病理技術(shù)理論與操作手冊(cè)

1、PAGE PAGE 124 常規(guī)病理技術(shù)特殊染色技術(shù) 理論及操作手冊(cè)組織化學(xué)技術(shù)免疫組化染色技術(shù)2005年3月目 錄第一篇常規(guī)標(biāo)本制作程序第一節(jié)組織標(biāo)本收集取材和固定一、標(biāo)本收集和查驗(yàn)程序二、活檢組織取材（一）取材時(shí)必須注意以下問(wèn)題（二）各種器官取材的方法第二節(jié)尸體解剖的受理和規(guī)則一、中華醫(yī)學(xué)會(huì)規(guī)定尸檢受理規(guī)則二、尸體解剖須知三、尸體剖檢的一般常識(shí)四、一般尸體解剖的主要步驟與要求五、尸體剖檢的取材和固定六、科學(xué)研究材料的取材第三節(jié)組織固定（一）固定的作用（二）固定的目的（三）固定的注意事項(xiàng)（四）固定液的使用第四節(jié)病理常規(guī)制作程序 一、常規(guī)石蠟切片制作法（一）組織脫水（二）組織的透明（三）組織浸

2、蠟（四）組織塊包埋（五）蠟塊的修切（六）石蠟切片（七）裱片（八）烘烤切片（九）切片的普通染色（十）蘇木素的種類及其配制法（十一）伊紅染液的配制二、超聲波快速石蠟制片法三、快速石蠟制片法第五節(jié)冰凍切片（一）冷凍切片的種類（二）冷凍切片的目的（三）冷凍切片的制作方法（四）冷凍切片的快速染色法（一）MW固定組織（二）MW快速石蠟制作法（三）MW技術(shù)的特殊染色法（四）MW技術(shù)的免疫組化染色法第二篇各種組織特殊染色法一、膠原纖維染色法1、Van Gieson染色法2、Masson氏三色染色法二、網(wǎng)狀纖維染色法1、Gomoris氨銀法2、Godon和Swet氏法3、Wilder氏法4、Foot氏法三、彈性

3、纖維染色法1、Weigert氏雷鎖辛品紅法2、Gomori醛品紅法3、Unna地衣紅技術(shù)4、Verhoff氏酒精蘇木素技術(shù)四、橫紋肌染色法1、磷鎢酸蘇木素染色法（PTAH）2、Masson氏法染色法3、Van Gieson氏法五、基底膜的顯示1、六氨銀顯示法2、PAS顯示法3、Masson氏三色染色法4、AFOG法5、六氨銀AFOG聯(lián)合染色法六、纖維素染色法1、MSB的改良法2、PTAH法七、細(xì)菌染色法1、Warthin-Satamy氏法顯示幽門螺桿菌2、甲苯胺藍(lán)染色法3、Wade-Fite氏抗酸菌染色法4、Grocott-Gomori氏六氨銀改良法顯示真菌5、六氨銀改良法顯示組織胞漿菌八、病

4、毒包涵體染色法1、Macchiaello氏改良法顯示SARS病毒包涵體2、Giemsa法顯示多種病毒涵體3、伊紅和甲基藍(lán)顯示合胞和巨細(xì)胞病毒包涵體九、淀粉樣物的染色法1、甲基紫法2、改良的剛果紅甲醇法十、神經(jīng)系統(tǒng)染色技術(shù)（一）蘇木素VG法染中樞神經(jīng)（二）神經(jīng)細(xì)胞尼氏體染色（三）改良的Masland、Glees方法（四）改良的Palmgren氏法染神經(jīng)纖維（五）改良的Egers氏法染變性軸索（六）改良的Loyez氏法染神經(jīng)髓鞘第三篇組織化學(xué)及其顯示法一、色素顯示法1、硫酸亞鐵法2、Masson Fontana氨銀法二、含鐵血黃素顯示法1、Perls亞鐵氰化鉀法三、脂褐素顯示法1、PAS法2、Sc

5、hmorl氏法四、鈣鹽顯示法1、硝酸銀法五、脂類染色法1、蘇丹IIIIV聯(lián)合法2、油紅法3、蘇丹黑B法4、Schultz法顯示膽固醇與膽固醇酯六、糖類1、PAS顯示法2、AB法3、ABPAS七、核酸1、Feulgen顯示DNA法2、核仁組成區(qū)和糖多糖復(fù)合顯示法3、粘多糖和核仁組成區(qū)雙染法八、酶組織化學(xué)1、改良的Gomori氏硝酸鉛法2、改良的Gomori氏硝酸鉛法3、Gomoris鈣鈷法4、-磷酸萘脂法5、磷酸奈酯AS-TR（或AS-BJ）法6、酸、堿性磷酸酶雙染色法第四篇免疫組織化學(xué)技術(shù)一、免疫組織化學(xué)的意義二、免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展概況（一）免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（二）免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（三

6、）非標(biāo)記抗體酶法（四）親和細(xì)胞化學(xué)法（五）堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法（六）免疫金銀法（七）LSAB法（八）EnVisionTM Systems法（九）真空負(fù)壓LSAB法三、常用免疫組織化學(xué)染色方法（一）ABC法（二）LSAB法（三）真空負(fù)壓LSAB法（四）EnvisionTM Systems法（五）免疫組化雙染色法（I）（六）免疫組化雙染色法（II）（七）細(xì)胞培養(yǎng)片免疫熒光染色法（八）真空負(fù)壓、免疫熒光染色法染細(xì)胞培養(yǎng)片四、抗原修復(fù)（一）為什么要進(jìn)行抗原修復(fù)（二）用什么方法進(jìn)行抗原修復(fù)1、真空負(fù)壓抗原修復(fù)法2、微波輻射抗原修復(fù)法3、高壓抗原修復(fù)法4、隔水熱抗原修復(fù)法5、電爐加熱抗原修復(fù)法（三）抗

7、原修復(fù)必須注意的問(wèn)題五、作好免疫組化染色必須注意的問(wèn)題六、免疫組化陽(yáng)性病例的評(píng)判及相關(guān)問(wèn)題七、常用抗體的應(yīng)用范圍及選用（一）常用上皮細(xì)胞及腫瘤標(biāo)記物（二）常用的時(shí)間葉源性組織及其腫瘤的檢測(cè)抗體（三）肌組織及其相關(guān)腫瘤的常用抗體（四）淋巴組織及相關(guān)腫瘤檢測(cè)的常用抗體（五）神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌及其相關(guān)腫瘤抗體（六）其它八、免疫組織化學(xué)在乳腺癌中的應(yīng)用第一篇 常規(guī)標(biāo)本制作程序第一節(jié) 組織標(biāo)本收集取材固定標(biāo)本收集和查驗(yàn)程序。對(duì)于所有送檢的標(biāo)本，必須認(rèn)真執(zhí)行查驗(yàn)程序，方能進(jìn)入下一程序，其主要程序是：收集標(biāo)本時(shí)：要仔細(xì)查對(duì)申請(qǐng)單上的姓名與標(biāo)本上的姓名，序號(hào)是否一致；標(biāo)本的件數(shù)與申請(qǐng)單是否相符；標(biāo)本是否用固定液

