放線菌形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)原理及步驟

1、實(shí)驗(yàn)八 放線菌形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆沼^察放線菌形態(tài)的基本方法，并觀察放線菌的形態(tài)特征。實(shí)驗(yàn)原理：放線菌是指能形成分枝絲狀體或者菌絲體的一類革蘭氏陽性菌,常見的放線菌大多能形成菌絲體,緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱基絲),基絲長(zhǎng)到一定程度還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱氣絲),并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲以及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)觀察放線菌的形態(tài)特征常用扦片法、玻璃紙法、印片法。實(shí)驗(yàn)器材：1.菌種 細(xì)黃鏈霉菌（Streptomyces microflavus）或青色鏈霉菌（Streptomyce

2、s glaucus），弗氏鏈霉菌（S. glaucus）。2.培養(yǎng)基 菌的高氏號(hào)瓊脂3.儀器或其他用具 滅菌的平皿，玻璃管，蓋玻片，玻璃棒，以及載玻片，接種環(huán)，接種鏟，鑷子，顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1. 放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察 (1) 將滅菌后的高氏1號(hào)培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，每皿倒15ml左右，凝固后備用。 (2) 用經(jīng)火焰滅過菌的小鑷子將滅菌過的優(yōu)質(zhì)玻璃紙平鋪在平皿培養(yǎng)基上，如果瓊脂培養(yǎng)基和玻璃紙之間有氣泡，可以用滅過菌的玻璃棒將氣泡除去。 (3) 將35ml無菌水倒入鏈霉菌的斜面培養(yǎng)物里，制成菌懸液，再適當(dāng)稀釋。 (4) 用無菌吸管取0.1ml的孢子懸液稀釋液，接種在玻璃紙上，并用無菌玻璃棒涂勻

3、后，置28培養(yǎng)，直到菌長(zhǎng)好，備用。 (5) 在潔凈的載玻片上滴一小滴水，稍涂布。取出培養(yǎng)皿，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開，再用剪刀剪取小片長(zhǎng)有菌的玻璃紙，菌面朝上放在載玻片的水面上，使紙平貼在載玻片上。 (6) 將載玻片置顯微鏡下觀察。附：玻璃紙滅菌方法 在玻璃紙滅菌時(shí)，若直接將干燥的玻璃紙滅菌，它會(huì)縮小，發(fā)皺，不便使用。故需作如下處理：將玻璃紙和濾紙剪成培養(yǎng)皿大小的圓形紙片，用水浸泡后把濕濾紙和玻璃紙交互重疊地放在培養(yǎng)皿中，借濾紙將玻璃紙隔開。然后進(jìn)行濕熱滅菌，備用。2. 營(yíng)養(yǎng)菌絲的觀察 (1) 用接種鏟連同培養(yǎng)基挑取細(xì)黃鏈霉菌菌苔置載玻片中央。 (2) 用另一載玻片將其壓碎，棄去培

4、養(yǎng)基，制成涂片，干燥，固定。 (3) 用呂氏堿性美藍(lán)染液或石炭酸復(fù)紅染液染0.5-1分鐘，水洗。 (4) 干燥后，用油鏡觀察營(yíng)養(yǎng)菌絲的形態(tài)。3. 氣生菌絲與營(yíng)養(yǎng)菌絲的比較觀察。 (1) 將高氏號(hào)培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿，制成4mm左右的培養(yǎng)基平板，經(jīng)培養(yǎng)后無菌，備用。 (2) 用火焰滅菌的鑷子將無菌蓋玻片以45度傾斜角插入平皿培養(yǎng)基瓊脂內(nèi)，然后將細(xì)黃鏈霉菌的孢子懸液（濃度以稀釋10-210-3為好），接種在蓋玻片與平皿培養(yǎng)基的界面上。 (3) 倒置于28培養(yǎng)45天后，小心的將蓋玻片取出，把有菌的一面朝上，放在載玻片上，置顯微鏡下進(jìn)行觀察。一般情況是氣生菌絲顏色較深，并比營(yíng)養(yǎng)菌絲粗二倍左右。4. 孢

5、子絲及孢子的觀察 (1) 將培養(yǎng)34天的細(xì)黃鏈霉菌的培養(yǎng)皿打開，放在顯微鏡低倍鏡下尋找菌落的邊緣，直接觀察氣生菌絲和孢子絲的形態(tài)，注意分枝情況、卷曲情況等。 (2) 取清潔的蓋玻片一塊，在菌落上面輕輕的按壓一下，然后將印有痕跡的一面朝下放在有一滴呂氏堿性美藍(lán)染液的載玻片上，將孢子等印浸在染液中，制成印片。用油鏡觀察孢子的形態(tài)，孢子絲等。 (3) 用小刀切取細(xì)黃鏈霉菌培養(yǎng)物一塊（帶培養(yǎng)基切下）。菌面朝上放在一載玻片上，另取一潔凈載玻片置火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕按壓，使培養(yǎng)物（氣絲、孢子絲或孢子）印在后一塊載玻片的中央，注意不要使培養(yǎng)物在玻片上滑動(dòng)，否則印痕模糊不清。將制好的印片通過火焰2-3次固定，用石炭酸復(fù)紅染色1min，水洗，晾干。用油鏡觀察孢子絲的形態(tài)及孢子排列情況。實(shí)驗(yàn)報(bào)告：