端粒 Telomeres 定義 端粒是染色體末端的DNA重復(fù)序列 端粒是

1、端粒Telomeres 定義端粒是 HYPERLINK /view/6633.htm t _blank 染色體末端的 HYPERLINK /view/758.htm t _blank DNA重復(fù)序列。端粒是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，在正常人體細(xì)胞中，可隨著細(xì)胞分裂而逐漸縮短。把端粒當(dāng)作一件絨線衫袖口脫落的線段，絨線衫像是結(jié)構(gòu)嚴(yán)密的DNA，排在線上的DNA決定人體性狀。它們決定人頭發(fā)的直與曲，眼睛的藍(lán)與黑，人的高與矮等等，甚至性格的暴躁和溫和。 功能穩(wěn)定染色體末端結(jié)構(gòu)，防止染色體間末端連接，并可補(bǔ)償滯后鏈5末端在消除RNA引物后造成的空缺。組織培養(yǎng)的細(xì)胞證明，端粒在決定動(dòng)植物細(xì)胞的壽命中起著重要

2、作用，經(jīng)過多代培養(yǎng)的老化細(xì)胞端粒變短，染色體也變得不穩(wěn)定。細(xì)胞分裂次數(shù)越多，其端粒磨損越多，壽命越短。 通常情況下，運(yùn)動(dòng)加速細(xì)胞的分裂，運(yùn)動(dòng)量越大，細(xì)胞分裂次數(shù)越多，因此壽命越短。所以體育運(yùn)動(dòng)一定要適可而止。組成端粒DNA是由簡單的DNA高度重復(fù)序列組成的，染色體末端沿著5到3 方向的鏈富含 GT。在 HYPERLINK /view/83200.htm t _blank 酵母和人體中，端粒序列分別為C13A/TG13和TTAGGG/CCCTAA，并有許多蛋白與端粒DNA結(jié)合。端粒DNA主要功能有：第一，保護(hù)染色體不被 HYPERLINK /view/15636.htm t _blank 核酸酶

3、降解；第二，防止染色體相互融合；第三，為 HYPERLINK /view/213631.htm t _blank 端粒酶提供底物，解決DNA復(fù)制的末端隱縮，保證染色體的完全復(fù)制。端粒、著絲粒和復(fù)制原點(diǎn)是染色體保持完整和穩(wěn)定的三大要素。同時(shí)，端粒又是基因調(diào)控的特殊位點(diǎn), ?？梢种莆挥诙肆８浇虻霓D(zhuǎn)錄活性（稱為端粒的位置效應(yīng)，TPE）。在大多真核生物中，端粒的延長是由端粒酶催化的，另外，重組機(jī)制也介導(dǎo)端粒的延長。 發(fā)現(xiàn)之旅科學(xué)家們在尋找導(dǎo)致細(xì)胞死亡的基因時(shí)，發(fā)現(xiàn)了一種叫端粒的存在于染色體頂端的物質(zhì)。端粒本身沒有任何密碼功能，它就像一頂高帽子置于染色體頭上。在新細(xì)胞中，細(xì)胞每分裂一次，染色體頂端的

4、端粒就縮短一次，當(dāng)端粒不能再縮短時(shí)，細(xì)胞就無法繼續(xù)分裂了。這時(shí)候細(xì)胞也就到了普遍認(rèn)為的分裂100次的極限并開始死亡。因此，端粒被科學(xué)家們視為“生命時(shí)鐘”。 科學(xué)家由此又開始研究精子和癌細(xì)胞內(nèi)的染色體端粒是如何長時(shí)間不被縮短的原因。1984年，分子生物學(xué)家在對單細(xì)胞生物進(jìn)行研究后，發(fā)現(xiàn)了一種能維持端粒長度的端粒酶，并揭示了它在人體內(nèi)的奇特作用：除了人類生殖細(xì)胞和部分體細(xì)胞外，端粒酶幾乎對其他所有細(xì)胞不起作用，但它卻能維持 HYPERLINK /view/335175.htm t _blank 癌細(xì)胞端粒的長度，使其無限制擴(kuò)增。早在30年代，繆勒(Muller)和麥克林托克(Meclintock)

