紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕及對妊娠小鼠離體子宮

1、紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕及對妊娠小鼠離體子宮【摘要】目的觀察紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕及對妊娠小鼠離體子宮肌條的收縮作用。方法對妊娠昆明種小鼠于妊娠第68天給藥，共8組，每組10只,觀察妊娠抑制率；用放射免疫法測定血清中孕酮的程度。建立離體子宮平滑肌裝置，研究紫草總酚酸對孕齡510d的受孕小鼠的離體子宮平滑肌的作用。結(jié)果用小鼠口服紫草總酚酸1040gkg-1可以顯著性的進步單用米非司酮1.5gkg-1的妊娠抑制率P0.05，并能增加實驗組平均死胎數(shù)，但是對血清孕酮的程度沒有明顯的影響P0.05。紫草總酚酸有顯著增強早孕小鼠離體子宮平滑肌條的收縮活性的作用與給藥前比

2、擬P0.01。結(jié)論紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕作用明顯，其抗早孕作用不是通過降低孕酮程度來實現(xiàn)的。紫草總酚酸可顯著增強早孕小鼠離體子宮平滑肌條的收縮活性。【關(guān)鍵詞】紫草總酚酸；小鼠；抗早孕；子宮肌條Abstrat:bjetiveTbservetheeffetfphenliaidsfrArnebiaeuhraassistifepristneinanti-Earlypregnanyfieandtheeffetfthephenliaidsnntratileativityfislateuterinesthuslestripsingravidrats.ethdsTheieithphenlia

3、idsduringthe6tht8thdays,andtherestainingratefpregnanyasbserved.Atthesaetie,theprgesternelevelinbldseruasdeseruinedbyradiiunassay.Theequipentfislateuterinesthusleasusedtstudytheeffetfthephenliaidsnislateuterinesthuslestripsingravidratsthathasbeenpregnanyfr510days.Results1040g/kgphenliaidsuldarkedlyin

4、reasetherestainingratefpregnany(P0.05)induedbyifepristnedse(1.5gkg-1).Inadditin,thenuberfeveragestillbirthinreased,hever,tthetheprgesternelevelinbldseru,ithaslittleeffet.(P0.05).Thephenliaidshadaarkedeffetnntratileativityfislateuterinesthuslestripsingravidrats.nlusinTheeffetfthephenliaidsassistifepr

5、istneinanti-Earlypregnanyfieislearhihisntrelevanttthedereasefprgesternelevelphenliaidshasaarkedeffetnntratileativityfislateduterinesthuslestripsingravidrats.Keyrds:PhenliaidsfrArnebiaeuhra;ie;Anti-earlypregnany；Uterinesthuslestrips新疆紫草Arnebiaeuhra(Ryle)Jhnst.為常用中藥，具有涼血、活血、解毒透疹的功能；用于血熱毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、瘡瘍

6、、濕疹、水火燙傷。在國家高技術(shù)研究開展方案863方案資助下，張慧楨等1全面系統(tǒng)地進展了新疆紫草酚酸類化合物有效部位的化學(xué)成分、制備工藝、質(zhì)量標準及輔助藥物流產(chǎn)藥理作用2的研究。本文報道紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕及對妊娠小鼠離體子宮肌條的收縮作用。1材料與儀器1.1藥物米非司酮，由上海市華聯(lián)制藥提供，25g/片不包括輔料量，批號20010510，用1%的羧甲基纖維素鈉制成混懸液備用。紫草總酚酸，棕褐色顆粒,酚酸含量57%，由上海市方案生育科學(xué)研究所國家方案生育藥具重點實驗室提供，批號20011216，用蒸餾水溶解，配成260gl-1,4冰箱保存。低鈣任-洛氏營養(yǎng)液，Nal153.8