8、固定過(guò)。標(biāo)本經(jīng)上述驗(yàn)收后，進(jìn)行編號(hào)登記，以防錯(cuò)亂。編號(hào)按年份和流水號(hào)兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號(hào)為較好?；顧z組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對(duì)于每一例病例的材料，大小都不一樣，但對(duì)于較大的標(biāo)本，不可能都對(duì)其進(jìn)行制作切片，因此，選擇適合于病理技術(shù)制作，適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病理活檢的關(guān)鍵，通常把這過(guò)程稱為取材。（一）取材時(shí)必須注意以下問(wèn)題： 取出所有送檢的標(biāo)本，量其大小，稱其重量，描寫(xiě)其色澤，質(zhì)地，形狀和肉眼所見(jiàn)表面情況。當(dāng)標(biāo)本切開(kāi)后，應(yīng)詳細(xì)描寫(xiě)其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時(shí)繪圖說(shuō)明。 對(duì)于細(xì)小標(biāo)本如肺支氣管穿刺物標(biāo)本胃腸鏡活檢標(biāo)本1等，

9、應(yīng)將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。 對(duì)于有傳染性的標(biāo)本，讓標(biāo)本徹底固定后再取材。如結(jié)核瘤標(biāo)本等。 對(duì)于罕見(jiàn)特殊的標(biāo)本，應(yīng)小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標(biāo)本。以利于教學(xué)標(biāo)本，陳列標(biāo)本的收集。 邊取材邊固定，組織標(biāo)本較多的單位，取材經(jīng)常要花上幾個(gè)小時(shí)，如果從下午2：30開(kāi)始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定幾個(gè)小時(shí)，如此可以防止固定時(shí)間不足，同時(shí)也可防止組織發(fā)生自溶。 對(duì)于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘左右，然后再與其它組織進(jìn)行處理。 骨組織和鈣化組織，應(yīng)徹底脫鈣后，方能進(jìn)行制作。具體用大頭針能順利扎入骨組

10、織則可。 活檢組織取材，不能太厚，以不超過(guò)2mm為宜。以防脫水不徹底，不利于制片。 每取完一例標(biāo)本后，所有的工具如刀，剪，盤(pán)鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。 組織取完即刻放入打印好號(hào)碼的盒內(nèi)，放入固定液中固定。（二） 各種器官及其腫瘤取材的方法1、乳腺： 纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切面是否均勻，有無(wú)壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫瘤可取1塊）。乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無(wú)水腫或變硬，腫大淋巴結(jié)，數(shù)量，組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長(zhǎng)徑經(jīng)過(guò)乳頭切開(kāi)，觀察腫瘤的面積，顏色，硬度及

11、浸潤(rùn)情況等。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應(yīng)取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。2、食管癌： 切除的食管長(zhǎng)度及周徑，管壁有無(wú)水腫或粘連，腫大淋巴結(jié)的位置，大小，硬度及數(shù)目。沿腫瘤對(duì)側(cè)縱形切開(kāi)，腫瘤大小及形狀。取材：腫瘤上下交界處各取一塊?；蜓亻L(zhǎng)軸通過(guò)腫瘤全徑取出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋3、胃潰瘍及胃癌：全胃或部分切除，大彎及小彎長(zhǎng)度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，硬度及數(shù)目，病變處相應(yīng)漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開(kāi)，觀察病變大小，深度，邊緣及周圍變化，如為癌瘤，屬何種類型，與大小切端的距

12、離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織（盡量側(cè)重于小彎，并注意沿長(zhǎng)軸切取組織塊），上下切端組織，腫大的淋巴結(jié)（注明組別）4、闌尾：一般于近、中、遠(yuǎn)三段各取一組織塊，遠(yuǎn)端一塊盡量靠近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開(kāi)者，沿縱軸取組織塊，如檢查時(shí)不能發(fā)現(xiàn)病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。5、腸癌：切除腸管的長(zhǎng)度，腫瘤 生長(zhǎng)部位、大小、局部漿膜等情況。如為十二指腸癌，則應(yīng)注意與特氏壺腹的關(guān)系。取材：腫瘤 及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結(jié)。6、腸梗阻：梗阻部位、長(zhǎng)度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷面，觀察血管壁是否變厚，

13、尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無(wú)潰瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊。7、腸套疊：注意套疊部位及套疊 關(guān)系，尋找闌尾，腸壁是否增厚及變硬，以手指放入小腸為引導(dǎo)，沿腸系膜 剪開(kāi)，尋找有無(wú)原發(fā)病變（在套入部位的最前端尋找有無(wú)腫瘤、潰瘍等到變化）。切面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變等到情況。取材：原發(fā)病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結(jié)。8、腸結(jié)核：外部有無(wú)粘連，白色斑塊、結(jié)節(jié)、狹窄，病變上下的腸段有何改變，有無(wú)淋巴結(jié)腫大。沿病變對(duì)側(cè)切開(kāi)，觀察病變情況（潰瘍、突起、體積、有無(wú)息肉樣改變，腸道是否變?yōu)楠M窄或增厚）。取材：病變部，

14、上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無(wú)結(jié)節(jié)狀或纖維組織增生，有無(wú)灰白色結(jié)節(jié)等。取材：包含各病變的組織，如標(biāo)本較小，全部切取。10、陰莖癌：腫瘤生長(zhǎng)的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤(rùn)情況，切端與腫瘤明顯浸潤(rùn)處的距離?？v切（通過(guò)尿管）觀察切面情況。取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。11、腎結(jié)核：注入福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑，有無(wú)粘連、灰白色小結(jié)節(jié)，輸尿管長(zhǎng)度，直徑，及硬度。沿輸尿管及腎盂切開(kāi)，腎盂是否擴(kuò)張，切面破壞情況，粘膜變化，主質(zhì)變化，乳頭情況，（注明哪一個(gè)）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜情況。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。12、腎盂

15、積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、表面性狀（色澤、平滑否、結(jié)節(jié)、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切開(kāi)，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴(kuò)張情況，腎實(shí)質(zhì)厚度。取材：腎實(shí)質(zhì)厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關(guān)系，表面有無(wú)水腫或粘連，有無(wú)腫大淋巴結(jié)。切面：腫瘤位置、形狀、大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無(wú)蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般沿前側(cè)切開(kāi)，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長(zhǎng)情況及浸潤(rùn)情況，有無(wú)淋巴結(jié)（大

16、小，硬度，切面變化）。取材：沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應(yīng)包括蒂部組織，三角區(qū)組織。15、前列腺：形態(tài)，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色，質(zhì)均勻否，有無(wú)壞死，出血，囊性變。作多個(gè)與尿道垂直的平行切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時(shí)在發(fā)黃處盡量多切，包含尿道。16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林固定。檢察前應(yīng)觀察X線片。病變與支氣管有關(guān)者，沿支氣管切開(kāi)；病變不沿支氣管者，可作書(shū)頁(yè)狀切開(kāi)：肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠(yuǎn)，大小，形狀，質(zhì)地是否均勻，有無(wú)壞死、空洞、邊緣有無(wú)纖維組織圍繞或不規(guī)則浸潤(rùn)，是否壓迫支氣管干，肺門淋巴結(jié)情況。取材：癌組織，癌與正常組織的交

