復(fù)合輔酶對(duì)燙傷休克后大鼠臟器功能的保護(hù)作用

1、復(fù)合輔酶對(duì)燙傷休克后大鼠臟器功能的保護(hù)作用【摘要】目的研究復(fù)合輔酶對(duì)燙傷休克后大鼠臟器功能的保護(hù)作用。方法通過制作大鼠燙傷休克/復(fù)蘇模型，將40只大鼠隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、單純燙傷組、復(fù)合輔酶治療組、谷胱甘肽治療組，每組10只。測定大鼠肝功能、心肌酶譜。并采用光鏡、透射電鏡觀察心臟、肝的組織形態(tài)及細(xì)胞的超微構(gòu)造。結(jié)果單純燙傷組大鼠肝功能、心肌酶譜指標(biāo)明顯高于其他各組P0.05或P0.01。燙傷大鼠經(jīng)復(fù)合輔酶和谷胱甘肽治療后各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善，復(fù)合輔酶組中ALT、K-B低于谷胱甘肽組P0.05。光鏡觀察復(fù)合輔酶治療組細(xì)胞形態(tài)根本完好，排列尚規(guī)那么，炎細(xì)胞浸潤不明顯，細(xì)胞損傷較單純燙傷組、谷胱甘肽治

2、療組輕。結(jié)論復(fù)合輔酶對(duì)燙傷休克后大鼠的心臟、肝具有保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】休克；多器官功能障礙綜合征；復(fù)合輔酶Abstrat：bjetiveTinvestigatetheprtetiveeffetfenzyeplexntheviseralfuntinsinratsithsaldshk.ethdsTestablishthesaldshk/resusitatindels,40healthyratsererandlydividedint4grups(n=10eah):ntrlgrup(shagrup),siplesaldgrup,reduedglutathinehrnegrupandenzyeplexg

3、rup.ThehepatiandyardialenzygraparaeterseredetetedbyRheautatibiheistryanalyzer.Thehistlgialrphlgyandellultrairstrutureftheheartandlivererebservedbytransissineletrnirspyasellaslightirspy.ResultsThelevelsfhepatiandyardialenzygraparaetersinthesiplesaldgruperearkedlyhigherthanthethergrups(P0.05rP0.01).Th

4、esaldedratshadsignifiantiprveentintheparaeterssubsequenttglutathineandenzyeplextreatent.ThelevelsfALTandK-Binenzyeplexgruperelerthanthseinreduedglutathinehrnegrup(P0.05).Lightirspyshedthatintheenzyeplexgruptheellshadnearlypleterphlgyandregulararrangeentandthereasnbviusinfiltratinfinflaatryells.Theip

5、airentstyardialandhepatiellsinenzyeplexgrupasslighterthanthseinthesiplesaldgrupandreduedglutathinehrnegrup.nlusinTheenzyeplexhasprtetiveeffetntheheartandliverinshkratsithsaldinjury.Keyrds:shk;ultiplergandysfuntinsyndre;enzyeplex近年來研究說明，創(chuàng)傷后缺血、缺氧是導(dǎo)致各種臟器損害的主要始動(dòng)因素之一。研究證實(shí)，創(chuàng)傷性休克后細(xì)胞內(nèi)缺氧和灌流缺乏，最敏感的細(xì)胞器是線粒體。在灌流

6、缺乏20in時(shí)線粒體即腫脹，細(xì)胞內(nèi)ATP減少，以后ADP也減少，能量供給缺乏，線粒體膜功能也受損1。本實(shí)驗(yàn)建立SD大鼠燙傷休克/復(fù)蘇模型。觀察復(fù)蘇后多器官組織細(xì)胞心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞的功能和細(xì)胞構(gòu)造的損傷，并采用改善線粒體、能量代謝的藥物鑫貝科復(fù)合輔酶進(jìn)展干預(yù)，評(píng)價(jià)其在防治休克/復(fù)蘇后多器官組織細(xì)胞急性損傷的效果。為臨床防治多器官功能損傷尋找新的有效藥物。1材料和方法1.1動(dòng)物和分組雄性安康SD大鼠40只，體重24915g，由上海第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、單純燙傷組休克/復(fù)蘇組、復(fù)合輔酶治療組、谷胱甘肽治療組，每組10只。1.2動(dòng)物模型制備適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，術(shù)前12h禁食、禁