5、等就已發(fā)現(xiàn)了端粒結(jié)構(gòu)的存在。1978年，四膜蟲的端粒結(jié)構(gòu)首先被測定。1990年起，凱文哈里(Calvin Harley)就把端粒與人體衰老掛上了鉤：第一、細(xì)胞愈老，其端粒長度愈短；細(xì)胞愈年輕，端粒愈長，端粒與細(xì)胞老化有關(guān)系。衰老細(xì)胞中的一些端粒丟失了大部分端粒重復(fù)序列。當(dāng)細(xì)胞端粒的功能受損時(shí)，就出現(xiàn)衰老，而當(dāng)端?？s短至關(guān)鍵長度后，衰老加速，臨近死亡。第二、正常細(xì)胞端粒較短。細(xì)胞分裂會(huì)使端粒變短，分裂一次，縮短一點(diǎn)，就像磨損鐵桿一樣，如果磨損得只剩下一個(gè)殘根時(shí)，細(xì)胞就接近衰老。細(xì)胞分裂一次其端粒的DNA丟失約30200bp(堿基對)。第三、研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞中存在一種酶，它合成端粒。端粒的復(fù)制不能由

6、經(jīng)典的DNA聚合酶催化進(jìn)行，而是由一種特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶端粒酶完成。正常人體細(xì)胞中檢測不到端粒酶。一些良性病變細(xì)胞，體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中也測不到端粒酶活性。但在生殖細(xì)胞、睪丸、卵巢、胎盤及胎兒細(xì)胞中此酶為陽性。令人注目的發(fā)現(xiàn)是，惡性腫瘤細(xì)胞具有高活性的端粒酶，端粒酶陽性的腫瘤有卯艇癌、淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等等。人類腫瘤中廣泛地存在著較高的端粒酶耥端撾酶作為腫瘤治療的靶點(diǎn)，是當(dāng)前較受關(guān)注的熱點(diǎn)之一。 其他與壽命有關(guān)的基因也在被不斷地發(fā)現(xiàn)，它們的工作原理與端粒相似?？茖W(xué)家們不但希望能找到人體內(nèi)所有的生命時(shí)鐘，更希望找到撥慢時(shí)鐘的方法。目前很多植物的端粒酶已被提取出，許多國家的研究

7、組正在從事相關(guān)課題的研究。有觀點(diǎn)聲稱，即使可保護(hù)端粒在分裂中不被降解的藥物被發(fā)明，其對于生命常青的意義也有待商榷，應(yīng)為當(dāng)一個(gè)老年人被植入年輕的端粒后，其身體是否能接受還是一個(gè)問題憑借“發(fā)現(xiàn)端粒和端粒酶是如何保護(hù)染色體的”這一成果，揭開了人類衰老和罹患癌癥等嚴(yán)重疾病的奧秘的三位美國科學(xué)家（美國加利福尼亞舊金山大學(xué)的伊麗莎白布萊克本(Elizabeth Blackburn)、美國巴爾的摩約翰霍普金斯醫(yī)學(xué)院的卡羅爾格雷德(Carol Greider)、美國哈佛醫(yī)學(xué)院的杰克紹斯塔克(Jack Szostak)。）獲得2009年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 相關(guān)遺傳病在染色體亞端粒區(qū)存在高度同源性序列在減數(shù)

8、分裂過程中發(fā)生異常同源重組，而導(dǎo)致該區(qū)域發(fā)生微小的缺失、重復(fù)或染色體相互易位，稱為染色體亞端粒區(qū)重組異常。該疾病患者主要表現(xiàn)為不同程度的智力低下、伴有生長發(fā)育遲緩和各器官、系統(tǒng)的畸形。目前研究發(fā)現(xiàn)由此機(jī)制導(dǎo)致的智力低下約占智力低下患者的三體綜合征。圖片說明：端粒就像DNA的帽子，保護(hù)DNA重要信息不丟失(圖片來源：ALFRED PASIEKA/ SCIENCE PHOTO LIBRARY)端粒學(xué)說端粒學(xué)說由Olovnikov提出，認(rèn)為細(xì)胞在每次分裂過程中都會(huì)由于DNA聚合酶功能障礙而不能完全復(fù)制它們的染色體，因此最后復(fù)制DNA序列可能會(huì)丟失，最終造成細(xì)胞衰老死亡。 端粒是真核生物染色體末端由許

