綿毛鹿茸草的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性分析

1、綿毛鹿茸草的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性分析【摘要】目的綿毛鹿茸草的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性分析。方法對綿毛鹿茸草不同提取液的總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙、游離蒽醌等次生代謝產(chǎn)物含量和抑菌活性進(jìn)展測定。結(jié)果顯示：70%乙醇提取液、60%丙酮提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌有中等抑制作用，水提取液有弱抑制作用；70%乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑，60%丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。結(jié)論綿毛鹿茸草提取掖對大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關(guān)，對枯草芽孢桿菌的抑菌活性與蒽醌之間存在極顯著的相關(guān)性?！娟P(guān)鍵詞】綿毛鹿茸草

2、；次生代謝；抑菌活性Abstrat：bjetiveTanalysethententfsendaryetablissandantibaterialativityfnhasaSavatieriFranh.exaxi.ethdThententsf5sendaryetablitessuhasflavnid，hlrgeniaid，tannin，phenlandanthraquinnesinthedifferentextratsfnhasasavatieriFranh.exaxieredeterined.ResultsItshedthattheantibaterialativityftheliquidse

3、xtratedith70%ethanl，60%aetnenStreptuspneunae，Staphylusaureus，EsherihialiandBaillussubtiliserederate，hilethatftheliquidsextratedithateraseak.Theliquidsextratedith70ethanlerethebetterinhibitrfStreptuspneunaeandStaphylusaureus，hiletheliquidsextratedith60aetneerethebetterinhibitrfEsherihialiandBaillussu

4、btilis.nlusinThereaspsitiverrelatinbeteentheantibaterialativityftheliquidsfnhasasavatieriFranh.exaxinEsherihialiandthententfthehlgeniaid.ThereasalsarkedrrelatinbeteenthatfBaillussubtilisandanthraquinnes.Keyrds：nhasaSavatieriFranh.exaxi；sendaryetablis；antibaterialativity綿毛鹿茸草(nhasasavatieriFranh.exax

5、i)為唇形科鹿茸草屬植物，別名白頭翁、千重塔、白頭毛，分布于浙江、福建、江西，常生于山坡向陽處雜草中或馬尾松林下1。主要功能為清熱解毒，祛風(fēng)行氣，涼血止血，祛痰，用于感冒，慢性氣管炎，肺炎，咳血，吐血，便血，牙齦炎，牙髓炎，乳癰，癰腫，小兒口瘡，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等。本文對綿毛鹿茸草的不同提取液中總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙及其對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌抑菌活性進(jìn)展研究，并討論這五類次生代謝產(chǎn)物與抑菌活性之間的互相關(guān)系。1實驗與方法1.2綿毛鹿茸草提取液的制備稱取綿毛鹿茸草粉末3份，每份1g，其中2份分別用70%乙醇、60%丙酮在80水浴中回流6h，進(jìn)展提取，離心取上清

6、液，并清洗殘渣2次，離心取上清液，將3次上清液合并；另1份用沸水進(jìn)展提取0.5h，離心取上清液，反復(fù)屢次，直至提取液色淡，并將幾次沸水提取液混合。將乙醇、丙酮、沸水提取液的濃縮，并調(diào)節(jié)pH至7.0，然后用蒸餾水定容至1l，放入4的冰箱中待用。1.3次生代謝產(chǎn)物含量的測定1.3.1總黃酮的提取與測定3取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2l，揮去溶劑后用甲醇定容至25l，取其中1l，置10l離心管中，參加4l0.1l/L三氯化鋁-甲醇溶液，搖勻，在420n處測定吸光度。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=9.6101x+0.0147，R2=0.9991。1.3.2總綠原酸的提取與測定4取上述綿毛鹿茸草提取

7、液樣品0.2l，揮去溶劑后用95%乙醇定容至25l，取1l，置25l容量瓶中，參加0.2l/LHl定容至刻度，搖勻，以試劑空白為對照，在324n處測定吸光度。以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=66.064x+0.0134，R2=0.9995。1.3.3總生物堿的抽提與測定5取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2l，揮去溶劑后用90%乙醇定容至25l。取提取液1.4l置于精細(xì)參加4l氯仿的分液漏斗中，參加7.210-4l/L溴甲酚綠pH=4.42緩沖溶液0.6l，振搖1in，靜置1h，取澄清的氯仿液，以試劑空白作對照，于417n處測定吸收度。以小檗堿為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=6.6x-0.0102，R

