A20在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)

1、A20在前線腺癌細(xì)胞中的表達(dá)閏瑋,劉家云,蘇明權(quán),李曉瑾,郝曉柯【關(guān)鍵詞】A20;,鋅指卵白;,前線腺癌摘要目的:探究A20腫瘤壞死因子可誘導(dǎo)的低級應(yīng)答基因在前線腺癌各細(xì)胞系中的表達(dá)及意義。要領(lǐng):RTPR檢測體外造就的前線腺癌細(xì)胞P3,P3,Du145,LNap和22RV1中A20RNA的表達(dá),esternblt檢測A20卵白質(zhì)(鋅指卵白A20)的表達(dá)。效果:RTPR和esternblt檢測表現(xiàn)A20在前線腺癌5種細(xì)胞系中均表達(dá),但表達(dá)程度有差異,在P3和P3細(xì)胞中A20在RNA和卵白質(zhì)表達(dá)水均勻明顯高于別的3種細(xì)胞系(P001)。結(jié)論:A20在各前線腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)不盡雷同,對A20表達(dá)的

2、研究對付下一步研究該基因在前線腺癌產(chǎn)生生長中的作用有緊張意義。關(guān)鍵詞A20;鋅指卵白;前線腺癌A20基因最初是在人臍靜脈血管上皮細(xì)胞中創(chuàng)造而且開始研究的,被以為是腫瘤壞死因子可誘導(dǎo)的低級應(yīng)答基因,其基因產(chǎn)物為鋅指卵白A20zinfingerprtEinA201,2。該卵白具有按捺NFB的活性和在一些細(xì)胞中具有抗凋亡作用的雙重活性。研究創(chuàng)造A20在人宮頸癌HeLa細(xì)胞、肺上皮A549細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞中不具有抗凋亡的成效,如今還不明晰為什么僅有一些細(xì)胞受到A20的庇護(hù)及其庇護(hù)機(jī)制3,4。如今對A20的研究重要會合于它鄙人調(diào)NFB活性的機(jī)制及接納差異刺激因子刺激后A20表達(dá)程度的變革方面5

3、。對A20在前線腺癌各細(xì)胞系中的表達(dá)狀態(tài),所起的作用及作用機(jī)制還不明晰6。本研究中我們接納RTPR和esternblt對P3、P3、LNap、Du145和22RV1人前線腺癌細(xì)胞中A20舉行檢測,為下一步研究A20在前線腺癌形成及生長中的機(jī)制奠基了基矗1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料人前線腺癌細(xì)胞由本室保存,RPI1640造就基為Gib公司產(chǎn)物。小牛血清為杭州四序青公司產(chǎn)物。A20單克隆抗體Ab購自albihe公司;羊抗小鼠的二抗,E顯色液及atinAb購自武漢博士德公司;Trizl試劑購自Invitrgen公司;DNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Prega公司,細(xì)胞裂解液為碧云天公司產(chǎn)物。電轉(zhuǎn)印儀為BIRAD公司

4、ini2Dell電轉(zhuǎn)印儀,DU800核酸卵白闡發(fā)儀為貝克曼公司產(chǎn)物。全部引物均由TaKaRa公司合成。1.2要領(lǐng)2效果2.1RTPR效果5種前線腺癌細(xì)胞均有A20RNA的表達(dá),片斷巨細(xì)為882bp,與估計效果同等。百般本atin比較均在相應(yīng)位置353bp處出現(xiàn)顯著的擴(kuò)增條帶,表白提取各細(xì)胞中RNA的質(zhì)量及RTPR歷程均較精良圖1,P3、P3、Du145與22RV1之間有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P001),LNap與22RV1之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P005),說明A20在差異的前線腺癌細(xì)胞系中表達(dá)程度有差異,在P3、P3中表達(dá)相對較高表1。圖15種前線腺癌細(xì)胞A20的RTPR效果略:DL2000arker

5、;1:P3;2:P3;3:DU145;4:LNap;5:22RV1.表1A20RTPR產(chǎn)物瓊脂糖電泳圖像掃描闡發(fā)效果略bP0.01vs22RV1.2.2esternblt闡發(fā)在相對分子質(zhì)量(r)80000四周,P3、P3、Du145、LNap與22RV1細(xì)胞均有陽性條帶,與預(yù)期效果同等。通過與內(nèi)參atinr42000比力表現(xiàn),P3,P3中表達(dá)相對較高,22RV1中表達(dá)相對較低圖2。圖25種前線腺癌細(xì)胞A20的卵白質(zhì)效果略1:P3;2:P3;3:DU145;4:LNap;5:22RV1.3討論A20最初被以為是一種TNF誘發(fā)凋亡的按捺因子1,2。對很多細(xì)胞系而言,A20不變的高表達(dá)可以或許按捺T

6、NF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。如今研究證明IL1和D40平分子均可引起A20的高表達(dá)7,然而并不是在全部的細(xì)胞中,A20均表示出按捺細(xì)胞凋亡,庇護(hù)細(xì)胞的成效。在人類乳腺癌F7細(xì)胞、鼠成纖維細(xì)胞瘤EHI164細(xì)胞、鼠胚胎成纖維NIH3T3細(xì)胞、胰島細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中均表示抗調(diào)亡成效3,4。除了是一種抗凋亡分子之外,A20還被以為是一種NFB依靠性基因表達(dá)的強(qiáng)盛按捺劑,可以或許直接負(fù)反響調(diào)治NFB的表達(dá)5。在很多差異細(xì)胞中,A20過分表達(dá)都可以或許阻斷由于TNF、IL1、LPS和過氧化氫引起的NFB的活化7,從而按捺炎癥相干基因的表達(dá),防范體內(nèi)炎癥反響的失控。本研究效果表現(xiàn),A20在P3和LNaP中的

7、表達(dá)與外洋報道的同等,而在P3,Du145和22RV1中的表達(dá)國表里未見報道。A20卵白和RNA的表達(dá)程度經(jīng)方差闡發(fā)表現(xiàn)表達(dá)程度不全雷同(P001),接納多樣本均數(shù)間的兩兩比力LSD接納方差闡發(fā)ANVA,P3、P3、DU145與22RV1之間效果有統(tǒng)計學(xué)差異(P001),而LNaP與22RV1之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P005),說明A20卵白和RNA在差異的前線腺癌細(xì)胞中表達(dá)程度差異,P3和P3細(xì)胞中的表達(dá)相對較高。A20可以或許直接負(fù)反響調(diào)治NFB的表達(dá),從而將炎癥反響限定到必然程度;它還在某些細(xì)胞系中表示出按捺細(xì)胞凋亡,庇護(hù)細(xì)胞的成效。對A20在前線腺癌中的研究將有大概為前線腺癌的治療提供新的

8、靶點和思緒。參考文獻(xiàn):1DixitV,GreenS,SaraV,etal.TurnersisfatralphaindutinfnvelgeneprdutsinhuanendthelialellsinludingaarphagespeifihetaxinJ.JBilhe,1990,265(5):2973-2978.2pipariAJr,BguskiS,DixitV.TheA20DNAinduedbyturnersisfatralphaendesanveltypefzinfingerprtEinJ.JBilhe,1990,265(25):14705-14708.3pipariAJr,HuH,Yab

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