9、多簡單重復(fù)序列和相關(guān)蛋白組成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，具有維持染色體結(jié)構(gòu)完整性和解決其末端復(fù)制難題的作用。端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成，是以自身RNA為模板，合成端粒重復(fù)序列，加到新合成DNA鏈末端。在人體內(nèi)端粒酶出現(xiàn)在大多數(shù)的胚胎組織、生殖細(xì)胞、炎性細(xì)胞、更新組織的增生細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞中。正因如此，細(xì)胞每有絲分裂一次，就有一段端粒序列丟失，當(dāng)端粒長度縮短到一定程度，會(huì)使細(xì)胞停止分裂，導(dǎo)致衰老與死亡。 大量實(shí)驗(yàn)說明端粒、端粒酶活性與細(xì)胞衰老及永生有著一定的聯(lián)系。第一個(gè)提供衰老細(xì)胞中端?？s短的直接證據(jù)是來自對體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的觀察，通過對不同年齡供體成纖維細(xì)胞端粒長度與年齡及有絲分裂能力的關(guān)系

10、觀察到隨著增齡，端粒的長度逐漸變短，有絲分裂的能力明顯漸漸變?nèi)?；Hastie發(fā)現(xiàn)結(jié)腸端粒限制性片段的長度隨供體年齡增加逐漸縮短，平均每年丟失33bp的重復(fù)序列；植物中不完整的染色體在受精作用中得以修復(fù)，而不能在已經(jīng)分化的組織中修復(fù)，這在較為高等的真核生物中也證實(shí)了體細(xì)胞中端粒酶的活性受抑制；精子的端粒要比體細(xì)胞長，體細(xì)胞缺失端粒酶活性就會(huì)逐漸衰老，而生殖細(xì)胞系的端粒卻可以維持其長度；轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠通過端粒酶的活性完全復(fù)制端粒以得永生。 但是許多問題用端粒學(xué)說還不能解釋。體細(xì)胞端粒長度與有絲分裂能力呈正比，這一點(diǎn)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)了，而不同的體細(xì)胞其有絲分裂能力是不盡相同的，胃腸黏膜細(xì)胞的分裂增殖速度就

11、比較快，神經(jīng)細(xì)胞分裂的速度就比較慢。曾有人就不同年齡供體角膜內(nèi)皮細(xì)胞的端粒長度進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)端粒長度長期維持在一個(gè)較高的水平，而端粒酶卻不表達(dá)。另外，Kippling發(fā)現(xiàn)，鼠的端粒比人類長近5-10倍，壽命卻比人類短的多。這些都提示體細(xì)胞端粒長度與個(gè)體的壽命及不同組織器官的預(yù)期壽命并非一致。生殖細(xì)胞的端粒酶活性長期維持較高的水平卻不會(huì)象腫瘤那樣無限制分裂繁殖；端粒長度由端粒酶控制，那何種因素控制端粒酶呢？生殖細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性較高，為什么體細(xì)胞中沒有較高的端粒酶活性?？磥矶肆５拈L度縮短是衰老的原因還是結(jié)果尚需進(jìn)一步研究。2009年，諾貝爾瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院將諾貝爾獎(jiǎng)生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授

12、予美國加利福尼亞舊金山大學(xué)的伊麗莎白布萊克本(ElizabethBlackburn)、美國巴爾的摩約翰霍普金斯醫(yī)學(xué)院的卡羅爾-格雷德(CarolGreider)、美國哈佛醫(yī)學(xué)院的杰克紹斯塔克(JackSzostak)以及霍華德休斯醫(yī)學(xué)研究所，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了端粒和端粒酶保護(hù)染色體的機(jī)理。端粒、端粒酶與腫瘤 作者：佚名時(shí)間：2007-11-22 11:17:00來源： HYPERLINK 論文天下論文網(wǎng)-端粒(即染色體末端)的發(fā)現(xiàn)已有很長的 HYPERLINK /class_free/171_1.shtml 歷史，但對其結(jié)構(gòu)、功能、合成及其重要意義的認(rèn)識(shí)，近年來有了很大進(jìn)展。本文就端粒、端粒酶的

