圓二色譜實驗報告

1、圓二色譜應用技術一、實驗目的1、了解圓二色(CD)光譜的工作原理。2、學會運用圓二色譜測氨基酸，蛋白質，DNA。二、實驗原理對R和L兩種圓偏振光吸收程度不同的現(xiàn)象。這種吸收程度的不 同與波長的關系稱圓二色譜，是一種測定分子不對稱結構的光譜法。 圓二色光譜是一種差光譜，樣品在左旋偏振光照射下的吸收光譜與其 在右旋吸收光譜照射下的偏振光之差。物質的吸收光譜決定物質的顏 色。如果一個物質對左旋偏振光和對右旋偏振光的吸收不同,那么稱 該物質具有圓二色性(circulardi2chroism,簡稱CD)。同樣，如果一個物 質對于不同方向的線偏振光的吸收不同,那么該物質具有線二色性。 很多各向異性的品體具

2、有線二色性;而很多生物大分子和有機分子具 有圓二色性在分子生物學領域中主要用于測定蛋白質的立體結構，也 可用來測定核酸和多糖的立體結構。圓二色譜儀由光源、單色器、起偏器、圓偏振發(fā)生器、試樣室和 光電倍增管組成。三、實驗步驟1.通高純氮氣45min后，開機點亮氙燈:打開主機電源INSTRUMENTPOWER;打開氙燈電源 XENONLMAPPOWER;等待 LMAPready 燈亮；按紅色 IGNITELMAP 按鈕打開主板電源INSTRUMENTPOWER打開Thermocubechiller （開關在冷卻器左邊）打開軟件，設置參數，選擇數據保存設置；選擇保存位置；開 始實驗，保存數據6 關軟

3、件 TerminateCDSProgram 中關閉7關氙燈電源XENONLMAPPOWER8 關閉 Thermocubechiller9等待10min后關閉高純氮氣（可先行下述步驟）10清洗比色皿、注射泵及其他附件11光盤刻錄數據12關閉主機電源INSTRUMENTPOWER四、試驗結果和數據處-200/-250 1 I 1 I 1 I 1 I 1 I 1InolblrcsAD-5no-KPIrcseD180200220240260280300Wavelength(nm)-10180200220240260280300Wanelength(nm)圖：a為稀釋前曲線，b為稀釋20倍后曲線在蛋白質分子中，肽鏈的不同部分可分別形成a-螺旋、。-折疊、p- 轉角等特定的立體結構。這些立體結構都是不對稱的。蛋白質的肽鍵 在紫外185240納米處有光吸收，因此它在這一波長范圍內有圓二 色性。幾種不同的蛋白質立體結構所表現(xiàn)的橢圓值波長的變化曲線 圓二色譜是不同的。a-螺旋的譜是雙負峰形的，p-折疊是單負峰 形的，無規(guī)卷曲在波長很短的地方出單峰。蛋白質的圓二色譜是它們 所含各種立體結構組分的圓二色譜的代數加和曲線。因此用這一波長 范圍的圓二色譜可研究蛋白質中各種立體結構的含量。在上面兩幅圖中，