8、2=0.9999。1.3.4總皂甙的提取與測定6取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2l，揮去溶劑后用甲醇定容至25l，取1l置25l容量瓶中，揮去溶劑后，參加0.2l5%香草醛冰醋酸溶液，再參加0.8l高氯酸，于70水浴加熱20in，取出，冷卻，加5l冰醋酸，以試劑空白作對照，于560n波長處測其吸光度。以人參皂甙Rb為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=27.763x+0.0901，R2=0.9716。1.3.5游離蒽醌的提取與測定7取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2l，放入10l離心管中，水浴蒸干溶劑，參加5%醋酸鎂乙醇溶液5l，以試劑空白為對照，在498n處測定吸光度。以1，8二羥基蒽醌為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方

9、程為y=47.464x+0.0012，R2=0.9996。1.4抑菌活性的研究以濾紙瓊脂擴(kuò)散法測定綿毛鹿茸草三種溶劑提取物對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌效果。將經(jīng)過記數(shù)的菌液稀釋后，控制100L含104fu，涂平板。將滅菌后濾紙片直徑為6浸泡在棉毛鹿茸草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述濾紙片，并以蒸餾水為陰性，鏈霉素為陽性對照，每一樣品重復(fù)3次。處理后的平板放在30培養(yǎng)24h，觀察并記錄抑菌圈的直徑大小8。1.5數(shù)據(jù)的處理試驗處理及數(shù)據(jù)測定均重復(fù)3次，將所得數(shù)據(jù)輸入SPSS11.5frinds數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)進(jìn)展統(tǒng)計，并對次生代謝產(chǎn)物的含量與抑菌圈的大小進(jìn)展相關(guān)分析。

10、2結(jié)果與分析綿毛鹿茸草不同提取液次生代謝產(chǎn)物含量以及它們對四種細(xì)菌的抑菌圈大小如表1所示。其中次生代謝產(chǎn)物的含量為百分含量，抑菌活性以抑菌圈的大小表示，陰性對照抑菌圈直徑6，陽性對照鏈霉素抑菌圈26；抑菌圈直徑在68為微弱抑菌，812為弱抑菌，1220為中等抑菌，2024為強(qiáng)抑菌。綿毛鹿茸草的的次生代謝產(chǎn)物和抑菌圈直徑的相關(guān)性如表2所示。表1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產(chǎn)物的含量g/kg及其抑菌圈直徑略2.1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產(chǎn)物含量和抑菌活性分析從表1中可以看出：總黃酮、總綠原酸、游離蒽醌三種次生代謝產(chǎn)物的含量均為70%乙醇提取液60%丙酮提取液水提取液，最高含量分別為1.403g/kg、

11、72.752g/kg、0.043g/kg；生物堿和皂甙的含量為60%丙酮提取液70%乙醇提取液水提取液，最高含量為1.677g/kg和5.418g/kg。對進(jìn)肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用均是60%丙酮提取液70乙醇提取液水提取液，最大抑菌圈直徑為15.47和17.40，為中等抑菌作用；對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用是70乙醇提取液60%丙酮提取液水提取液，最大抑菌圈直徑為19.03和14.83，為中等抑菌作用。水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑均在912之間，具有弱抑菌作用?？梢钥闯鼍d毛鹿茸草的70%乙醇提取液和60%丙酮提取液是良好的抑菌劑。2.

12、2不同提取液的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性的相關(guān)性分析從表2可以看出：黃酮與蒽醌之間存在顯著的正相關(guān)，推測綿毛鹿茸草中這兩種次生代謝產(chǎn)物可能具有一樣的合成底物或具有一樣代謝途徑；大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關(guān)，推測綿毛鹿茸草對大腸桿菌的抑制作用可能是提取液中的綠原酸起的作用；蒽醌與枯草芽孢桿菌之間存在極顯著的相關(guān)性，說明綿毛鹿茸草對枯草芽孢桿菌的抑制作用主要是蒽醌作用的結(jié)果；肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌之間具有顯著的相關(guān)性，而與所測的5種次生代謝產(chǎn)物之間都沒有顯著相關(guān)性，因此推測綿毛鹿茸草中其它某些物質(zhì)對肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌均有一定抑制作用。表2綿毛鹿茸草不同提取液的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性的相關(guān)性略程度顯著差異：*P0.05，*P0.013討論次生代謝是植物的重要特征，其產(chǎn)物既具有重要的生態(tài)學(xué)意義又可決定各類植物在進(jìn)化過程中的興衰成敗、生死存亡等問題9，植物中的次生代謝產(chǎn)物還具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗突變、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等多種活性。綿毛鹿茸草對70%乙醇提取液、60%丙酮提取液、水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有抑制作用，前兩者為中等抑制作用，后者為弱抑制作用；70%乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑，60%丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。推測對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制