固相萃取―高效液相色譜法測(cè)定豆制品中丙酸鈣

1、固相萃取一高效液相色譜法測(cè)定豆制品中丙酸鈣摘要：本文探討利用固相萃取技術(shù)在豆制品檢測(cè)前處 理過(guò)程中去除干擾成分，使用液相色譜測(cè)定食品中丙酸鈣， 與國(guó)標(biāo)法相比較，本方法優(yōu)于現(xiàn)有國(guó)標(biāo)方法，本方法可操作 性強(qiáng)，使用本方法可以快速高效測(cè)定豆制品中丙酸鈣的成 分，且大大降低樣品測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生假陽(yáng)性的可能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表明，利用Ultimate XB-SAX強(qiáng)陰離子交換柱凈化樣品，使 用高效液相色譜法測(cè)定，可作為豆制品中丙酸鈣有效的測(cè)定 方法，方法的檢出限為0.001g/kg，空白樣品的加標(biāo)回收率為 94.3 %96.9 %，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.08 (n=5)。關(guān)鍵詞：豆制品丙酸鈣固相萃取 液相色譜

2、法中圖分類號(hào)：TS255文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-5336 (2015) 02-0021-02丙酸鈣是酸型食品防腐劑，在酸性條件下，產(chǎn)生游離丙 酸，具有抗菌作用，同時(shí)丙酸鈣與其它脂肪一樣可以通過(guò)代 謝被人畜吸收，并供給人畜必需的鈣，這一優(yōu)點(diǎn)是其它防霉 劑所無(wú)法相比的，其使用廣泛。其在酸性介質(zhì)(淀粉、含蛋 白質(zhì)和油脂物質(zhì))中對(duì)各類霉菌、革蘭氏陰性桿菌或好氧芽 孢桿菌有較強(qiáng)的抑制作用，還可以抑制黃曲霉素的產(chǎn)生，而 對(duì)酵母菌無(wú)害，是食品、釀造、飼料、中藥制劑諸方面的一 種新型、高效的食品與飼料用防霉劑。但是長(zhǎng)期過(guò)量的食用 丙酸鈣也會(huì)對(duì)人體造成一些傷害，嚴(yán)重的甚至造成中毒乃至 休克；同時(shí)丙酸鈣

3、對(duì)嬰幼兒以及老人等特殊人群的潛在威脅 更大1。我國(guó)衛(wèi)生部在食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo) 準(zhǔn)中規(guī)定丙酸鈣可以在豆類制品食品中作為添加劑使用， 最大使用量為2.5g/kg。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)3中，樣品的前處理方法分為蒸餾法和直接浸 提法，蒸餾法需要對(duì)行樣品逐個(gè)進(jìn)行處理，且處理過(guò)程復(fù)雜， 費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適用于大批量樣品的檢驗(yàn)操作；而直接浸提法 對(duì)于豆制品并不適用，在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間處樣品會(huì)出現(xiàn)干 擾峰，出現(xiàn)假陽(yáng)性，嚴(yán)重影響樣品的檢驗(yàn)結(jié)果。本文討論的 使用強(qiáng)陰離子交換柱固相萃取進(jìn)行前處理的方法，可降低樣 品的基質(zhì)干擾，提高樣品分析的準(zhǔn)確度和靈敏度4，且本方 法可操作性強(qiáng)，重復(fù)性好，大大提高檢驗(yàn)效率，適用于大批

4、 量樣品的檢驗(yàn)工作。1材料與方法1.1儀器沃特世高效液相色譜系統(tǒng)（e2695）、紫外檢測(cè)器（e2998）、 液相色譜工作站（EMPOWER2）、超聲波提取裝置。1.2 材料磷酸氫二銨：化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)有限公司;丙酸鈣：99.0%，國(guó)藥集團(tuán)有限公司；實(shí)驗(yàn)室用超純水：實(shí)驗(yàn)室純水制備系統(tǒng)；強(qiáng)陰離子交換柱：500mg/6ml，月旭科技（上海）股份 有限公司；甲醇：色譜純，國(guó)藥集團(tuán)有限公司；鹽酸溶液：國(guó)藥集團(tuán)有限公司.1.3檢驗(yàn)方法1.3.1樣品處理5稱取5.000 g （精確至0.001 g）的樣品至50 mL比色管 中，加入15mL水用，超聲提取30min后，用10 %的氨水調(diào) pH至堿性，用水定容