17、界處，支氣管斷端，肺門或局部淋巴結(jié)。支氣管擴(kuò)張：新鮮時(shí)剪開(kāi)，系囊形或圓柱形（管形）擴(kuò)張，屬哪級(jí)支氣管，擴(kuò)張的支氣管之直徑，或?qū)挾龋鼙诤穸?，顏色周圍組織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔有無(wú)膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴(kuò)張的支氣管，支氣管周圍發(fā)炎組織，膿腫壁。肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質(zhì)及氣味，有無(wú)懸梁狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管相通，有無(wú)散布的小膿腫，有無(wú)支氣管擴(kuò)張，支氣管中有無(wú)異物，膿腫內(nèi)有無(wú)硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫有關(guān)的支氣管，肺組織。肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無(wú)膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內(nèi)為肉芽或纖維組織

18、，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門淋巴結(jié)情況。取材：空洞壁，散播的病變，肺門淋巴結(jié)。肺囊腫：數(shù)目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與支氣管的關(guān)系，收集囊內(nèi)液體檢查其性狀。取材：囊腫壁及其旁肺組織，如為包蟲(chóng)病，則應(yīng)在包蟲(chóng)囊的液體中尋找子囊及幼蟲(chóng)頭節(jié)（離心后）。17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿脾長(zhǎng)軸作多個(gè)平行切開(kāi)，在切面上看包膜及脾髓情況。淤血性脾腫大或脾功能亢進(jìn)，注意靜脈內(nèi)有無(wú)血栓，靜脈壁有無(wú)變化，有無(wú)梗死，切面上有無(wú)含鐵小結(jié)節(jié)。脾破裂：注意踴裂部位，長(zhǎng)度，有無(wú)血凝塊充填破裂口。取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門附近包括較大的血管，如有副脾，淋巴結(jié)各一塊，脾破裂

19、應(yīng)包括裂呂充物。18、淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。取材：整個(gè)短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤無(wú)關(guān)部剔除，然后鋸開(kāi)，有條件者，可與鋸開(kāi)前攝X線片以作比較。檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出血，壞死，囊變，何處為原發(fā)，與骨膜 ，骨皮質(zhì)及骨髓之間關(guān)系，有無(wú)破壞情況，有無(wú)包膜，其厚度及硬度，無(wú)包膜者注意其對(duì)軟組織浸潤(rùn)情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤(rùn)處。20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無(wú)結(jié)節(jié)，尋找背面有無(wú)甲狀旁腺，切面質(zhì)地是否均勻，含膠質(zhì)狀況，有無(wú)結(jié)節(jié)，出

20、血，壞死，鈣化，囊變等，有無(wú)細(xì)小灰白色疤痕樣病變。甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位， 大小， 包膜完整否，切面質(zhì)地，有無(wú)出血，壞死，鈣化，囊性變及其內(nèi)容物，有無(wú)乳頭或絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無(wú)灰白色小節(jié)。取材：最大面積，切成數(shù)塊全作切片，如為根治術(shù)，要取全部淋巴結(jié)。21、刮宮或陰道排出物標(biāo)志：疑有妊娠者，須仔細(xì)尋找有無(wú)胎盤(pán)絨毛，眼觀不能判斷時(shí)，須取組織塊，尤應(yīng)注意檢查血凝塊。22、子宮標(biāo)本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與子宮頸12點(diǎn)，3點(diǎn)，6點(diǎn)，9點(diǎn)處取宮頸及宮頸內(nèi)膜交界處組織，必要時(shí)取其他各點(diǎn)組織。23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應(yīng)稱其重量，表面色澤，光滑度，與輸卵管的關(guān)系，有無(wú)粘連，

21、囊性者自膨大部遠(yuǎn)端剪開(kāi)，查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內(nèi)壁光滑度，有無(wú)質(zhì)或乳頭狀生長(zhǎng)區(qū)，乳頭脆性，囊內(nèi)容物性質(zhì)。實(shí)性腫瘤切面色澤、硬度，有無(wú)出血，壞死，變性等。 取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實(shí)質(zhì)，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。實(shí)性瘤取邊緣及中央不同結(jié)構(gòu)組織及輸卵管。24、胎盤(pán)：形狀，大小，重量，母體面絨毛有無(wú)缺損、出血、鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長(zhǎng)度，直徑，有無(wú)扭轉(zhuǎn)打結(jié)、血管栓塞等。取材：母體面、子體面臍帶各一塊。25、瘺管或竇道組織：應(yīng)作多數(shù)橫斷面檢查，適當(dāng)取材。26、眼球標(biāo)本：標(biāo)本固定后，先經(jīng)緩慢脫水至今95%酒精，然后切開(kāi)，除病變部位特殊取材外，一般取水平

22、切面，通過(guò)視神經(jīng)和瞳孔。要求保存眼球隊(duì)的完整性，如結(jié)膜、視神經(jīng)、黃斑及晶狀體等，都應(yīng)完整無(wú)缺，切時(shí)刀刃銳利，以免人為地?fù)p壞眼球結(jié)構(gòu)。若須行火棉膠切片，而本單位無(wú)條件時(shí)，可送到有關(guān)單位檢查。27、軟組織腫瘤標(biāo)本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無(wú)包膜，完整否，硬度，切面有無(wú)出血、壞死、囊性變等，與周圍組織的關(guān)系，切面暴露最大面，必要時(shí)多作幾個(gè)平行切面。取材：腫瘤，周圍組織，切端組織。28、其它標(biāo)本：依上述原則檢查及取材，如標(biāo)本有特殊情況，則依其特點(diǎn)處理。2第二節(jié)尸體解剖的受理和規(guī)則一、中華學(xué)會(huì)尸檢受理規(guī)則1、必須遵照國(guó)家有關(guān)規(guī)定受理尸檢；2、受理尸檢范圍包括普通病理尸檢；涉及醫(yī)、患爭(zhēng)議的尸檢（由衛(wèi)

23、生行政主管部門指定的尸檢機(jī)構(gòu)實(shí)施）。3、受理尸檢部門應(yīng)是具備獨(dú)立尸檢能力的醫(yī)院病理科；醫(yī)學(xué)院校的病理學(xué)教研室；經(jīng)醫(yī)政部門注冊(cè)的病理學(xué)診斷中心。4、主持尸檢（主檢）人員應(yīng)是接受過(guò)尸檢訓(xùn)練、具有中級(jí)以上專業(yè)職稱的病理學(xué)醫(yī)師或病理學(xué)教師，必要時(shí)，邀請(qǐng)法醫(yī)參與尸檢。5、申請(qǐng)或委托尸檢方，包括有關(guān)醫(yī)院；衛(wèi)生行政部門；司法機(jī)關(guān)；死者的親屬或代理人；被受理尸檢方認(rèn)可的其他申請(qǐng)或委托方。6、申請(qǐng)或委托尸檢方必須向受理尸檢方遞交有關(guān)資料。（1）死者的死亡證明。（2）有申請(qǐng)或委托主當(dāng)事人簽名、負(fù)責(zé)人簽名和加蓋委托單位公章的尸檢申請(qǐng)書(shū)委托書(shū)。（3）逐項(xiàng)認(rèn)真填寫(xiě)的尸檢申請(qǐng)書(shū)（包括死者的臨床資料要點(diǎn)和其他需要說(shuō)明的情況

