校準(zhǔn)K值=(校準(zhǔn)品酶活性U/L)s/(校準(zhǔn)品A/min)s計(jì)算公式酶活性(U/L)=A/minK代謝物濃度Cu=常用分類1)兩點(diǎn)速率法:在酶促反應(yīng)的過程中,觀察兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度變化,用兩個(gè)吸光度的差值A(chǔ)除以時(shí)間(分鐘),得到每分鐘的吸光度,計(jì)算酶的活性或濃度。如圖常用分類生化分析儀常用分析方法課件2)多點(diǎn)速率法:在酶促反應(yīng)的過程中,每隔一定時(shí)間(230秒)監(jiān)測(cè)一次,連續(xù)監(jiān)測(cè)多次,求出單位時(shí)間內(nèi)吸光度的變化,計(jì)算酶活性或濃度。如圖生

11、化分析儀常用分析方法課件生化分析儀常用分析方法課件(四)比濁測(cè)定法(turbidimetric assay)概述分類化學(xué)比濁法免疫比濁法(四)比濁測(cè)定法(turbidimetric assay)化概述1)比濁法(turbidimetric assay):是通過測(cè)定微粒性物質(zhì)對(duì)光的散射或透射強(qiáng)度來測(cè)定物質(zhì)的濃度,主要用于測(cè)定能形成懸浮體的微粒物質(zhì)。當(dāng)光線通過一渾濁溶液時(shí),懸浮的顆粒物質(zhì)一方面選擇性地吸收一部分光能,另一方面向各個(gè)方向散射一部分光能,使透過溶液的光強(qiáng)度減弱。2)比濁法也采用終點(diǎn)法原理,尤其是兩點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行檢測(cè)。概述分類分類化學(xué)比濁法免疫比濁法分類化學(xué)比濁法免疫比濁法化學(xué)比濁法1)基

12、本原理:待測(cè)物在一定條件下反應(yīng)形成不可溶的細(xì)微沉淀,這些微粒的存在是透過反應(yīng)溶液的光減弱,通過檢測(cè)透光強(qiáng)度,計(jì)算出樣本中物質(zhì)的濃度?;瘜W(xué)比濁法2)臨床應(yīng)用:如采用三氯乙酸、黃基水楊酸法測(cè)定尿液、腦脊液中的蛋白質(zhì)。3)評(píng)價(jià):該方法靈敏度高,但影響因素很多,重復(fù)性較差。生化分析儀常用分析方法課件免疫比濁法1)基本原理:抗原與抗體發(fā)生反應(yīng)形成可溶性免疫復(fù)合物,通過某種方法使其自液相析出,形成微粒,這些微粒具有對(duì)光的反射和折射的能力,通過檢測(cè)散射光或透射光的強(qiáng)度,計(jì)算出待測(cè)物的濃度。免疫比濁法2)根據(jù)測(cè)定的光線不同分類 免疫散射比濁法(immuno-scatter turbidimeter) 免疫透射比濁法(immuno-transmission turbidimeter)在

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