13、研究進(jìn)展以及他們與腫瘤的關(guān)系綜述如下。 一、端粒 (一)端粒的結(jié)構(gòu) 端粒是位于染色體3末端的一段富含G的DNA重復(fù)序列，端粒和端粒結(jié)合蛋白組成核蛋白復(fù)合物，廣泛存在于真核生物細(xì)胞中，具有特殊的功能。不同種類細(xì)胞的端粒重復(fù)單位不同，大多數(shù)長58bp，由這些重復(fù)單位組成的端粒，突出于其互補(bǔ)鏈1216個(gè)核苷酸內(nèi)1。人類端粒由5TTAGGG3的重復(fù)單位構(gòu)成，長度在515kb范圍1，2。與端粒特異性結(jié)合的是端粒結(jié)合蛋白，迄今為止，只在少數(shù)生物中確定了端粒結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)及表達(dá)基因，然而端粒結(jié)構(gòu)與功能的保守性表明，這些端粒結(jié)合蛋白的特性可能普遍適用于其他真核生物。Chong等3在人類細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種端粒結(jié)合

14、蛋白，但人類染色體末端的DNA-蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)還不清楚。 (二)端粒的功能 端粒高度的保守性表明，端粒具有非常重要的作用。其主要功能包括： 1.保護(hù)染色體末端：真核生物的端粒DNA-蛋白復(fù)合物，如帽子一般，保護(hù)染色體末端免于被化學(xué)修飾或被核酶降解，同時(shí)可能還有防止端粒酶對端粒進(jìn)行進(jìn)一步延伸的作用1。改變端粒酶的模板序列將導(dǎo)致端粒的改變，從而誘導(dǎo)細(xì)胞衰老和死亡4。 2.防止染色體復(fù)制時(shí)末端丟失：細(xì)胞分裂、染色體進(jìn)行半保留復(fù)制時(shí)，存在染色體末端丟失的問題5。隨著細(xì)胞的不斷分裂，DNA丟失過多，將導(dǎo)致染色體斷端彼此發(fā)生融合，形成雙中心染色體、環(huán)狀染色體或其他不穩(wěn)定形式。端粒的存在可以起到緩沖保護(hù)的

15、作用，從而防止染色體在復(fù)制過程中發(fā)生丟失或形成不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)1。 3.決定細(xì)胞的壽命：染色體復(fù)制的上述特點(diǎn)決定了細(xì)胞分裂的次數(shù)是有限的，端粒的長度決定了細(xì)胞的壽命，故而被稱為“生命的時(shí)鐘”6。 4.固定染色體位置：染色體的末端位于細(xì)胞核邊緣，人類端粒DNA和核基質(zhì)中的蛋白相互作用，以TTAGGG結(jié)構(gòu)附著于細(xì)胞核基質(zhì)(包括nuclear envelope和internal protein)3。 (三)端粒的長度 端粒的長度在不同的細(xì)胞之間存在著差異。胚胎細(xì)胞和生殖細(xì)胞端粒的長度大于體細(xì)胞7。體外培養(yǎng)細(xì)胞端粒的長度隨著細(xì)胞逐代相傳而縮短，每復(fù)制一代即有50200nt的DNA丟失，端粒丟失到一定程度即失

16、去對染色體的保護(hù)作用，細(xì)胞隨之發(fā)生衰老和死亡。所以，通過測定端粒的長度可以預(yù)測細(xì)胞的壽命6。人體細(xì)胞端粒的長度不一，存在著個(gè)體差異，隨著年齡的增長，端粒每年減少約1540 nt7，最終細(xì)胞衰老。胚胎細(xì)胞和生殖細(xì)胞端粒的長度不隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而縮短，具有無限分裂的能力，其原因就在于端粒酶的存在7。 二、端粒酶 (一)端粒酶的結(jié)構(gòu)和功能 端粒酶是由端粒酶RNA和蛋白質(zhì)組成的核糖核蛋白酶，通過識(shí)別并結(jié)合于富含G的端粒末端，以自身為模板，逆轉(zhuǎn)錄合成端粒1。 1995年，Junli等8克隆了人類端粒酶RNA基因，在長約450個(gè)堿基的人端粒酶RNA(hTR)序列中，有一段長11個(gè)核苷酸的區(qū)域(5-C