24、）。7、互者親屬或代理人簽署說(shuō)明尸檢有關(guān)事項(xiàng)的死者親屬或代理人委托尸檢知情同意書(shū)（由受理尸檢方制定），并確認(rèn)以下事項(xiàng)。（1）同意有關(guān)受理尸檢機(jī)構(gòu)對(duì)死者進(jìn)行尸檢。（2）授權(quán)主持尸檢人員根據(jù)實(shí)際需要確定尸檢的術(shù)式、范圍、臟器或組織的取留及其處理方式。（3）主持尸檢人員負(fù)責(zé)遺傳尸檢后的體表切口縫合，不參與尸檢后遺體的其它安置事項(xiàng)。（4）明確新生兒和圍生期胎兒尸檢后的尸體處理方法。（5）同意對(duì)尸檢過(guò)程進(jìn)行必要的攝影、錄像，并確認(rèn)是否同意教學(xué)示教。（6）尸檢病理學(xué)診斷報(bào)告書(shū)可提供死者所患的主要疾病和死因；難以做出明確結(jié)論時(shí)，可僅提交病理描述性尸檢報(bào)告。（7）尸檢病理學(xué)診斷報(bào)告書(shū)發(fā)送給委托尸檢方。（8）下

25、列情況的尸檢可不受理。（1）委托尸檢手續(xù)不完備者（包括未按規(guī)則交納尸檢費(fèi)用者）。（2）拒簽死者親屬或代理人委托尸檢知情同意書(shū)者包括對(duì)于尸檢的術(shù)式、范圍、臟器或組織的取留及其處理方式等持有異議，從而影響尸檢實(shí)施和尸檢結(jié)論形成者。（3）委托尸檢方與受理尸檢方就涉及尸檢的某些重要問(wèn)題未能達(dá)到協(xié)議者。（4）死者死亡超過(guò)48h未經(jīng)冷凍或冷凍超過(guò)7d者。（5）疑因或確因烈性傳染病死亡的病例，尸檢方不具備相應(yīng)尸檢設(shè)施條件者。（6）因其他情況不能受理者3。二、尸體解剖須知一般尸體解剖的病例由醫(yī)生填寫(xiě)正規(guī)的尸體解剖申請(qǐng)單，并由家屬簽名同意解剖。醫(yī)教部加蓋同意解剖公章。醫(yī)療糾紛病例，必須有醫(yī)療單位和家屬要求的尸體

26、解剖委托書(shū)，委托書(shū)需簽名或加蓋公章。醫(yī)療糾紛病例，必須經(jīng)醫(yī)教部同意并辦妥一切必要的手續(xù)，如尸體處理，按規(guī)定交費(fèi)。必須提供詳細(xì)的病歷材料。特殊情況去外單位、外地尸檢時(shí)需由委托單位和個(gè)人支付交通、解剖人員過(guò)時(shí)餐費(fèi)用。三、尸體解剖的一般常規(guī)參加尸檢的一切人員，都應(yīng)態(tài)度嚴(yán)肅，保持尸體清潔，頭部及外陰部須用紗布遮蓋，參觀者必須嚴(yán)守尸檢室規(guī)則，未經(jīng)許可，不得隨意取用尸檢器材及標(biāo)本，在未得出正確結(jié)論前，對(duì)尸檢所見(jiàn)不得隨意外傳。尸檢時(shí)剖檢者應(yīng)戴手套、口罩，著隔離衣及橡皮圍裙等。鋸骨時(shí)應(yīng)增戴紗手套。尸檢過(guò)程中應(yīng)注意個(gè)人保護(hù)，手套被刺破應(yīng)及時(shí)更換，皮膚被刺破應(yīng)即時(shí)行創(chuàng)口清洗消毒處理。操作時(shí)應(yīng)注意保持清潔，手套、刀

27、剪、器械及尸體表面有血染時(shí)，應(yīng)隨退即洗凈，切勿將污水濺起或?yàn)⒂诘厣?。尸體檢時(shí)所見(jiàn)由尸檢室技術(shù)人員或指定工作人員，按剖檢者口述填寫(xiě)臨時(shí)記錄單，必要時(shí)攝影記錄，做為書(shū)寫(xiě)尸檢記錄的基礎(chǔ)。一般尸檢的程序可按體表，體腔（腹腔，胸腔）、心包腔，各內(nèi)臟器官（胸腔器官、頸部器官、腹部器官、盆腔器官）及神經(jīng)系統(tǒng)的順序，進(jìn)行檢查，根據(jù)需要，可更動(dòng)剖栓程序。必要時(shí)，采取心血，其它體液，分泌物或器官組織作細(xì)菌培養(yǎng)。病毒性腦炎或疑有病毒性腦炎的病例，需采取腦組織上作病毒分離者，須在死后3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行剖檢，首先剖檢腦部。采取細(xì)菌培養(yǎng)或病毒分離標(biāo)本的部位，應(yīng)先消毒以免污染。須采取電鏡標(biāo)本者，按有關(guān)操作進(jìn)行。中毒或疑有中毒的病

28、例，或猝死不能明確診斷的病例，必要時(shí)應(yīng)保留足量的胃內(nèi)容物、糞、屎、心血、胃、肝，腎、心或腦組織送作毒物化學(xué)檢查。新生兒剖檢時(shí)，應(yīng)注意肺臟曾否呼吸，發(fā)現(xiàn)心、血管畸形時(shí)，應(yīng)將心與肺一并取出，仔細(xì)檢查心與肺循環(huán)的關(guān)系。有顱內(nèi)出血時(shí)，應(yīng)檢查大腦鐮及小腦鐮有無(wú)撕裂出血。注意檢查臍帶，必要時(shí)做細(xì)菌培養(yǎng)。與手術(shù)有關(guān)死亡病例的尸檢，須有外科醫(yī)生到場(chǎng)，其中至少要有一名參加該手術(shù)的醫(yī)生，以便報(bào)告病史、手術(shù)經(jīng)過(guò)、術(shù)后情況、可能存在的問(wèn)題及提出對(duì)尸檢的要求。尸檢時(shí)切口最好不經(jīng)手術(shù)切口，對(duì)創(chuàng)口內(nèi)外，手術(shù)部縫合及周圍情況應(yīng)仔細(xì)觀察，必要時(shí)攝影記錄，若一時(shí)在原位不能弄清須解決的有關(guān)問(wèn)題，則連同周圍組織一并切下，以便仔細(xì)剖析

29、。各器官檢查，應(yīng)托觀察表面性狀，（形狀，色澤，硬度），再檢查局部病變的特點(diǎn)，最后切開(kāi)檢查。剖開(kāi)臟器時(shí)，應(yīng)一刀切開(kāi)。注意觀察切面情況，勿立即用水沖洗。剖開(kāi)的一般原則：a，顯露器官的最大面積，一般從長(zhǎng)軸剖開(kāi)；b，將器官內(nèi)導(dǎo)管一齊切開(kāi)，顯露其分布及關(guān)系。若發(fā)現(xiàn)器官內(nèi)有嚴(yán)重結(jié)核感染，如肺，腎，腸等，應(yīng)將整個(gè)器官小心取出立即放入固定液中，同時(shí)用固定液注入器官的血管或?qū)Ч軆?nèi)，待整個(gè)器官完全固定后，才切開(kāi)檢查。尸檢時(shí)應(yīng)盡少破壞尸體的外形，檢查完畢后，應(yīng)吸去體腔內(nèi)的血水，凡不需保留的器官，均應(yīng)放回體腔內(nèi)，并應(yīng)以木屑或其它吸水物質(zhì)填塞，逢合切口?？p合時(shí)要盡量注意整副尸體外形，將體表洗凈擦干，包裹或穿著妥善后放入

