臍血干細(xì)胞的生產(chǎn)與作用臍血干細(xì)胞的生產(chǎn)與作用生產(chǎn)生物技術(shù)及應(yīng)用

1、江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院.PAGE 4：.；PAGE 5江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)論文SNL/QR7.5.4-3臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用專業(yè) 生物技術(shù)及運(yùn)用學(xué)生姓名 江曄班級(jí) 06生物技術(shù)及運(yùn)用(1)學(xué)號(hào) 061401109指點(diǎn)教師 劉遠(yuǎn)完成日期2021年6月4日附1：成果評(píng)議學(xué)號(hào)061401109姓名江曄標(biāo)題臍血干細(xì)胞的運(yùn)用指點(diǎn)教師建議成果：評(píng)閱教師建議成果：爭(zhēng)辯小組建議成果：院爭(zhēng)辯委員會(huì)評(píng)閱意見及評(píng)定成果：爭(zhēng)辯委員會(huì)主任簽字蓋章：年月日附2：畢業(yè)設(shè)計(jì)論文義務(wù)書姓名江曄學(xué)號(hào)061401109班級(jí)06生物技術(shù)及運(yùn)用1班標(biāo)題臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用設(shè)計(jì)(論文)主要內(nèi)容臍血干細(xì)胞的分別冷凍技術(shù)與臍血干細(xì)

2、胞在各個(gè)領(lǐng)域所發(fā)揚(yáng)的作用。重點(diǎn)研討問題臍血干細(xì)胞分別冷凍的技術(shù)主要技術(shù)目的臍血經(jīng)過分別后有核細(xì)胞的回收率到達(dá)85%以上，紅細(xì)胞的去除率到達(dá)50%以上。其它要闡明的問題臍血在冷凍時(shí)防凍液的參與必需在2分鐘內(nèi)完成，且參與前必需預(yù)冷到4以下。指點(diǎn)教師意見指點(diǎn)教師簽字：年月日附3：指點(diǎn)教師意見對(duì)論文的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)發(fā)明性任務(wù)評(píng)價(jià)3.建議成果優(yōu)良中及格不及格指點(diǎn)教師簽字年月日評(píng)閱教師意見對(duì)論文的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)發(fā)明性任務(wù)評(píng)價(jià)3.建議成果優(yōu)良中及格不及格評(píng)閱教師簽字年月日附4：爭(zhēng)辯小組評(píng)議意見學(xué)號(hào)061401109姓名江曄標(biāo)題臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用

3、爭(zhēng)辯小組意見：1、對(duì)論文的評(píng)價(jià)2.建議成果等級(jí)優(yōu)良中及格不及格3.需求闡明的問題爭(zhēng)辯小組長(zhǎng)簽字年月日江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))江曄：臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用 6 I臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院 06生物技術(shù)1班 江曄摘要：本文引見了臍血干細(xì)胞消費(fèi)上的技術(shù)與臍血干細(xì)胞在醫(yī)學(xué)上的作用。從臍血干細(xì)胞的分別冷凍入手引見了這一前沿科技，從臍血干細(xì)胞在醫(yī)療方面的作用表達(dá)了臍血干細(xì)胞移植作為一種新型醫(yī)療方式的宏大效果。關(guān)鍵詞：臍血干細(xì)胞；干細(xì)胞的分別與冷凍；疾病治療；抗衰老；Application of umbilical cord blood stem cellsAbstract:

4、In this paper, the production of cord blood stem cells in umbilical cord blood stem cell technology and the role of medicine. From umbilical cord blood stem cells from frozen start to introduce the cutting-edge technology, from the umbilical cord blood stem cells in medical expressed the role of cor

5、d blood stem cell transplantation as a great new way of the effectiveness of health care.Keywords：Cord blood stem cells; disease treatment; anti-aging; stem cell isolation and frozen目錄 前言 本課題的提出1 1 定義：干細(xì)胞11.1臍血干細(xì)胞的作用1 1.2臍血干細(xì)胞的分別和冷凍22 結(jié)論4 3 討論5 3.1冷凍液對(duì)臍血的作用及危害5 3.3離心對(duì)分別的影響5 3.4程控降溫對(duì)細(xì)胞的影響5 4 干細(xì)胞的前景與展