17、UAACCCUAAC-3)，與人端粒序列(TTAGGG)n互補(bǔ)，發(fā)生在該模板區(qū)域的hTR突變將導(dǎo)致端粒酶功能的改變。 端粒酶蛋白質(zhì)成分的分離十分困難，直到1995年，Greider等9才純化并克隆了四膜蟲端粒酶的兩個(gè)多肽成分，即p80和p95。1997年，人們克隆并描述了兩種人類端粒酶蛋白TP 1(telomerase associated protein 1)10和TP 2(telomerase associated protein 2或hTRT)1 1。其中TP 1與四膜蟲端粒酶蛋白p80同源，能與端粒酶RNA特異性結(jié)合；TP 2與啤酒酵母S.cerevisiae的端粒酶蛋白Est2p同源

18、，和逆轉(zhuǎn)錄酶的結(jié)構(gòu)相似，是端粒酶的催化亞單位，在腫瘤細(xì)胞端粒酶的激活中起關(guān)鍵作用12。 四膜蟲端粒酶RNA及其兩個(gè)多肽成分(p80, p95)是組成端粒酶的唯一必要成分，鑒于端粒酶在進(jìn)化中的保守性，hTR和TP 1、TP 2是否構(gòu)成了完整的人類端粒酶，目前尚無定論。 (二)端粒酶活性的調(diào)節(jié) 端粒酶的活性在不同的層次上受到各種因素的調(diào)節(jié)。 1.hTR: hTR是端粒酶的重要成分，在體外培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞中轉(zhuǎn)染反義端粒酶RNA，將導(dǎo)致端粒DNA的縮短和腫瘤細(xì)胞的死亡8。但許多研究表明，hTR的水平并不能代表端粒酶活性水平，缺乏端粒酶活性的細(xì)胞同樣可以有hTR的表達(dá)?？梢姸肆Ｃ窻NA并不是調(diào)節(jié)端粒酶

19、活性的唯一因素13。 2.端粒酶蛋白：TP 1或TP 2基因的突變，均可導(dǎo)致端粒酶的失活10，11，TP 2基因在不同的細(xì)胞有不同的剪切位點(diǎn)，可能以此改變TP 2的生化特性，從而起重要的調(diào)節(jié)作用14。 3.癌基因與抑癌基因：癌基因和抑癌基因?qū)δ[瘤的發(fā)生、發(fā)展起著重要的作用。Wright等15根據(jù)體外培養(yǎng)細(xì)胞的永生化過程提出了腫瘤發(fā)生的M1/M2模型，即細(xì)胞經(jīng)過有限次的分裂后進(jìn)入M1期，細(xì)胞衰老走向死亡，抑癌基因p53或Rb的突變等使細(xì)胞逃脫生長控制的機(jī)理使細(xì)胞渡過M1期，再次經(jīng)過若干次的分裂，進(jìn)入M2期，少數(shù)細(xì)胞發(fā)生端粒酶的激活成為永生細(xì)胞，此時(shí)仍然需要p53或Rb的突變存在。有研究報(bào)道，使缺

20、乏抑癌基因p53/Rb的腫瘤表達(dá)Rb蛋白(pRb)，細(xì)胞停滯在G0/G1期并發(fā)生老化現(xiàn)象，抑制pRb后細(xì)胞重新開始合成DNA，但大多數(shù)細(xì)胞在分裂中死亡，p53無此現(xiàn)象16。另一項(xiàng)關(guān)于卵巢癌的研究提示，p53與端粒酶活性無關(guān)17。抑癌基因與端粒酶的關(guān)系并不明確。 4.細(xì)胞分化及細(xì)胞周期對端粒酶活性的影響：用 HYPERLINK /class_free/120_1.shtml 藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)表明，隨著細(xì)胞分化，端粒酶活性隨之降低，而抗分化的細(xì)胞則無影響18，永生細(xì)胞株端粒酶的活性在各細(xì)胞周期中無顯著變化，而與細(xì)胞的生長速度相關(guān)19，使細(xì)胞脫離生長周期能否抑制端粒酶的活性，各報(bào)道不一18，1