7、lL-1(分析純,上海建信化試劑廠,批號20001114)，Kl5.77lL-1(化學(xué)純,上?；瘜W(xué)試劑總廠試劑一廠,批號20001213)，NaH35.95lL-1(化學(xué)純,上海虹光化工廠,批號20010213)，al20.54lL-1(分析純,金山縣興塔化工廠,批號20010314)，葡萄糖16.7lL-1(分析純,上海化學(xué)試劑分裝廠,批號20001019)?？s宮素：上海禾豐制藥，10ul-1)，用蒸餾水配制成1u/l濃度。1.2動物成年,未孕昆明種雌性小鼠(體質(zhì)量為2530g),由上海醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心供給，清潔級，動物合格證：02-22-1。動物飼養(yǎng)于上海市方案生育科學(xué)研究所實驗動物房

8、，人工晝夜，室溫202，相對濕度65%70%。1.3儀器lypusX41-3202光學(xué)顯微鏡,日本產(chǎn)品。501型超級恒溫器，上海市實驗儀器廠產(chǎn)品。麥氏浴槽，型號Y，上海中勝科教設(shè)備產(chǎn)品。張力換能器，型號XJZ-3，上海中勝科教設(shè)備產(chǎn)品。生物信號處理系統(tǒng)，型號SUP-P，上海市嘉龍教儀廠產(chǎn)品。2方法2.1輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕作用2.1.1受孕選用體質(zhì)量2630g處于動情期或動情前期的雌鼠與同種雄鼠按照雌雄21合籠交配,每天清晨8：009：00檢查陰道有無陰栓,無陰栓的小鼠做陰道涂片，顯微鏡下觀察有無精子，將查到陰栓者或顯微鏡下查到精子者作為妊娠第1天,雌、雄鼠2周交配不成功者剔除3。取

9、妊娠小鼠80只,隨機分成7個實驗組和1個正常對照組，每組10只。2.1.2分組與給藥單用米非司酮組：妊娠第6，7，8日上午9：0010：00灌胃給藥1.5gkg-1米非司酮；單用紫草總酚酸低、中、高劑量組：于妊娠第6，7，8日上午9：0010：00分別灌胃給藥紫草總酚酸260，520，1040gkg-1；米非司酮+紫草總酚酸低、中、高劑量合用組：妊娠第6，7，8日上午9：0010：00灌胃1.5gkg-1米非司酮，妊娠第6，7，8日下午15：0016：00分別灌胃260，520，1040gkg-1的紫草總酚酸；正常對照組灌胃同體積蒸餾水。2.1.3一般觀察各實驗組均于妊娠第12天解剖，檢查子宮

10、內(nèi)胚胎情況，剪取兩側(cè)子宮稱重，計算死胎活胎數(shù)和各實驗組的平均死胎數(shù)，統(tǒng)計給藥組妊娠抑制率，與對照組比擬有無統(tǒng)計學(xué)差異。2.1.4指標檢測各實驗組的小鼠于妊娠第12天斷頭取血，按RIA法測定血清中孕酮的含量。2.1.5統(tǒng)計檢驗采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件PES3.1進展統(tǒng)計處理，各項數(shù)值均用s標準差表示，妊娠抑制率用卡方檢驗，子宮重量和孕酮含量采用exel進展t檢驗。2.2對妊娠小鼠離體子宮肌條的收縮作用2.2.1預(yù)處理浴槽中放置洛氏液22l，水溫控制在(370.5)，記錄儀靈敏度調(diào)至1g。受孕510d左右雌性小鼠在實驗前兩天，用雌二醇20g/10g，腹腔注射，每隔24h注射1次。實驗當(dāng)天，將小鼠頸椎脫臼處