6、望5 參考文獻(xiàn)6 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)論文設(shè)計(jì)江曄：臍血干細(xì)胞的消費(fèi)與作用 5 -干細(xì)胞是一種神奇的細(xì)胞，它可以分化成各種組織細(xì)胞，身體的各個(gè)部分全部是由干細(xì)胞分化而來的。所以干細(xì)胞可以治療很多疾病。臍帶血中的干細(xì)胞含量最高，把臍血中的干細(xì)胞分別出來放入液氮罐中冷凍可以保管最少十年，自體的還可以防止本身的免疫排斥反響。臍血干細(xì)胞的移植在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域扮演著一個(gè)萬能藥物的角色，它可以治療白血病，先天性紅斑狼瘡等罹難病癥，并且臍血干細(xì)胞還可以運(yùn)用于保健行業(yè)簡(jiǎn)單的說就是可以活化細(xì)胞延緩衰老提高人體免疫力等成效?？梢哉f干細(xì)胞在人體中的運(yùn)用到達(dá)了一個(gè)其他化學(xué)類藥物所無法企及的高度。干細(xì)胞的分別技術(shù)是其運(yùn)用

7、于各個(gè)領(lǐng)域的根底。1.定義：干細(xì)胞(stemcells,SC)是一類具有自我復(fù)制才干的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。是一種未充分分化，尚不成熟的細(xì)胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學(xué)界稱之為“萬用細(xì)胞。所以干細(xì)胞才可以治療很多罹難雜癥，發(fā)明奇觀，讓病人重獲安康。臍血干細(xì)胞：是剛出生的嬰兒的臍帶血中所含的一類干細(xì)胞，其分化程度最低，并且對(duì)移植者的免疫排斥反響低，在生才干也比成體的干細(xì)胞高很多，因此成為干細(xì)胞移植的新生寵兒。但臍血中的紅細(xì)胞太多，直接打入病人身體中會(huì)添加病人身體的負(fù)擔(dān)加重病情所以干細(xì)胞的分別就是要去除多余的紅細(xì)胞，隨著HES分別技術(shù)的誕生可以把大部分

8、的紅細(xì)胞去除才使得臍血干細(xì)胞可以運(yùn)用于臨床。臍血干細(xì)胞的根底和臨床研討1在最近的一、兩年中獲得了快速的開展,對(duì)臍血干細(xì)胞的生物學(xué)特性、采集與凍存、體外擴(kuò)增及其臨床運(yùn)用情況進(jìn)展研討有利于其更廣泛地運(yùn)用.1.1臍血干細(xì)胞的作用臍血分別后，其有核細(xì)胞的回收率可以到達(dá)85%以上，而紅細(xì)胞的含量可以降低到50%以下，經(jīng)過幾天的培育就可以移植入病人體內(nèi)，雖然HIV沒有配型提高了移植的難度，但由于臍血干細(xì)胞的低免疫排斥反響所以病人的身體是可以接受的。臍血的來源比骨髓要廣泛的多，并且臍血干細(xì)胞是打入靜脈血中的，這樣就免除了手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)和來源的困難，使更多的病人得到及時(shí)的治療。臍帶血干細(xì)胞移植(HSCT)是目前治

9、療難治性血液病、免疫缺陷病及惡性腫瘤的主要手段之一，而臍帶血作為造血干細(xì)胞HSCs)的重要來源，自1988年Gluckman等采用臍帶血移植(UCBT)勝利地治療了l例患Fanconi貧血的5歲兒童以來，目前臨床上采用臍帶血移植治療的疾病曾經(jīng)到達(dá)8O余種，治療的患者(包括兒童、成人)全世界已超越6000例J大量的根底研討和臨床實(shí)際顯示臍血移植優(yōu)勢(shì)明顯2。對(duì)于臍血等成體干細(xì)胞移植的臨床運(yùn)用前景，國(guó)際醫(yī)學(xué)權(quán)威雜志(TheNewEnglandJournalofMedicine)和(Blood)雜志曾對(duì)此做過全面的綜述“。UCBT現(xiàn)階段可治療的疾病血色素與血液異常巨細(xì)胞缺乏性血小板減少癥(AMT)，再