21、9。然而，作出端粒酶活性與細(xì)胞周期無關(guān)的結(jié)論為時(shí)尚早，細(xì)胞的生長、分化與端粒酶活性調(diào)節(jié)間的關(guān)系，還有待于研究。 5.端粒的長度與端粒酶激活：當(dāng)端?？s短到一定程度后才有端粒酶的激活，其機(jī)理可能在于，縮短的端粒導(dǎo)致基因的不穩(wěn)定，某些突變?nèi)缂せ疃肆Ｃ?、丟失抑癌基因使細(xì)胞獲得不死性，成為優(yōu)勢克隆。端粒的縮短成為端粒酶激活的前提20。但此理論不能解釋某些腫瘤細(xì)胞中端粒較長的現(xiàn)象。 端粒酶活性的調(diào)節(jié)機(jī)理錯(cuò)綜復(fù)雜、說法不一，胚胎早期端粒酶的活性隨著胚胎的發(fā)育而逐漸消失(生殖細(xì)胞例外)，而細(xì)胞獲得不死性及腫瘤的發(fā)生，又與端粒酶的再次激活密切相關(guān)，其機(jī)理目前還不清楚。 三、端粒、端粒酶與腫瘤 (一)端粒、端粒酶

22、與人類腫瘤的關(guān)系 正常細(xì)胞的分裂次數(shù)是有限的。端粒酶的激活是細(xì)胞走向永生化的必要途徑，而永生化又被認(rèn)為是腫瘤惡化的必要步驟。腫瘤細(xì)胞的端粒長度很短，其繼續(xù)縮短將導(dǎo)致染色體融合、細(xì)胞死亡，而端粒酶的激活可以維持端粒的長度，從而維持腫瘤的繼續(xù)分裂、增殖和生存21。端粒酶的表達(dá)，可能是腫瘤形成和發(fā)展的共同途徑。 人類細(xì)胞端粒酶活性水平較低，以及很難獲得大量的腫瘤標(biāo)本，使得早期對人類端粒酶的研究受到了很大限制。1994年，Kim等22創(chuàng)立了測定端粒酶活性的telomere repeat amplification protocol(TRAP)法，用裂解緩沖液代替原低滲液，提高了細(xì)胞的裂解程度，并引入聚

23、合酶鏈反應(yīng)(PCR)，使反應(yīng)的靈敏性提高了104倍。至今已在大多數(shù)人類惡性腫瘤中測到了端粒 酶的活性。有些實(shí)驗(yàn)表明，端粒酶的活性與某些腫瘤的惡性程度和預(yù)后相關(guān)17，21。端粒酶在惡性腫瘤發(fā)展中的作用日益明晰21。 (二)端粒酶在婦科腫瘤方面的研究 大多數(shù)婦科惡性腫瘤有端粒酶的表達(dá)23。由于卵巢含生殖細(xì)胞成分，子宮內(nèi)膜周期性脫落具有再生能力，使得端粒酶具有不同于一般組織的特殊性。 1.卵巢腫瘤：良性卵巢腫瘤(如生殖細(xì)胞腫瘤、乳頭狀囊腺瘤)、交界性腫瘤及絕經(jīng)前正常卵巢可測出端粒酶活性。但在惡性卵巢癌、低分化卵巢腫瘤及有淋巴轉(zhuǎn)移者，端粒酶活性顯著增高。初步的研究表明，端粒酶活性與上皮性卵巢癌的發(fā)展及

24、蔓延相關(guān)17，24。腹水細(xì)胞的結(jié)果并不一致，有報(bào)道認(rèn)為，端粒酶的陽性率不高23。 2.子宮內(nèi)膜癌：端粒酶在子宮內(nèi)膜癌中表現(xiàn)為強(qiáng)陽性，同時(shí)正常子宮內(nèi)膜可以有端粒酶活性，絕經(jīng)前甚至可表現(xiàn)為強(qiáng)陽性。有關(guān)研究未發(fā)現(xiàn)端粒酶活性與腫瘤的分期、浸潤的深度及DNA的成分相關(guān)25。這與子宮內(nèi)膜的周期性再生有關(guān)。 3.宮頸癌：有研究表明，端粒酶的激活發(fā)生在宮頸癌的早期，與其進(jìn)展有關(guān)，有希望成為宮頸癌診斷及預(yù)后的標(biāo)記物26。雖然絕大多數(shù)宮頸癌端粒酶陽性，但在正常宮頸及宮頸上皮內(nèi)瘤樣變中的陽性率報(bào)道不一。Zheng等26的研究結(jié)果為，宮頸脫落細(xì)胞涂片的端粒酶陽性率分別為7%及40%，而Gorham等23報(bào)道的陽性率為

