初始污染菌檢測

1、初始污染菌檢測2022/9/31第1頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一參考標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國藥典2005版 附錄 微生物限度檢查法ISO 11737-1:2006 Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 1: Determination of a population of microorganisms on productsGB/T 19973.1 /ISO 11737-1:1995 醫(yī)療器械的滅菌 微生物方法 第一部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計GB 15980-1995 一次性使用醫(yī)療

2、用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)2022/9/32第2頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一檢測環(huán)境及檢驗(yàn)量應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行一般供試品的檢驗(yàn)量為310個獨(dú)立包裝的同批次供試品。（見ISO 11737-1:2006 A8.1）2022/9/33第3頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液濾器、微孔濾膜（孔徑0.45微米，直徑50mm）、量筒、剪刀、鑷子、培養(yǎng)皿過濾裝置、電子天平、壓力蒸汽滅菌器、生化培養(yǎng)箱等2022/9/34第4頁，共15頁，2022年，5月20日，2

3、0點(diǎn)23分，星期一主要步驟采樣供試液制備培養(yǎng)菌落計數(shù)2022/9/35第5頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一供試液的制備用？ml 氯化鈉-蛋白胨緩沖液浸提？小時（包括最內(nèi)層包裝的內(nèi)壁）-所需供試液的用量和浸提時間需驗(yàn)證處理方法：振動、沖洗、擦拭法、袋蠕動、超聲、渦旋混合、攪拌2022/9/36第6頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一舉例振動小型醫(yī)療器械可以投入無菌的自封袋中，加入緩沖液充分振動。另外，用緩沖液沖洗內(nèi)包裝袋的內(nèi)壁。并與產(chǎn)品緩沖液相混。2022/9/37第7頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一梯度稀釋1ml1ml1

4、ml1ml1ml1ml1ml1ml供試液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:10002022/9/38第8頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一轉(zhuǎn)至培養(yǎng)基膜過濾法適用于微生物濃度較低的懸液平板傾注適用于微生物濃度較高的懸液平板涂布適用于微生物濃度較高的懸液螺旋涂布2022/9/39第9頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一薄膜過濾法2022/9/310第10頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一培養(yǎng)藥典中的培養(yǎng)條件： 細(xì)菌 30-35 48h 霉菌、酵母菌 23-28 72h 必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至5-7天2022

5、/9/311第11頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一菌落計數(shù)計數(shù)方法：將平板置菌落計數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點(diǎn)計，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計數(shù)。必要時可以借助于放大鏡、菌落計數(shù)器。菌落特征： 形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黃色（如果培養(yǎng)基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑試劑)，菌落為紅色） 邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。 大小差異很大。2022/9/312第12頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一計數(shù)方法的驗(yàn)證回收率驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)

6、的回收率。A 試驗(yàn)組 供試液+試驗(yàn)菌（50100cfu）B 菌液組 試驗(yàn)菌（50100cfu）C 供試品對照組 D緩沖液對照組 緩沖液+試驗(yàn)菌（50100cfu）(A-C)/B70% D/B70%2022/9/313第13頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一菌落計數(shù)報告規(guī)則平板法選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)在30300之間、霉菌平均菌落數(shù)在30100之間的稀釋級作為報告菌落數(shù)的依據(jù)。1）如只有1個稀釋級平均菌落數(shù)符合上述規(guī)定，則將稀釋級的菌落數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報告。2）如有兩個相鄰稀釋級的平均菌落數(shù)在30300之間，則先計算兩稀釋級菌落數(shù)的比值。 高稀釋級的平均平板菌落數(shù)稀釋

7、倍數(shù) 比值= 低稀釋級的平均平板菌落數(shù)稀釋倍數(shù) 當(dāng)比值2時，則以2個稀釋級的平均菌落數(shù)均值報告；當(dāng)比值2但不超過5時，則以低稀釋級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；當(dāng)比值大于5，或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌落數(shù)等異常情況時，應(yīng)查明原因再進(jìn)行檢查，必要時，應(yīng)進(jìn)行方法的重新驗(yàn)證。3）如各稀釋級平均菌落數(shù)均在300以上，則按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告；如各稀釋級平均菌落數(shù)均在30以下，則按最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。4）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時，以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)2022/9/314第14頁，共15頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)23分，星期一菌落計數(shù)報告規(guī)則薄膜過