10、生妨礙性貧血，先天性血球細(xì)胞缺乏癥，鐮狀細(xì)胞性貧血，地中海性貧血，BlackfanDiamond貧血，Evan綜合征，F(xiàn)ancon貧血，Kostmann綜合征疾病急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，急性非淋巴細(xì)胞性白血病(ANL)，慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)，慢性骨髓細(xì)胞性白血病(CML)，年青型骨髓單核細(xì)胞性白血病(JML)，骨髓發(fā)育不良綜合征(MDS)，多發(fā)性骨髓瘤。體性腫瘤腦瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，Ew。ng肉瘤，生殖細(xì)胞腫瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤,卵巢癌，小細(xì)胞性肺癌，睪丸癌。先天性代謝性缺陷腦白質(zhì)腎上腺營(yíng)養(yǎng)不良癥，淀粉樣變性，巴爾淋巴球綜合征，先天性角化不良

11、，家族性噬紅細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥，Gaucher疾病，Gunter疾病，Hunter綜合征，Hurler綜合征，遺傳性神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)冷靜癥，Krabbe疾病(嬰兒遺傳性腦白質(zhì)萎縮)，Langerhan細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥，LeschNyhan疾病，骨硬化病(骨質(zhì)石化病)，白細(xì)胞黏著缺乏癥。免疫缺陷病變腺嘌呤去氨酵素缺乏(ADA)，慢性肉芽腫疾病(CGD)，嚴(yán)重性結(jié)合免疫缺陷疾病(SCIDs)，X一性連鎖性淋巴組織增生疾病(KLP)，WiskottAldrich癥候。自體免疫疾病多發(fā)性硬化癥，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，紅斑性狼瘡3。1.2臍血干細(xì)胞的分別和冷凍如今庫存分別干細(xì)胞最廣泛的方法是HES羥乙基

12、淀粉沉淀分別法4?？梢杂行У娜コ嘤嗉t細(xì)胞，保管絕大多數(shù)的有核細(xì)胞。從而到達(dá)臨床運(yùn)用的規(guī)范。而冷凍主要是往分別后的臍血中參與DMSO和右旋糖苷配置的防凍液后迅速把溫度降低至零下180并轉(zhuǎn)移至液氮罐中保管。1.2.1庫存臍血干細(xì)胞的分別1、器材5ml，10ml，15ml，20ml,30ml,50ml的注射器，EP管，10ml軟試管，100ml轉(zhuǎn)移袋，50ml冷凍袋，止血鉗，滅菌剪刀，超凈任務(wù)臺(tái)，血漿夾，熱合機(jī)，電子秤，酒精燈，碘酒，75%酒精，醫(yī)用棉簽，細(xì)菌培育瓶，HES，離心機(jī)，天平2、步驟第一步離心 把血液放入超凈任務(wù)臺(tái)中。用止血鉗夾住皮管，并用碘酒擦拭要剪開的部位擦拭完后用酒精脫碘。用滅菌

13、剪刀剪開止血鉗上部的皮管，取1ml的血液用做有核細(xì)胞的讀數(shù)和血型檢測(cè)。抽取HES打入血液中，抽取的量約為血液總量的五分之一。把混合后的血液轉(zhuǎn)移至100ml轉(zhuǎn)移袋中，放入離心機(jī)中離心7分鐘，離心的時(shí)候袋口部位朝下以利于離心后抽去紅細(xì)胞。第二步離心，走離心機(jī)中取出血液，取的時(shí)候盡量防止震蕩以免破壞分層。血液分別后分為三層，上層為透明狀的血漿，中層為半透明的紅細(xì)胞與有核細(xì)胞的混合體，下層為沉淀的紅細(xì)胞。用止血鉗夾住轉(zhuǎn)移袋頂端并掛在超凈臺(tái)的頂部使其懸空。用止血鉗夾住皮管，按無菌抄作規(guī)范剪開止血鉗下部，抽去沉淀的紅細(xì)胞，抽去的量最少是參與HES的量。熱合剪開部位放入離心機(jī)中離心21分鐘。去除多余血漿，