25、0%。 (三) HYPERLINK /class_free/121_1.shtml 臨床應(yīng)用前景 1.腫瘤的治療方面：端粒酶與惡性腫瘤之間令人驚異的相關(guān)性，使他在腫瘤的診斷和治療上有望成為行之有效的新的靶目標(biāo)。因?yàn)槎肆Ｃ钢饕嬖谟趷盒阅[瘤，而在大多數(shù)正常組織中沒有活性或活性極低，同時(shí)由于端粒酶在惡性腫瘤的發(fā)生，尤其是在腫瘤的發(fā)展中起著關(guān)鍵的作用21。所以，通過各種途徑抑制端粒酶的活性，可能將有效地抑制大多數(shù)腫瘤的生長，而對大多數(shù)正常細(xì)胞沒有影響。這種抑制作用可以通過直接抑制端粒酶活性、抑制端粒酶RNA(如導(dǎo)入反義核酸)，或端粒酶蛋白成分以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生分化等方法實(shí)現(xiàn)。 2.診斷與鑒別診斷及

26、臨床預(yù)后方面：端粒酶可以出現(xiàn)在某些腫瘤的早期甚至癌前病變，在分化低有轉(zhuǎn)移傾向的腫瘤中高度表達(dá)，使其在診斷及評價(jià)預(yù)后方面，具有一定價(jià)值。 在人類端粒及端粒酶的基礎(chǔ)研究中，還存在著許多問題，有待進(jìn)一步研究，如人類端粒末端的精細(xì)結(jié)構(gòu)，端粒的非端粒酶延伸機(jī)理；人類端粒酶的具體結(jié)構(gòu)及其基因所在的位置；端粒酶的激活機(jī)理及其活性調(diào)節(jié)；端粒酶在腫瘤的發(fā)生中的作用；如何有效地抑制端粒酶活性；缺乏端粒酶活性的腫瘤的生長機(jī)理等?？傊?，端粒、端粒酶在腫瘤的研究中具有廣闊的前景，將為人類攻克腫瘤開辟新的視野。 參考文獻(xiàn) 1Rhyu MS. Telomeres, telomerase,and immortality. J

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39、and in vivo cervical carcinogenesis. Gynecol Oncol, 1997,66:222-226. 非小細(xì)胞肺癌患者外周血TA，CEA mRNA和CK19 mRNA檢測比較作者：時(shí)間：2007-11-22 11:36:00來源： HYPERLINK 論文天下論文網(wǎng)- 作者：龐桂芬 盧云濤 楊林瀛 杜新生 劉懷深 薛承巖 白海洋 【摘要】 目的： 探討檢測非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者血液中TA，CEA mRNA，CK19 mRNA的 HYPERLINK /class_free/121_1.shtml 臨床意義，評價(jià)三者診斷NSCLC血液轉(zhuǎn)移的應(yīng)用價(jià)值. 方

40、法： NSCLC組74例，非腫瘤性呼吸系統(tǒng)疾病患者(疾病對照組) 51例和健康人(健康對照組) 36例，應(yīng)用端粒末端重復(fù)序列擴(kuò)增雜交酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)檢測TA，逆轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測CEAmRNA和CK19 mRNA. 結(jié)果： NSCLC組血液TA，CEA mRNA和CK19 mRNA陽性率高于兩個(gè)對照組(P0.05). 結(jié)論： 檢測血液TA，CEA mRNA和CK19 mRNA有助于發(fā)現(xiàn)NSCLC細(xì)胞血液轉(zhuǎn)移，且TA和CEA mRNA的價(jià)值高于CK19 mRNA，但此3個(gè)指標(biāo)可能無助于鑒別NSCLC的類型. 【關(guān)鍵詞】 癌 非小細(xì)胞肺 血液 端粒 末端轉(zhuǎn)移 酶癌胚抗原 角蛋白 RNA