30、尸箱內(nèi)。尸檢時(shí)如發(fā)現(xiàn)法定傳染病，應(yīng)在確診后及時(shí)報(bào)告衛(wèi)勤領(lǐng)導(dǎo)機(jī)關(guān)，必要時(shí)報(bào)告當(dāng)?shù)匦l(wèi)生防疫機(jī)構(gòu)。尸檢時(shí)應(yīng)按傳染病隔離消毒常規(guī)執(zhí)行。烈性傳染病尸檢時(shí)尸檢者、助手及參加人員（非尸檢工作人員不得參觀），都應(yīng)穿隔離衣，尸檢污水須經(jīng)消毒后才能排出。尸檢服裝，場(chǎng)所及各種污染用品均須用漂白粉液，過(guò)氧乙酸，甲酚皂溶液或福爾馬林蒸氣等徹底消毒，器械用高壓蒸氣滅菌事用碳酸氫鈉水煮沸一小時(shí)以上，尸體應(yīng)火葬。留做檢查的標(biāo)本應(yīng)徹底固定，然后檢查。尸檢時(shí)用作細(xì)菌培養(yǎng)及其它各種檢驗(yàn)標(biāo)本均須附有檢驗(yàn)申請(qǐng)單一并送檢驗(yàn)科，檢驗(yàn)后將報(bào)告單交回病理科，由尸檢者粘貼或抄錄于該尸檢報(bào)告中。尸檢完畢后，各種器械、尸檢臺(tái)、手套、隔離衣等，應(yīng)及時(shí)

31、清洗消毒。尸檢完畢，主檢人應(yīng)向臨床醫(yī)生做尸休的簡(jiǎn)短小結(jié)，并須在24小時(shí)內(nèi)寫(xiě)出大體檢查記錄，三日內(nèi)做出初步病理診斷，送交有關(guān)臨床科室。四，一般尸體解剖的主要步驟與要求（一）體表檢查稱體重，量體長(zhǎng)，觀察發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)狀況，檢查體表有無(wú)黃疸，發(fā)疳，出血點(diǎn)，疤痕，創(chuàng)口等，及其部位，大小；眼、耳、鼻、口腔等有無(wú)潰瘍、分泌物或液體流出，外生殖器有病變，淺表淋巴結(jié)腫大否；有無(wú)尸冷、僵、腐敗現(xiàn)象。（二）體腔檢查胸、腹壁皮膚切開(kāi)及剝離：根據(jù)情況，選擇Y形、T形或直線切口切開(kāi)皮膚。切開(kāi)腹膜時(shí)，先切一小孔，插入兩指，再?gòu)膬芍钢g剪開(kāi)，以免劃破內(nèi)臟。剝離胸壁皮膚時(shí)，應(yīng)注意將胸肌一并剝離，但勿損及肋間肌。腹腔檢查：檢查腹腔

32、內(nèi)有無(wú)積液和積氣，腹膜情況，各器官的位置。與關(guān)系，有無(wú)粘連，肝脾腫大否，其邊緣在鎖骨中線肋緣下及劍突下幾厘米，檢查左右橫膈的高度。（三）胸腔檢查必要時(shí)在胸腔未切開(kāi)前檢查有無(wú)氣胸。可有注射器吸水后，在第一肋間處自胸壁刺入，觀察有無(wú)氣體自水面下上升。在肋骨軟骨聯(lián)接線內(nèi)側(cè)約0.5cm處，將第二肋骨到肋弓的軟骨切斷，緊沿胸骨后壁將橫及縱隔割離，注意勿損及心包及大血管，然后檢查胸腔有無(wú)積液，其量及性質(zhì)，必要時(shí)涂片檢查與細(xì)菌培養(yǎng)。切斷第一肋骨，分離胸鎖關(guān)節(jié)，將胸骨及肋骨取下，觀察各器官的位置，兩肺表面情況，胸腺是否已經(jīng)脂肪化。鋸開(kāi)胸骨，看骨髓造血情況。自心尖部向上，作人形剪開(kāi)心包，檢查腔內(nèi)液量，心包膜內(nèi)壁

33、情況，必要時(shí)取心血作細(xì)菌培養(yǎng)。疑有空氣體栓塞時(shí)，將心包剪開(kāi)一小口，用鑷子拉緊切口兩側(cè)心包膜，心包腔內(nèi)注滿水，然后，在水上剪開(kāi)右心房及肺動(dòng)脈，觀察有無(wú)氣泡逸出，或者先結(jié)扎進(jìn)出心臟的大血管，取出心臟，淹沒(méi)于水下剪開(kāi)右心，觀察有無(wú)氣泡逸出。（四）各臟器的取出 各器官取出前，應(yīng)仔細(xì)檢查周圍情況及與其他器官的關(guān)系，檢查有困難時(shí)，一時(shí)不能明確者，可與其它器官一并取出，然后再仔細(xì)檢查。檢查各器官前，應(yīng)稱其重量，量大小。心臟的取出與檢查，在體內(nèi)剖開(kāi)右心，檢查肺動(dòng)脈有無(wú)栓塞后，將心臟提起，從根部或心包膜內(nèi)壁分別剪斷上、下腔靜脈，（于距瓣膜2cm處）肺靜脈和主動(dòng)脈（于距瓣膜5cm處），取出心臟，（若有心、血管畸形

34、，則應(yīng)將心臟連同肺臟一并取出）。檢查心臟增大否，外膜光滑度，有無(wú)滲出物等，心臟按血流方向剖開(kāi)，測(cè)量各瓣膜的周徑及左右心室的厚度。 A：右心剖開(kāi)法：第一步，用刀或剪將右心從上、 下靜脈入口處直線剖開(kāi)，如欲避免破壞竇房結(jié)，從下腔靜脈向上，剖至房室間溝上1cm處，向右心耳剪開(kāi)，保持上腔靜脈口完整，上腔靜脈至少保留1cm。第二步，從此線中點(diǎn)沿心臟右緣剖至心尖部，檢查三尖瓣，并用手指檢查動(dòng)脈有無(wú)血栓或狹窄。第三步，從心尖部沿心室中隔剖至肺動(dòng)脈，檢查肺動(dòng)脈瓣。 B：左心剖開(kāi)法：第一步，用刀或剪將左心房從左、右靜脈入口之間作直線剖開(kāi)，以手指檢查二尖瓣是否狹窄。第二步，從此線的左端沿心臟左緣剖開(kāi)至心尖剖。第三