7、水。戊巴比妥40g/kg腹腔麻醉。動(dòng)物俯臥位，背部剪毛，脫毛劑8硫化鈉涂于背部脫毛，面積3左右，然后溫水拭凈，將大鼠固定于模型架上，將背部浸于沸水15s，燙傷面積為30。深度為度。立即用100l/kg平衡液腹腔注射復(fù)蘇。復(fù)合輔酶治療組在復(fù)蘇立即給予復(fù)合輔酶10U/kg北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份消費(fèi)，批號(hào)：20220504。用生理鹽水稀釋至0.5l腹腔注射，復(fù)蘇后12h再給予同等劑量。谷胱甘肽治療組給予谷胱甘肽20g/kg重慶藥友制藥股份消費(fèi)，批號(hào)：0904110。生理鹽水稀釋至0.5l,腹腔注射，12h后再給同等劑量。單純燙傷組：腹腔注射生理鹽水0.5l。對(duì)照組：僅進(jìn)展麻醉、剪毛、脫毛，不做燙傷處理。1

8、.3標(biāo)本采集1.4標(biāo)本檢測血液標(biāo)本采用羅氏D+P全自動(dòng)生化分析儀，用速率雙試劑法對(duì)谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、乳酸脫氫酶LDH進(jìn)展檢測；用速率比色法測定磷酸肌酸激酶K;采用免疫抑制比色法測定肌酸激酶同工酶B(K-B)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以s表示，組間比擬采用方差分析。以P0.05為差異有顯著性。2結(jié)果21血清中心肌酶譜、肝酶譜的變化單純燙傷組中血清中的K、K-B、LDH、ALT、AST明顯較正常組增高P0.01，且單純燙傷組明顯高于復(fù)合輔酶組、谷胱甘肽組P0.05，復(fù)合輔酶組中ALT、K-B低于谷胱甘肽組P0.05，復(fù)合輔酶組中AST、LDH、K與谷胱甘肽組比擬差異無顯著性P0.

9、05。見表1。表1各組血清血清中心肌酶譜、肝酶譜的變化略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.22光鏡結(jié)果心肌細(xì)胞：對(duì)照組心肌纖維呈短柱狀，排列整齊，可見橫紋，核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，胞核兩端可見較多肌漿，在心肌纖維互相連接處形成閏盤。單純燙傷組：部分心肌纖維排列不規(guī)那么，參差不齊，部分纖維變性，炎細(xì)胞浸潤。谷胱甘肽組：心肌纖維不規(guī)那么排列，部分肌纖維變性，少量炎細(xì)胞浸潤。復(fù)合輔酶組：心肌纖維變性明顯改善，排列尚規(guī)那么，少量炎細(xì)胞浸潤。見圖14。肝細(xì)胞：對(duì)照組肝細(xì)胞多邊形，胞質(zhì)豐富，含12個(gè)核仁，排列成索狀構(gòu)造，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀排列。單純組：肝細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)疏松，部分肝細(xì)胞嗜酸性變性，肝竇及

10、中央靜脈淤血，伴炎細(xì)胞浸潤。谷胱甘肽組：肝細(xì)胞輕度腫脹，胞質(zhì)疏松，部分肝細(xì)胞嗜酸性變，肝竇及中央靜脈淤血，少量炎細(xì)胞浸潤。復(fù)合輔酶組：肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，腫脹不明顯，肝竇及中央靜脈未見淤血及炎細(xì)胞浸潤。見圖58。3討論休克是因微循環(huán)衰竭導(dǎo)致線粒體供氧缺乏而發(fā)生的一種全身性病理過程。因組織低灌注與氧代謝障礙導(dǎo)致細(xì)胞能量嚴(yán)重缺乏及代謝性酸中毒，已經(jīng)成為休克發(fā)生、開展的經(jīng)典解釋2-5。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，燙傷休克后動(dòng)物的多個(gè)臟器心臟、肝功能明顯受損，心肌酶譜、肝酶譜增高。休克導(dǎo)致細(xì)胞缺血、缺氧，復(fù)蘇后再灌注過程中產(chǎn)生的大量氧自由基通過脂質(zhì)過氧化作用也能造成細(xì)胞的再損傷。光鏡下可見細(xì)胞腫脹，構(gòu)造排列紊亂，炎性細(xì)胞