41、信使 0引言 非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的70%以上，約50%多的NSCLC患者在最初診斷時(shí)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差. 肺癌微轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性標(biāo)志和主要特征之一，也是導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因. 因此，明確腫瘤有無轉(zhuǎn)移，對治療決策的制訂、預(yù)后評估等具有重要的 HYPERLINK /class_free/25_1.shtml 指導(dǎo)意義，早期診斷和治療肺癌微轉(zhuǎn)移是提高肺癌治療率、改善患者預(yù)后的有效途徑. 至今，對NSCLC早期轉(zhuǎn)移、微轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移等的診斷仍沒有令人滿意的方法. 研究提示，檢測血液中端粒酶活性(TA)和癌胚抗原信使核糖核酸(CEA mRNA)指標(biāo)對了解NSCLC血液轉(zhuǎn)移

42、有較大幫助，且作用優(yōu)于CK19 mRNA. 1對象和方法 1.1對象我院住院NSCLC患者74（男47，女27）例，年齡3775歲，其中腺癌24例，鱗癌22例，腺鱗癌14例，大細(xì)胞肺癌14例. 非癌性肺部疾病患者(疾病對照組)51（男29，女22）例，年齡1676歲，包括間質(zhì)性肺炎9例，支氣管擴(kuò)張9例，肺結(jié)核11例，肺囊腫11例，炎性假瘤11例. 均經(jīng)手術(shù)或穿刺活檢病理證實(shí)診斷. 健康志愿者(健康對照組)36（男20，女16）例，年齡1875歲. 對腫瘤患者及檢測指標(biāo)陽性者通過 HYPERLINK /class_free/147_1.shtml 通信、電話形式進(jìn)行隨訪0.53 a. 應(yīng)用檸檬酸

43、鈉抗凝劑真空采血管采集靜脈血液，分離、提取有核細(xì)胞，預(yù)冷生理鹽水充分洗滌有核細(xì)胞，以備檢測TA，CEA mRNA及CK19 mRNA. 如不能即時(shí)檢測，應(yīng)盡快提取血液有核細(xì)胞，分裝后封存于-70. 1.2方法應(yīng)用端粒末端重復(fù)序列擴(kuò)增雜交酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)(TRAPHybELISA)檢測TA，試劑盒為華美生物工程公司商品試劑盒. 檢測操作經(jīng)過端粒酶催化端粒末端重復(fù)序列復(fù)制、PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物微孔板雜交、酶聯(lián)免疫測定等步驟，于450 nm波長測定各反應(yīng)孔A值，以檢測孔A值2.0倍陰性對照孔A值為端粒酶陽性結(jié)果. 應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RTNPPCR)檢測CEA mRNA和CK19 mRN

44、A，CEA mRNA檢測試劑盒為上海復(fù)星生物技術(shù)有限公司的商品試劑盒，CK19 mRNA檢測試劑盒由北京美迪科生物科技有限公司提供. 操作經(jīng)RNA模板提取、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、套式PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳、溴化乙啶染色、紫外檢測等步驟，以出現(xiàn)與試劑盒提供的陽性對照同齊的核酸電泳亮帶為陽性結(jié)果. 實(shí)驗(yàn)按試劑盒操作說明書進(jìn)行. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：組間比較應(yīng)用2檢驗(yàn)，同組內(nèi)兩種檢測結(jié)果比較應(yīng)用配對2檢驗(yàn)法. 2結(jié)果 2.1外周血TA，CEA mRNA 和CK19 mRNA變化在疾病對照組，2例TA陽性結(jié)果分別來自肺結(jié)核和炎性假瘤；CEA mRNA陽性結(jié)果分別為肺結(jié)核2例，炎性假瘤1例；CK19 mRNA的陽性結(jié)果為肺結(jié)核2例，炎性假瘤2例，肺囊腫2例，間質(zhì)性肺炎1例. 健康對照組的2例CK19 mRNA陽性者，未見任何有意義的檢查及既往發(fā)現(xiàn)，其中，1例于1，3，6，12 mo后的4次復(fù)查均呈陰性結(jié)果，另1例于1，3，6，12 mo后的4次復(fù)查中有1次(3 mo后)呈陽性結(jié)果，其余均陰性. NSCLC組的各結(jié)果與兩個(gè)對照組比較，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(TA，CEA mRNA和CK19 mRNA，與疾病對照組比較2=44.218，42.789和8.345；與健康對照組比較2=38.834，40.348和11.925，