35、步，從心尖部沿心室中隔，避開(kāi)肺動(dòng)脈剖開(kāi)肺動(dòng)脈剖開(kāi)主動(dòng)脈，檢查二尖瓣與主動(dòng)脈瓣。剖開(kāi)有瓣膜病變的心臟時(shí)，應(yīng)注意避免破壞有病變的瓣膜。心臟剖開(kāi)后，檢查心肌厚度、硬度、色澤、心內(nèi)膜光滑度，瓣膜周圍有無(wú)增厚，及贅生物，有無(wú)狹窄或關(guān)閉不全，檢查冠狀動(dòng)脈開(kāi)口情況。肺臟的取出：可由肺根部將主支氣管和血管切斷取出，或與頸部器官一并取出。 如兩層胸膜間有粘連，需細(xì)心分離，勿損及肺，如粘連牢固，可連同胸膜壁層一并剝離，取出肺臟。取出后檢查其表面情況。切開(kāi)檢查肺切面的改變，有無(wú)病灶、氣腫、萎陷等，肺門淋巴結(jié)腫大否，切面情況。頸部器官的取出：A，充分分離頸部皮膚與軟組織，用長(zhǎng)刀刺入割斷舌下系帶，緊沿下頜骨內(nèi)面向左、右

36、盡量地將下頜與舌間的軟組織分離。B，將舌拉下，自硬腭后緣割離軟腭，注意應(yīng)將兩側(cè)扁桃體完全取下。C，將舌、咽、喉頭、氣管、食管、肺拉下于橫膈上將食管、下腔靜脈及主動(dòng)脈切斷，連同胸腔器官一并取出。腹腔及盆腔器官的取出：一般先將脾臟摘出，繼之取出小腸、腎上腺、肝、膽囊、胃、十二指腸、胰，最后取出腎及盆腔器官。 = 1 * GB3 將脾臟提至腹腔前方，割斷脾門部血管，取出脾臟。檢查其大小，重量，硬度，表面色澤。切面有無(wú)外翻；有無(wú)糊狀物刮下，脾門血管及脾小體、脾小梁的情況等。 = 2 * GB3 小腸與大腸的取出前， 應(yīng)檢查腸系膜 淋巴結(jié)及血管，找出空腸的起端，切斷，自腸系膜附著處將腸割下，直至直腸處將

37、其切斷取出，腸的斷端應(yīng)鉗緊或結(jié)扎，以免糞便污染腹腔。待其他器官檢查完畢后再檢查腸。先量其長(zhǎng)度，在腸系膜附著處沿縱軸剪開(kāi)腸腔，檢查粘膜有無(wú)病變，腔內(nèi)有無(wú)寄生蟲(chóng)等，必要時(shí)可保持腸與腸系膜的關(guān)系，并將其一并取出。 = 3 * GB3 十二指腸在原位從前面剪開(kāi)，用手?jǐn)D壓膽囊：看膽道通暢否。沿胃大彎剪開(kāi)胃，檢查粘膜病變，將胃及十二指腸從后壁分離，與胰臟一并取出，在檢查胰臟前，注意觀察脾靜脈有何變化。檢察胰臟重量，大小，硬度，作多橫切面，檢查切面情況。 = 4 * GB3 小心分離腎上腺周圍組織，取出腎上腺，分離右側(cè)腎上腺時(shí)，將肝向上方推，注意分離與皮膚上腺相連的肝組織，腎上腺取出后，作多人橫切面，檢察皮

38、質(zhì)與髓質(zhì)的特征，有無(wú)出血等。 = 5 * GB3 取出肝與膽囊前，應(yīng)仔細(xì)檢查膽管、門靜脈、肝靜脈，然后剪斷肝門的膽管及血管，分離鐮狀韌帶，將門靜脈及肝背部部一段下腔靜脈與肝一并取出。檢查肝的大小，重量，硬度，色澤，注意檢查肝靜脈及腔靜脈，切面外翻否，小葉結(jié)構(gòu)清楚否及有無(wú)其它病變。 = 6 * GB3 分離腎周圍脂肪結(jié)締組織，將腎提出，凸面向上剖開(kāi)，注意包膜剝離要難否，檢查表面的性狀，切面皮質(zhì)及髓質(zhì)紋理是否清楚，腎盂粘膜有無(wú)病變。然后連輸尿管一起取出腎臟。 = 7 * GB3 盆腔內(nèi)器官的取出：先分離腹膜及周圍組織，再取盆腔器官，男性可將直腸、膀胱一并取出，結(jié)腸斷端應(yīng)結(jié)扎或縫合。（五）腦與脊髓的

39、取出：從兩耳后經(jīng)頭頂部作一切口，將刀插入切口，切開(kāi)頭皮，向前后剝離，劃好鋸線。此線自前額中心處向左右兩側(cè)延伸，經(jīng)耳廓上緣，再向后向上延至枕外隆突近處，按鋸線切斷兩側(cè)顳肌。鋸時(shí)注意鋸到抵抗力減少時(shí)即停止，然后用鑿鑿開(kāi)，注意勿損及硬腦及腦組織。取腦時(shí)，將兩側(cè)額葉向上，向后提起，依次切斷視神經(jīng)，內(nèi)頸動(dòng)脈，漏斗，動(dòng)眼神經(jīng)，再剪開(kāi)小腦天幕兩側(cè)，用左手將腦手托起，切斷其余神經(jīng)，然后用脊髓刀盡量切取較長(zhǎng)的一段脊髓與腦一起取出，腦一般需固定5-10天后再切開(kāi)檢查，腦的一般切法如下：A，經(jīng)四疊體上緣和大腦腳上方斜向切斷中腦，分離腦干與大腦。B在灰結(jié)節(jié)部將大腦作冠狀切開(kāi)，檢查各基底神經(jīng)核，外囊，島葉，下視丘，側(cè)腦

40、室，第三腦室，然后向前向后每隔0.5-2cm作多個(gè)切面檢查。C向小腦蚓部作坐橫切面，露出第四腦室底，腦橋經(jīng)面丘，延髓經(jīng)橄欖核中部作橫切面檢查。D如為腦膜炎，及腦室擴(kuò)張等病例，可經(jīng)額極及枕極的聯(lián)線稍高處作水平切面檢查。用骨鑿鑿去鞍背和兩柵床突，仔細(xì)取出腦垂體。必要時(shí)鑿開(kāi)中耳或?qū)⒅卸〕?。脊髓的取出法，中線切開(kāi)背部皮膚，及棘突兩側(cè)鋸開(kāi)，椎板，取下棘突及椎板。剪斷硬脊膜外脊神經(jīng)根。切斷馬尾，輕輕將脊髓連硬脊膜 一并取出，取出時(shí)，應(yīng)避免牽拉擠壓。也可人前面鋸開(kāi)椎體，取出脊髓。（六）骨髓檢查：一般病例取小片胸骨及椎骨，觀察共骨髓情況，血液病病例取一側(cè)股骨縱行鋸開(kāi)，觀察骨髓改變情況，股骨取法如下：先切斷髕