14、走離心機(jī)中取出血液，取的時(shí)候盡量防止震蕩以免破壞分層。這步離心后分為三層，上層為透明狀的血漿，中層為有核細(xì)胞層，下層為剩余紅細(xì)胞與有核細(xì)胞的混合層。把離心后的血液放入血漿夾中，緩慢夾緊以防止有核細(xì)胞的騰起所呵斥的損失。用止血鉗夾住皮管，按無菌操作剪開皮管，緩慢翻開止血鉗放出多余氣體。用注射器抽取15ml血漿打入細(xì)菌培育瓶中檢測(cè)能否染菌。抽去多余血漿只留下32ml的血液。用無塵布悄然擦拭轉(zhuǎn)移袋外部，把內(nèi)部貼壁的有核細(xì)胞擦下?；靹蚝笥米⑸淦鞒槿?.6ml用作讀數(shù)。有核細(xì)胞回收率的計(jì)算數(shù)據(jù)如表(1)表1 有核細(xì)胞回收率的計(jì)算數(shù)據(jù)血液含量有核細(xì)胞每ml含量分別前146ml5.71012分別后32ml2

15、0.81012有核細(xì)胞回收率=20.8101232(5.71012 146)87%1.2.2庫存臍血干細(xì)胞的冷凍配置防凍液 抽取右旋糖酐8ml打入轉(zhuǎn)移袋中，放入冰水混合物中冷卻5分鐘，抽取8mlDMSO緩慢打入轉(zhuǎn)移袋中，混勻。冷卻7分鐘。防凍液與血液混勻 把血液放入冰水混合物中冷卻7分鐘。用注射器抽出防凍液往血液中參與，加的時(shí)候要特別緩慢，加一次需求搖50秒左右，使溫度一直在4血液的轉(zhuǎn)移 血液參與防凍液后冷卻7分鐘。用50ml注射器抽出血液，打入防凍袋中。排出防凍袋中的氣泡。這里要留意從抽出血液開場(chǎng)到排出氣泡為止不能超越兩分鐘。程控降溫 把冷凍袋中的血液與冰水混合物一同放入傳送窗。外部人員翻開

16、程控降溫儀，把血液放入程控降溫儀中開場(chǎng)程控降溫。首先調(diào)試溫度，當(dāng)配型管中的溫度與箱體內(nèi)部溫度堅(jiān)持恒定時(shí)放入血液。點(diǎn)下開場(chǎng)按鈕。終了時(shí)血液溫度為-80凍存的臍血干細(xì)胞可以保管1020年之久，當(dāng)嬰兒長(zhǎng)大需求用的時(shí)候只需求把凍存的臍血復(fù)蘇后培育12天就可以運(yùn)用。相當(dāng)于買了份生命保證，尤其是自體的臍血干細(xì)胞治愈幾率大大提高。此外臍血干細(xì)胞從采集時(shí)間起24小時(shí)內(nèi)分別后經(jīng)23天的培育可以直接用于臨床。1.2.3臨床用臍血干細(xì)胞的分別器材預(yù)備 50ml離心管，5ml移液管，10ml移液管，10ml軟試管，細(xì)菌培育瓶，生理鹽水，淋巴分別液，紅細(xì)胞裂解液，培育瓶。第一次離心 把臍血放入超凈任務(wù)臺(tái)，按無菌操作剪開

17、皮管，把臍血分裝入離心管中1000r每分鐘離心10分鐘。第二次離心 去上清液，加生理鹽水至刻度45ml，用移液槍混勻，用移液槍抽取混勻的血液轉(zhuǎn)移至放有淋巴分別液的離心管中。放入離心機(jī)中2000r每分鐘離心21分鐘。由于紅細(xì)胞比淋巴分別液重而有核細(xì)胞比淋巴分別液輕，所以這一步可以去掉大部分的紅細(xì)胞。第三次離心 離心后的血液分為四層，第一層是血漿，第二層呈霧狀為有核細(xì)胞層，第三層為淋巴分別液層，最下層是沉淀的紅細(xì)胞層。用移液槍深化有核細(xì)胞層按畫圈的方法把有核細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加生理鹽水混勻，放入離心機(jī)中1000r每分鐘離心10分鐘。第四次離心 離心后有核細(xì)胞與剩余的紅細(xì)胞沉淀在底部，倒去上層