11、死，割腹取出子宮立即置于盛有低鈣任-洛氏液的玻璃平皿中,輕柔剝離附著于子宮壁上的結(jié)締組織和脂肪組織,將一側(cè)子宮角的兩端分別用線結(jié)扎，兩線間距0.81.0,置于浴槽內(nèi)20l,子宮角標本一端和通氣鉤相連，另一端與張力換能器接入端上鉤子相連，靜息張力調(diào)至1.0g。2.2.2正常子宮肌張力檢測標本在浴槽內(nèi)低鈣任-洛氏營養(yǎng)液中穩(wěn)定35in,同時通以95%2+5%2混合氣體,工作溫度3032,其間每隔15in更換低鈣任-洛氏營養(yǎng)液1次，后1次更換液后5in,記錄正常的子宮肌張力。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.3加縮宮素子宮肌張力檢測將1u/l縮宮素0.1l參加浴槽此時藥物濃度為510-3u/l,觀察及記錄

12、平滑肌張力的變化，記錄到最大值時，穩(wěn)定5in后，用低鈣任-洛氏營養(yǎng)液洗滌次，讓子宮肌條重新穩(wěn)定到加藥前的基線。2.2.4加紫草總酚酸子宮肌張力檢測按“2.2.3操作，藥物的濃度均為50g/l，給藥量為0.1l，加藥后觀察的時間為5in，觀察并記錄結(jié)果，總共做個樣本。2.2.5檢測指標收縮強度:5in內(nèi)各次收縮最高點均值；收縮頻率：5in內(nèi)收縮次數(shù)；收縮活性：5in內(nèi)收縮強度與收縮頻率的乘積。2.2.6統(tǒng)計檢驗采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件PES3.1進展統(tǒng)計處理，各項數(shù)值均用s表示,統(tǒng)計分析用配對計量資料檢驗和t檢驗，顯著性程度取P=0.05和0.01。3結(jié)果3.1紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕作

13、用3.1.1肉眼觀察對照組小鼠妊娠子宮直徑粗，淡紅色，呈結(jié)節(jié)狀，外表光滑而有光澤，胚胎發(fā)育良好，呈密集串珠狀。米非司酮組小鼠出現(xiàn)不完全流產(chǎn)，子宮直徑比對照組細，呈暗紅色，有淤血現(xiàn)象。單純紫草總酚酸低劑量組小鼠的子宮類似對照組的子宮，但直徑較細，結(jié)節(jié)狀，局部胚胎出現(xiàn)淤血，其余胚胎發(fā)育良好；單純紫草總酚酸中劑量組和高劑量組小鼠的子宮出現(xiàn)不完全流產(chǎn)，子宮直徑較對照組細，呈暗紅色，個別子宮甚至出現(xiàn)完全流產(chǎn)，胚胎有壞死淤血現(xiàn)象。米非司酮+紫草總酚酸低劑量組的小鼠大局部出現(xiàn)完全流產(chǎn)，其子宮直徑與對照組相比擬明顯減小，暗紅色，結(jié)節(jié)不明顯，外表光澤差，胚胎無或發(fā)育差，有淤血壞死現(xiàn)象。米非司酮+紫草總酚酸中劑量

14、組的小鼠大局部完全流產(chǎn)，無結(jié)節(jié)狀膨大，子宮血管增生，呈灰紅色。米非司酮+紫草總酚酸高劑量組小鼠全部出現(xiàn)完全流產(chǎn)，子宮直徑細，無結(jié)節(jié)狀膨大，無胚胎，呈灰白色。3.1.2病理組織學(xué)檢查正常對照組胚胎發(fā)育正常，單用中藥組胚胎根本發(fā)育正常；米非司酮組胚胎細胞形態(tài)構(gòu)造有細微紊亂和萎縮，底蛻膜外表出血，局部細胞有異形，蛻膜出血；合用藥組囊胚內(nèi)細胞團局部細胞空泡變，外表有出血壞死，可見少量異形細胞。3.1.3各實驗組的妊娠抑制率和平均死胎數(shù)和對照組相比擬米非司酮組的妊娠抑制率與對照組相比擬有顯著性差異(P0.05);紫草總酚酸低劑量組、紫草總酚酸中劑量組和紫草總酚酸高劑量組的妊娠抑制率與對照組相比擬均無顯著