5、至25mL，混勻后溶液過(guò)濾紙待用。固相萃取條件：固相萃取過(guò)程中始終保持液體通過(guò)固相 萃取柱的速度保持勻速，盡量保持為1mL/min。固相萃取過(guò) 程：先將固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，活化 后取上述樣品提取液1 mL通過(guò)固相萃取柱，然后以2 mL純 水淋洗，棄去淋洗液，用2 mL 10%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫并收 集洗脫液，過(guò)0.45m m濾膜，供HPLC分析。1.3.2 色譜條件色譜柱:Zorbax C18 （250 mmX4.6 mm id.）；柱溫：30C； 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm；流動(dòng)相：1.5g/L的磷酸氫二銨溶液 （pH3.03.5）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積

6、10.0m L。1.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制準(zhǔn)確稱取1.26g丙酸鈣（精確至0.000 1 g）于100 mL容 量瓶中，用水定容至刻度，此儲(chǔ)備液相當(dāng)于10.0mg/mL。準(zhǔn)確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL 10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成濃度分別為0.1、0.2、 0.4、0.8、1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。2結(jié)果與分析2.1方法的精密度和檢出限在空白樣品中添加丙酸及雙乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，添加水平 為10mg，按照1.3.1方法處理樣品，做5個(gè)平行樣，記錄峰 面積及保留時(shí)間。根據(jù)5次測(cè)定結(jié)果的峰面積計(jì)算出丙酸的 含量，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見(jiàn)表1。保留時(shí)間

7、的標(biāo)準(zhǔn) 偏差為0.05 %。以3倍的信噪比計(jì)算檢出限，最低檢出限濃 度可達(dá)0.001g/kg。由表3可以看出，丙酸鈣含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏 差為 0.70 %（n=5）。2.2與國(guó)標(biāo)方法的比較2.2.1與國(guó)標(biāo)蒸餾法比較蒸餾法加標(biāo)回收率和固相萃取法加標(biāo)回收率的比較間 表2。從表2可以看出，固相萃取法的回收率多在90%以上， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于蒸餾法的回收率。2.2.2與國(guó)標(biāo)直接浸提法比較取相同陰性樣品加入同樣量的丙酸鈣，分別用水浸提法 和固相萃取進(jìn)行處理，分別得到圖1一直接浸提法樣品液相 色譜圖和圖2一固相萃取法樣品液相色譜圖。從圖1和圖2的比較可以看出，固相萃取法樣品液相色 譜圖雜峰少，基質(zhì)干擾小，色譜峰峰形更

8、好，可以大大排除 假陽(yáng)性的出現(xiàn)。3結(jié)語(yǔ)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用強(qiáng)陰離子交換固相萃取柱對(duì)食品樣品進(jìn)行 凈化處理后經(jīng)HPLC測(cè)定食品中的丙酸鈣，回收率在90%以 上，最低檢出限可達(dá)0.001g/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。而 國(guó)標(biāo)蒸餾法的回收率多在70%左右，丙酸鈣的檢出限為 0.03g/kg。同時(shí)本方法快捷方便，可操縱性強(qiáng)，適用于大批 量操作，并提高了方法的準(zhǔn)確度和靈敏度。利用強(qiáng)陰離子交 換固相萃取柱，對(duì)丙酸這種弱酸有較好的凈化提取效果。有 效地去除了豆制品產(chǎn)品基質(zhì)中存在的干擾，方法的精密度和 準(zhǔn)確度相對(duì)于國(guó)標(biāo)法都大大提高，同時(shí)提高了方法的重現(xiàn)性 并提高了檢驗(yàn)的工作效率。參考文獻(xiàn)趙天華.化學(xué)試劑化學(xué)藥品手冊(cè)M.2版.北京：化學(xué) 工業(yè)出版社，2006： 223.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 2760-2011食品安全國(guó)家 標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)S.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011： 10.中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó) 家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 23382-2009食品中丙酸鈉丙酸 鈣的