DB3120102012罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

1、DBt海市地方標(biāo)準(zhǔn)DB31/20102012食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法2012-10-26實(shí)施2012-10-26發(fā)布上海市食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布DB31/20102012 I本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B為資料性附錄。DB31/20102012 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于火鍋醬料、湯料、調(diào)味油和固體類調(diào)味粉等火鍋食胡中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因、蒂巴因的測定。2原理樣品用

2、水或鹽酸溶液分散均勻、乙睛提取后，經(jīng)鹽析分層，乙睛提取液用鍵合硅固相萃取吸附劑凈化，離心，液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，罌粟堿、那可丁和蒂巴因采用外標(biāo)法定量，嗎啡和可待因采用內(nèi)標(biāo)法定量。3試劑與材料除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。1甲醇(CH3OH)：色譜純。3.2乙睛(CH3CN)：色譜純。3甲酸(HCOOH)：色譜純。3.4鹽酸(HCl)o3.5甲酸鍍(HCOONHt)o3.6氫氧化鈉(NaOH)。3.7無水硫酸鎂(MgSOj：研磨后在500C馬弗爐內(nèi)烘5h,200C時(shí)取出裝瓶，貯于干燥器中，冷卻后備用。3.8無水醋酸鈉(CHsCOONa)。

3、3.9乙二胺-N-內(nèi)基硅烷(PSA)填料：粒度4070pm。3.10C18填料:粒度4050pmo3.11鹽酸溶液(O.lmol/L)：量取鹽酸(3.4)9mL,加水至1L,搖勻備用。3.12甲酸鞍溶液(lOmmoVL)：準(zhǔn)確稱取1.26gI酸技(3.5)溶解于適量水中,定容至2L,混勻后備用。3.13甲酸甲醇溶液(0.5%):量取甲酸(3.3)lmL,置T200mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻備用。3.14氫氧化鈉溶液(1mol/L)：準(zhǔn)確稱取40g氫氧化鈉(3.6)溶解丁適量水中，定容至1L,混勻后備用。3.15鹽酸罌粟堿、嗎啡、那可丁、磷酸可待因和蒂巴因標(biāo)準(zhǔn)品：純度不少T-98

4、%o3.16內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：嗎啡-D3,可待因-D3。3.17標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/mL)：精密稱取鹽酸罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和磷酸可待因標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲酸一甲醇溶液(3.13)配制成罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因的濃度均為1.0mg/niL的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。4C避光保存，有效期三個(gè)月。3.18混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液：精密吸取濃度為l.OinginL的罌粟堿、那可丁、蒂巴因儲(chǔ)備液各1.0mL和濃度為1.0mg/mL的嗎啡、可待因儲(chǔ)備溶液各5mL于20mL容量瓶中，用乙睛(3.2)定容至刻度，搖勻，即得含罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為50pg/mL和嗎啡、可待因濃度為250g&niL的混合標(biāo)

5、準(zhǔn)胡溶液:4C避光保存，有效期三個(gè)月。3.19同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液(5.0卩gmL)：分別精密吸取內(nèi)標(biāo)物質(zhì)(3.16)適量，用甲醇(3.1)配制成嗎啡-D3,可待因-D3的濃度均為5-0卩ginL的溶液。4C避光保存，有效期三個(gè)月。3.20標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別精密吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液(3.18)和同位索內(nèi)標(biāo)工作溶液(3.19J適吊:，用乙膳(3.2)稀釋成罌粟堿、那可丁、蒂巴因濃度為l.Ong/mL、2.0ng/mL5.0ng/mL10.0ngiiiL.20.0ngmL、50.0ng/mL,嗎啡、可待因濃度為5.0ng/mL.10.0ngniL、25.0ng/mL50.0ng/mL、100

6、ng/mL.250ngiiiL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，內(nèi)標(biāo)溶液濃度均為50.0ng/mL。臨用新配。3.21甲酸乙睛溶液(0.1%)：量取甲酸(3.3)ImL,加乙睛(3.2)稀釋至1L,搖勻，過濾。3.22甲酸甲酸鞍溶液(0.1%):量取甲酸(3.3)ImL,加甲酸鞍溶液(3.12)稀釋至1L,搖勻，過濾。3.23濾膜:0.22pirn(尼龍)。24pH試紙：pH114。4儀器和設(shè)備1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：帶電噴霧離子源(ESI)。2分析天平：感量為0.00001g和O.Olg。4.3離心機(jī)：10000轉(zhuǎn)/分鐘。4.4超聲波清洗器。4.5渦旋混合器。5分析步驟1提取5.1.1火鍋醬料、湯料、調(diào)味

7、油稱取2g試樣(精確至0.01g)J-50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150pL同位素內(nèi)標(biāo)工作液,再加入5mL水，振搖使分散均勻(醬類樣品必要時(shí)可加10mL水),加入15mL乙睛(3.2),渦旋振蕩lmin,加入6g無水硫酸鎂(3.7)和1.5g無水醋酸鈉(3.8)的混合粉末(或以相當(dāng)?shù)氖惺凵陶敬?，迅速振搖，渦旋振蕩1min,以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min,取上清液待凈化。5.1.2固體類調(diào)味粉稱取2g試樣(精確至0.01g)J-50mL聚四氟乙烯具塞離心管中，加入150pL同位素內(nèi)標(biāo)工作液,再加入5mL鹽酸溶液(3.11)溶液，超聲處理30分鐘，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值呈中性，加入1