15、性差異(P0.05);米非司酮+紫草總酚酸低、中、高劑量組的妊娠抑制率與對照組相比擬均有非常顯著性差異(P0.01)。米非司酮+紫草總酚酸高劑量組的妊娠抑制率與米非司酮組相比擬也有顯著性差異(P0.05)。紫草總酚酸單用組即可使得局部胚胎死亡，紫草總酚酸與米非司酮合用時那么能使得平均死胎數(shù)增加，平均死胎數(shù)增加的程度隨著紫草總酚酸劑量的增加而增加。3.1.4各實驗組的子宮重量的變化與對照組相比擬米非司酮組、紫草總酚酸中劑量組和高劑量組的子宮重量均顯著性減輕(P0.05),而紫草總酚酸低劑量組子宮重量與對照組相比擬沒有顯著性差異P0.05;米非司酮+紫草總酚酸低、中、高各實驗組的子宮重量與對照組相

16、比擬非常顯著性減輕P0.01;米非司酮+紫草總酚酸中劑量組和米非司酮+紫草總酚酸高劑量組與單用米非司酮組的子宮重量也有顯著性減輕P0.05。見表1。表1紫草總酚酸輔助米非司酮對妊娠小鼠的抗早孕作用略3.1.5各實驗組的孕酮含量與對照組相比擬均無顯著性差異P0.05，說明米非司酮、紫草總酚酸以及兩藥合用對孕酮程度均無明顯影響。見表2。表2紫草總酚酸對妊娠小鼠孕酮含量的影響略3.2紫草總酚酸對早孕小鼠離體子宮平滑肌條收縮的影響用藥后紫草總酚酸50gl-1，0.1l早孕小鼠離體子宮平滑肌條的收縮強度和收縮活性有非常顯著的增加P0.01。見表3。表3紫草總酚酸對早孕小鼠離體子宮平滑肌條收縮的影響略4討

17、論國內(nèi)外使用米非司酮與不同的前列腺素的配伍仍存在7%10%的不完全流產(chǎn)率和失敗率5，因此進步藥流療效仍非常重要。有研究說明紫草可在一定的程度上進步藥物的完全流產(chǎn)率和縮短出血時間4。我們使用紫草總酚酸輔助米非司酮對小鼠進展抗早孕實驗，發(fā)現(xiàn)紫草總酚酸輔助米非司酮對小鼠的早孕有極強的抑制作用，1040gkg-1的紫草總酚酸輔助小劑量的米非司酮1.5gkg-1即可使得動物全部流產(chǎn)。孕酮在妊娠早期主要由妊娠黃體分泌，因此孕早期的變化并不十清楚顯，孕酮在孕早期略有增加。孕酮含量的維持與變化對于胚胎是非常重要的，而米非司酮主要是作用于子宮內(nèi)膜和蛻膜，與孕酮競爭結(jié)合受體，使孕酮與其受體正常作用受到干擾，從而抑制孕酮的活性，破壞了胚胎生長的條件，使妊娠不能維持。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)各實驗組的孕酮含量并沒有明顯的變化，因此其抗早孕作用不是通過降低孕酮程度來實現(xiàn)的，有實驗說明，紫草對血清中的垂體生殖激素有明顯的抑制作用5，是否與紫草總酚酸輔助米非司酮抗早孕作用有關(guān)有待進一步研究。針對藥流中不完全流產(chǎn)由于絨毛或滋養(yǎng)細胞殘留，蛻膜細胞排出緩慢所致的原因，我們研究了紫草總酚酸對離體子宮平滑肌的作用，實驗說明，紫草總酚酸有非常顯著增強早孕小鼠離體子宮平滑肌條的收縮活性的作用與給藥前比擬P0.01。其對小鼠離體妊娠子宮的收縮作用主要是通過增加離體小鼠妊娠子宮的收縮強度來實現(xiàn)的，最終使早孕胎盤排出體外，