11、大量浸潤。這與其他學(xué)者研究結(jié)果一致6-8。復(fù)合輔酶是由新穎酵母中提取的含有輔酶NAD、三磷酸腺苷ATP、輔酶AA、黃素核苷酸FAD、復(fù)原型谷胱甘肽GSH、腺苷蛋氨酸Ade-Sd4、核苷酸、1，6-二磷酸果糖FDP等多種輔酶及生命活性物質(zhì)組成的復(fù)合試劑。這些輔酶都是細(xì)胞物質(zhì)代謝及能量代謝所必需的。可以直接作用于細(xì)胞程度，參與三羧酸循環(huán)、細(xì)胞呼吸和氧化磷酸化。調(diào)控氨基酸、脂肪和糖代謝。使被抑制的細(xì)胞迅速活化，促進(jìn)機(jī)體由病理穩(wěn)態(tài)恢復(fù)至正常穩(wěn)態(tài)。研究說明NAD不但是產(chǎn)生能量所必需的輔助，而且還具有保護(hù)細(xì)胞免受重金屬鉻鹽誘導(dǎo)的血紅蛋白氧化和過氧化損傷9。A是參與機(jī)體上百種生化反響的必須輔酶。與NAD互相

12、轉(zhuǎn)化補(bǔ)充，共同參與細(xì)胞的能量合成，進(jìn)步Na+-K+-ATP泵的活性，保護(hù)線粒體的形態(tài)。而GSH和Ade-Sd可以互相轉(zhuǎn)換，從而保持GSH的抗氧化性，保護(hù)體內(nèi)的重要酶蛋白巰基不被氧化、滅活，對(duì)細(xì)胞的超氧化物反響起保護(hù)作用。保證重要組織氨基酸的吸收及營養(yǎng)要求，參與蛋白、DNA的合成及調(diào)節(jié)蛋白的構(gòu)象和酶活性。FDP可進(jìn)步磷酸果糖激酶的活性，也可直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)作為代謝底物，使ATP增多，穩(wěn)定細(xì)胞膜、溶酶體膜。FDP還可以抑制中性粒細(xì)胞釋放自由基和組胺等對(duì)組織有直接損害作用和加重微循環(huán)障礙的物質(zhì)10。本研究還發(fā)現(xiàn)應(yīng)用復(fù)合輔酶治療后光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)根本完好，排列尚規(guī)那么，炎細(xì)胞浸潤不明顯。細(xì)胞損傷遠(yuǎn)較休

13、克/復(fù)蘇組輕，且同樣也比谷胱甘肽組輕，同時(shí)對(duì)肝酶譜、心肌酶譜進(jìn)展測定，發(fā)現(xiàn)復(fù)合輔酶組能顯著改善心臟及肝臟的功能，保護(hù)組織臟器與谷胱甘肽組比擬仍有顯著性差異。休克導(dǎo)致多器官功能障礙的病理生理過程非常復(fù)雜，而細(xì)胞代謝障礙是多器官功能障礙的最根本原因11。細(xì)胞代謝障礙包括能量代謝障礙和氧利用障礙。本研究發(fā)現(xiàn)。應(yīng)用復(fù)合輔酶可以保護(hù)細(xì)胞線粒體功能，改善細(xì)胞代謝,進(jìn)而保護(hù)組織細(xì)胞?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1梁晚益,黃躍生,楊宗城.嚴(yán)重?zé)齻缙谛募【€粒體磷脂變化及其機(jī)制J.中華創(chuàng)傷雜志,2001,17(7):416-419.2LukyanvaLD,ikhailvaNN,FenkDV,etal.Disturbanesin

14、energyetablisduringtrauatishkandthEirpharalgialrretinJ.BullExpBiled，2001,132(3):837-740.3FinkP.ytpathihypxia.ithndrialdysfuntinasehanisntributingtrgandysfuntininsepsisJ.ritarelin,2001,17(1):219-237.4PadanilaBJ.elldeathinduedbyauterenalinjury:aperspetiventhentributinsfapptsisandnersisJ.AJPhysilRenalP

15、hysil,2022,284(7):F608-F627.5趙克森.重癥難治性休克的機(jī)制和治療J.中華創(chuàng)傷雜志，2022，196：325-328.6KiJS,HeL,LeastersJJ.ithndrialpereabilitytransitin:anpathaytnersisandapptsisJ.BiheBiphysResun,2022,304(3):463-470.7FribergH,ielhT,astilhRF.ithndrialxidativestressafterglbalbrainisheiainratsJ.NeursiLett，2002,334(2):111-114.8楊興易，王學(xué)斌，林兆奮，等.貝科能對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠心、腦、腎的保護(hù)作用J.中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2022,15(2):131-135.9FernandesA,GeraldesF,livEIraR,etal.EffetsfNADHandH22nhrateinduedhuanerythrytesheglbinxidatinandperxidatinJ.EtxilEnvirnSaf,2000,47(1):39-42.10IzuiY,BenzA,KatsukiH,etal.Effetsffrutse-1,6-bisphsphatenrphl