8、5mL乙睛(3.2),渦旋振蕩1mm,加入6g無水硫酸鏤(3.7)和1.5g無水醋酸鈉(3.8)的混合粉末(或以相當(dāng)?shù)氖惺凵唐反?，迅速振搖，渦旋振蕩1mm,以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5mill,取上清液待凈化。5.2凈化稱取50mg(5mg)PSA(3.9),100mg(5mg)無水硫酸鎂(3.7),100mg(5mg)C18粉末（3.10）T-2mL聚四氟乙烯具塞離心管中（或以相當(dāng)?shù)氖惺凵唐反妫?，移?.5mL上清液（5.1）至此離心管中，渦旋混合1mm，以10000轉(zhuǎn)/分鐘離心2min,移取上清液，0.22pm濾膜（3.23）過濾，取濾液待測。6測定1參考液相色譜條件a）色譜柱：BEHH

9、ILIC（粒徑1.7pm,2.1x100mm）,或相當(dāng)者：b）進(jìn)樣量：5pL；c）柱溫：40C：d）流速：0.3mLinm；e）流動(dòng)相:A相（3.21）:含01%甲酸的乙睛,B相（3.22）:含01%甲酸的lOmmoVL甲酸鞍溶液，按表1進(jìn)行梯度洗脫。表1梯度洗脫程序時(shí)間/minA相/%B+11/%0.0090100.3090101.0080202.5080203.0090106.0090106.2參考質(zhì)譜條件a）離子化方式：電噴霧電離：b）掃描方式：正離子掃描；c）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮?dú)猓菏褂们皯?yīng)調(diào)節(jié)各參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測耍求,參考條件

10、見附錄A。6.3定性測定在相同實(shí)驗(yàn)條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的某種組分色譜峰的保留時(shí)間一致，樣甜溶液的定性離子相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的定性離子相對(duì)豐度比進(jìn)彳J：比較時(shí)，相對(duì)偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣站中存在該組分。表2定性確定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%502050102010允許的相對(duì)偏差/%202530506.4定量測定 DB31/20102012在儀器最佳狀態(tài)下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，以罌粟堿、那可丁和蒂巴因的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，罌粟堿、那可丁和蒂巴因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定最：以嗎啡和可待因

11、的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，嗎啡和可待因的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)匚作曲線，內(nèi)標(biāo)法定量。在上述色譜和質(zhì)譜條件下，7種化合物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提取離子（定量）質(zhì)譜圖參見附錄B。6.5空白試驗(yàn)除不稱取樣品外，按5.1、5.2步驟進(jìn)行后測定。7分析結(jié)果的表述樣品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴的含量按下式計(jì)算：錯(cuò)誤！未找到引用源。（1）式中：X一試樣中各待測物的含量，單位為微克每克c-從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的供試站溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（pg/L）；V一樣液的提取體積，此處為15,單位為亳升（mL）；m試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8方法精密度在垂復(fù)性條件下獲得

12、的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。9方法檢出限和定量限本標(biāo)準(zhǔn)罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的檢出限分別為8卩gleg、40卩g/kg、8pg,4cg、40pg/kg.8pg/kg。定量限分別為25卩g/kg、125卩g/kg、25pg/kg、125pg/kg、25卩g/kg。10方法準(zhǔn)確度罌粟堿、那可丁和蒂巴因添加濃度范圍為25pgkg250pg/kg，嗎啡、可待因添加濃度范圍為125pg/kg1250pg/kg時(shí)，回收率為70%110%。DB31/20102012 附錄A質(zhì)譜/質(zhì)譜測定參考條件5種生物堿及2個(gè)內(nèi)標(biāo)化合物的定性離子對(duì).定量離子對(duì)、去簇電壓(DP)及碰

13、撞氣能量(CE)見表A.lo表A.17種化合物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、去簇電壓和碰撞氣能量組分名稱定性離子對(duì)(m/z)定雖離子對(duì)(m/z)去簇電壓(DP)/V碰撞氣能雖(CE)/eV鞋粟堿340.4/202.2Amr038340.4/171.1yz49嗎啡286.0/181.3286.0/181.39750286.0/165.350那可丁414.4/220.5414.4/220.59530414.4/353.334可待因300.4/215.2300.4/215.29034300.4/165.455蒂巴因312.3/58.3312.3/5&35238312.3/249.122嗎啡-D3289.

14、4/185.2289.4/185.29540289.4/165.253可待因-D3303.5/215.3303.5/215.3QA35303.5/165.2OV60DB31/20102012 附錄B7種化合物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的提取離子（定量）質(zhì)譜圖樓舉堿mz340.4/202.22.040.00.51.0152.02.52.65A3.03.54.0嗎啡m/z286.0/181.34.55.0f/min0.0OJId2.02.5303J404.35.0t/min1.81那可丁m/z414.4/220.50.00.51.01.52.02.53.03.54.04.53.0t/min2.62A可待因m/z300.4/215.20.00J1.01.52.02.5303.54.04.55.0/mm2.401蒂巴Swz312.3/58.30.00J1.01.52.02.5303.54.04.55.0/mm2.661嗎