41、下韌帶，然后沿膝外側(cè)、大腿外側(cè)直到股骨大粗隆切開(kāi)皮膚、肌肉，并分離出股骨，離斷髖關(guān)及膝關(guān)節(jié)，取出股骨，填入長(zhǎng)短相同的木棒，整復(fù)外形。采取細(xì)菌培養(yǎng)的方法心血培養(yǎng)標(biāo)本：用無(wú)菌鑷子提起右心耳，在下腔靜脈入口處的上方進(jìn)行燒灼消毒，（用一有柄銅片在酒精燈上燒紅，燒灼器官表面，面積約2*2cm）.用無(wú)菌吸管或注射器從消毒部位插入，順下腔靜脈入口推進(jìn)，取血液2-3ml在無(wú)菌操作下，將吸取之血液立即注入無(wú)菌的肉湯培養(yǎng)基，或有玻璃珠的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，立即洗凈吸管或注射器，以免凝固，若在右心取不到血液，可從下腔靜脈吸取。腔（胸腔、腹腔）內(nèi)滲出液，心包腔內(nèi)積液，必要時(shí)作細(xì)菌培養(yǎng)，采取液體時(shí)應(yīng)盡量避免污染。采取腦脊液培養(yǎng)時(shí)

42、，于尸檢前用無(wú)菌手術(shù)，在第二及第三腰椎間隙作穿刺，取腦脊液2-3ml,置于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。腸內(nèi)容物培養(yǎng)：在回腸末端及乙狀結(jié)腸下端，或病變明顯處的漿膜面經(jīng)燒灼滅菌后剪開(kāi)，用棉花拭子插入腸腔內(nèi)，在粘膜面擦取粘液、滲出物粘膜，放入無(wú)菌試管或培養(yǎng)基內(nèi)送檢。臟器細(xì)菌培養(yǎng)：臟器表面灼燒滅菌，切取不小于2*2*1.5cm的組織塊，裝無(wú)菌容器內(nèi)送檢。腦組織作病毒分離：用無(wú)菌手術(shù)取大腦皮質(zhì)，中腦，海馬，腦橋組織塊，每塊不小于2*2*1.5cm，以冰瓶保藏迅速送檢。路途遙遠(yuǎn)者，可將檢材放入無(wú)菌甘油瓶?jī)?nèi)，在低溫下送檢4。五，尸檢材料的取材和固定尸體解剖的材料取材，有兩種方法：尸體解剖的內(nèi)臟，當(dāng)處理完后，可選取其中有

43、病變的部分取材（粗取），然后存放于固定液中固定，當(dāng)完全固定后，再行修切成適合于制片的組織塊（細(xì)?。?。一般厚度不超過(guò)3mm.將所有的內(nèi)臟，經(jīng)逐一處理后，全部固定起來(lái)，待其完全固定后，再行取材。六，科學(xué)研究材料的取材： 這方面材料的來(lái)源是各種研究單位，根據(jù)自己課題的需要，設(shè)計(jì)出適合于本課題研究所需的模型，利用不同的動(dòng)物，如小鼠，大鼠，兔，貓，豬，狗，雞，牛，猴等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，然后取其全臟器或部分組織，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)于此類標(biāo)本，情況特殊，應(yīng)認(rèn)真給予對(duì)待。動(dòng)物標(biāo)本全部臟器的每個(gè)臟器取一塊，對(duì)于部分臟器的根據(jù)需要取材。第三節(jié) 常規(guī)病理標(biāo)本的制作程序 常規(guī)組織固定在組織病理學(xué)中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標(biāo)

44、本的保存，都必須進(jìn)行及時(shí)的適當(dāng)?shù)暮陀行У墓潭ā＝M織只有經(jīng)過(guò)固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個(gè)醫(yī)務(wù)工作人員都能容易地把組織固定起來(lái)，但是，要清楚了解固定的過(guò)程及其定義是一件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。（一）、固定的作用 組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡(jiǎn)單的定義是，保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)；防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴(kuò)散至組織間質(zhì)；以保持組

45、織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時(shí)，不產(chǎn)生過(guò)深的背景，影響對(duì)陽(yáng)性物的判斷。（二）固定的目的能防止細(xì)菌的腐蝕和組織的自溶。細(xì)菌無(wú)處不存在，它們隨時(shí)都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都 由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細(xì)菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們?？膳龅竭@樣的問(wèn)題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會(huì)變質(zhì)，這是為什么呢？除了細(xì)菌參與外，其本身也是很重要的。因?yàn)榻M織離體后，供應(yīng)這此組織的血液隨之消失，細(xì)胞缺氧，細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體

46、酶，日常生活中常碰到的肉變質(zhì)，就是細(xì)菌污染加組織自溶的結(jié)果。保存細(xì)胞固有的物質(zhì)，能凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)或組織液，糖元等，使細(xì)胞或組織基本上保持與生活時(shí)的物質(zhì)一樣。細(xì)胞的固有物質(zhì)，即細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過(guò)氧體，細(xì)胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質(zhì)，如果不將其及時(shí)固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應(yīng)特別小心。使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒(méi)有固定時(shí)就取材，效果就很差，不是取材不規(guī)整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開(kāi)，因此，要取得規(guī)整標(biāo)致的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。對(duì)某些具有傳染

47、性的標(biāo)本，能防止疾病的擴(kuò)散。病理標(biāo)本、種類繁多，成份復(fù)雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結(jié)核、肝炎、麻風(fēng)、性病等等。對(duì)于此類標(biāo)本，應(yīng)進(jìn)行徹底的固定后，再行取材，如結(jié)核球，固定時(shí)間應(yīng)在3-5天。保存好大體標(biāo)本。對(duì)于有教學(xué)任務(wù)的醫(yī)院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價(jià)值的大體標(biāo)本，有些大體標(biāo)本，是很難得到的。因此要求在平時(shí)就要留心觀察，小心處理。遇到有教學(xué)價(jià)值的罕見(jiàn)的典型的標(biāo)本，就必須及時(shí)固定，認(rèn)真給予對(duì)待。可增強(qiáng)染色的作用。組織經(jīng)過(guò)及時(shí)的固定，最終可見(jiàn)到切片有鮮艷的染色，而些時(shí)如果有一批未經(jīng)及時(shí)固定的組織，將看到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定可以增強(qiáng)染色的作

48、用。（三）固定的注意事項(xiàng)組織固定越新鮮越好。組織一經(jīng)離體，就能及時(shí)地固定，這是最好的。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對(duì)于其它達(dá)不到些要求是越快越好。組織固定，組織塊不宜過(guò)大。凡是需要固定的組織，都不應(yīng)該太大太厚，這是因?yàn)樗械墓潭ㄒ捍┩噶Σ粔驈?qiáng)，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的組織，不經(jīng)處理就進(jìn)行固定，那么待固定液進(jìn)入至中間對(duì)可能這些組織早就發(fā)生自溶了。因此，對(duì)于較大的組織，必須先進(jìn)行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應(yīng)將其剪開(kāi)，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開(kāi)，沒(méi)固定時(shí)

49、，難以取得最佳制片材料，對(duì)于產(chǎn)酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。對(duì)不同類型的組織應(yīng)適當(dāng)合理地選擇固定液。有的固定液對(duì)于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學(xué)試劑，有液體和固體之分，一般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用于實(shí)驗(yàn)研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復(fù)雜，對(duì)組織的作用不盡相同，英國(guó)著名的組織化學(xué)專家Pearse指出：對(duì)于每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來(lái)說(shuō)，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學(xué)研究準(zhǔn)備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分的反應(yīng)基團(tuán)的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止?jié)B透損傷和

50、妝縮，以達(dá)到在各級(jí)可見(jiàn)度的水平皆無(wú)形態(tài)變化；要求組織所有的成分能保留于原位。他認(rèn)為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于達(dá)到上述要求。4 為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來(lái)，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認(rèn)真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對(duì)組織有明顯的皺縮，硬化作用，平常它是決不會(huì)被用來(lái)作固定液的，用它不但太浪費(fèi)，造價(jià)太高，而且也使切片較為困難，但是，對(duì)于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細(xì)胞的培養(yǎng)等。最好的固定液還是丙酮。因?yàn)槿绻褂酶栺R林固定液、石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會(huì)消失掉，又如醋酸，它對(duì)膠原纖維

51、等有膨脹的作用。由于各種固定液對(duì)不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據(jù)各種固定液的優(yōu)缺點(diǎn)，配制出許多混合液的方法來(lái)，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對(duì)組織固定很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對(duì)固定脫水盒為銅質(zhì)的組織時(shí)，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對(duì)抗原的損害，對(duì)于免疫組織化學(xué)的顯示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：可呈弱陽(yáng)性乃至陰性。由此可見(jiàn)，固定液的選擇正確與否決定著對(duì)某些病例的免疫組化標(biāo)記的成敗關(guān)鍵。在我們的日常工作科研中，對(duì)于組織的固定，應(yīng)有針對(duì)性的選擇，方能獲得滿意的

52、效果。組織固定，時(shí)間不宜太短，也不宜太長(zhǎng)。時(shí)間太短，就不能很多的固定組織，因?yàn)椴还芙M織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時(shí)間，時(shí)間太短，就會(huì)影響組織固定的效果，對(duì)以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時(shí)間太長(zhǎng)，也不好。組織長(zhǎng)時(shí)間的固定，福爾馬林會(huì)產(chǎn)生一種酸，影響核的染色。對(duì)于固定很長(zhǎng)時(shí)間的陳列性標(biāo)本制片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長(zhǎng)時(shí)間的固定往往會(huì)出現(xiàn)福爾馬林色素，尤其是造血器官的標(biāo)本，更應(yīng)注意。固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可降低抗原的活性。固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認(rèn)為，固定液的量與組織的比應(yīng)是20：1，這個(gè)要求對(duì)于小組織來(lái)說(shuō)是完全可以達(dá)

53、到的，但對(duì)于大標(biāo)本來(lái)說(shuō)，則是一件非常困難的事情。因?yàn)閷?duì)于大醫(yī)院來(lái)說(shuō)，每天都有幾十上百例的標(biāo)本，小如大頭針大小，大的達(dá)幾十斤的腫瘤，對(duì)于這樣大的標(biāo)本，按20：1的比例來(lái)做，顯然是不可能的事，既要做到組織能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對(duì)于大的標(biāo)本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因?yàn)樵诂F(xiàn)實(shí)111當(dāng)中，大的標(biāo)本往往露出容器一大半，因此對(duì)于這種情況，應(yīng)取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風(fēng)干，影響制片效果。特殊病例或特殊物質(zhì)應(yīng)選擇特殊的固定液。一般的病例標(biāo)本，如沒(méi)特殊的要求，都可以應(yīng)用甲醛配成的各種固定液來(lái)固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時(shí)，應(yīng)用上述的的

54、固定液就不行了，必須采用丙酮來(lái)固定，顯示糖元，可選擇無(wú)水酒精或丙酮來(lái)固定組織。固定劑是一種化學(xué)語(yǔ)試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對(duì)每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來(lái)說(shuō)，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學(xué)研究中的準(zhǔn)備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分反應(yīng)基團(tuán)的效用。組織的第二次固定或后固定。在一般的常規(guī)病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達(dá)到目的，獲得滿意的結(jié)果。但是，對(duì)于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據(jù)不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎

55、性橫紋肌肉瘤，由于腫瘤細(xì)胞發(fā)育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進(jìn)行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進(jìn)行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來(lái)。否則，效果不佳。另外，電鏡固定的標(biāo)本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。（四）固定液的使用當(dāng)前，應(yīng)用于固定試劑的種類較多，它們對(duì)于固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們?cè)谑褂脮r(shí)應(yīng)該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據(jù)Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。類：蛋白

56、變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。類：其他，氯化汞，苦味酸等。5上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術(shù)方面中用到。下面根據(jù)使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。（十）甲醛甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛3740%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為1.12。它也可以穩(wěn)定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，這種在組織化學(xué)方法當(dāng)中，能使酶鈍化，影響其反應(yīng)。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標(biāo)本或長(zhǎng)時(shí)間固定的組織，由于酸的作用，往往細(xì)胞核染色欠佳。甲醛有效固定作用的要點(diǎn)是，在蛋白質(zhì)末端基團(tuán)之間形成交聯(lián)

57、鏈。參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團(tuán)，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)。甲醛與組織蛋白類的反應(yīng)是多樣和復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯(lián)的功能，也是它的缺點(diǎn)，在用甲醛固定過(guò)的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗原修復(fù)法來(lái)使蛋白與甲醛交聯(lián)的醛鍵斷裂開(kāi)，以利于后來(lái)的染色。甲醛可配成簡(jiǎn)單的或混合的固定液，最簡(jiǎn)單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林.當(dāng)然,現(xiàn)在使用的固定液要求較為嚴(yán)格些,最好是使用緩沖福爾馬林固定液,這將有利于后來(lái)的免疫組化染色的需要.從組織學(xué)的觀點(diǎn)來(lái)說(shuō),甲醛是一種良

58、好的固定劑,它有很多的優(yōu)點(diǎn):組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.固定均勻,穿透力強(qiáng).能使組織硬化,增進(jìn)組織彈性,有利于切片.能保存脂肪及脂類物質(zhì).成本較低.雖然甲醛有上述的優(yōu)點(diǎn),但這都是相對(duì)而言,任何物質(zhì)都不可能十全十美的,它也有許多缺點(diǎn):雜質(zhì)含量較多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應(yīng).含有微量甲酸,導(dǎo)致固定液酸變,影響染色.可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.不能固定尿酸和糖類物質(zhì).容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.可長(zhǎng)期存在于固定過(guò)的組織上.有人做過(guò)實(shí)驗(yàn),組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,但需要經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去.可見(jiàn)存在于組織上的

59、甲醛是不可能除去的.因?yàn)榕R床活檢不可能有這么長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)沖洗組織.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會(huì)給各種染色造成影響,甚至導(dǎo)致失敗.應(yīng)用甲醛,可以配成許多種固定液:10%緩沖福爾馬林固定液甲醛 100ml蒸餾水 900mlNaH2PO4H2O 4gNa2HPO4 (無(wú)水) 6.5g該固定液是當(dāng)今流行的固定液,因它對(duì)組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫娴难芯慷驾^好,尤其是對(duì)免疫組化的染色.2、10%福爾馬林固定液甲醛100 ml自來(lái)水900ml這是一種最簡(jiǎn)單的固定液，適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的

60、單位都不要求使用這種固定液。3、10%福爾馬林鹽固定液甲醛100 ml自來(lái)水900mlNacl9克先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡(jiǎn)單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進(jìn)和改善染色，增加染色的強(qiáng)度。4、Bouin氏固定液苦味酸飽和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml該固定液中的冰醋酸，對(duì)膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平。5醛糖鈣固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸鈣20g蒸鎦水90ml先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研