18、液體加紅細(xì)胞裂解液進(jìn)展裂解，裂解時(shí)間不能超越45秒否那么會(huì)使有核細(xì)胞死亡。加生理鹽水至刻度45ml混勻放入離心機(jī)中1000r每分鐘離心10分鐘。第五次離心 倒去上層液體，加生理鹽水至45ml混勻放入離心機(jī)中1000r每分鐘離心10分鐘。第六次離心 取上清參與細(xì)菌培育瓶中檢測(cè)能否染菌。反復(fù)第五次離心。細(xì)胞培育 每個(gè)培育瓶中放15ml的液體培育基。把得到的有核細(xì)胞與生理鹽水混勻分裝入培育基中，用移液槍混勻，放入二氧化碳培育箱中培育。有核細(xì)胞與生理鹽水混勻后取0.6ml留作讀數(shù)。假設(shè)檢測(cè)出染菌那么丟棄。檢測(cè)合格的培育25天就可做臨床發(fā)放了。普通一個(gè)成年人需求注射的有核細(xì)胞數(shù)量不小于5.6108。2.

19、結(jié)論我國(guó)的臍血干細(xì)胞的技術(shù)還處于開展階段，對(duì)于某些消費(fèi)環(huán)節(jié)還比較模糊，全國(guó)范圍內(nèi)的規(guī)范還沒有明確，運(yùn)用于臨床的臍血干細(xì)胞也會(huì)發(fā)生染菌呵斥患者病情加重，但要知道我國(guó)干細(xì)胞科技開展也不過四五年之久，速度曾經(jīng)相當(dāng)快速了，這就呵斥細(xì)節(jié)不是太完善，需求改良的地方還很多。干細(xì)胞庫的建立改善了干細(xì)胞移植途徑的渠道，而嬰兒保管臍帶血也將成為一種產(chǎn)業(yè)，我國(guó)人口眾多使干細(xì)胞庫的建立曾經(jīng)刻不容緩。 臍血干細(xì)胞在醫(yī)療上的運(yùn)用越來越廣泛，南京，深圳等大城市都建立起了干細(xì)胞移植的點(diǎn)，隨著干細(xì)胞對(duì)疾病治療的不斷開展更多的點(diǎn)都會(huì)建起。置信在不久的未來干細(xì)胞移植將為群眾效力，治療疾病，延緩衰老真正的成為一種萬能藥物。3討論3.

20、1冷凍液對(duì)臍血的作用及危害防凍液是由DMSO與右旋糖酐按1：1配置的。其中DNSO是高效浸透物質(zhì)，右旋糖酐可以最大程度降低超低溫對(duì)細(xì)胞的損傷，兩種混合配置的防凍液可以浸透入細(xì)胞內(nèi)部到達(dá)防凍效果。但DMSO在4對(duì)細(xì)胞有劇毒，所以對(duì)操作的需求很高?，F(xiàn)階段降溫的手段還是冰水混合物降溫。在細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候是用生理鹽水洗出細(xì)胞中殘留的DMSO，假設(shè)沒把DMSO洗出那么會(huì)呵斥細(xì)胞大量死亡。3.2離心對(duì)分別的影響5離心時(shí)會(huì)產(chǎn)生高熱，有核細(xì)胞非常脆弱，一點(diǎn)溫度的差別都會(huì)對(duì)細(xì)胞活力產(chǎn)生影響。所以離心前需求先把離心機(jī)降溫。不同分量的臍血所需的離心條件都不同，但消費(fèi)需求思索效率這樣就把離心條件規(guī)定死了，這樣就使得分量

21、高的臍血離心效果不斷不是太好，主要表如今分層不夠明顯，溶血等，呵斥有核細(xì)胞的回收率降低。所以離心條件需求有幾個(gè)規(guī)范，而不是就一個(gè)規(guī)范。3.3程控降溫對(duì)細(xì)胞的影響6降溫還是圍繞DMSO。前期溫度不能超越4。降溫分為7步。箱體內(nèi)有對(duì)看管，替代血液成分使降溫更準(zhǔn)確。首先對(duì)看管溫度從4降到-5開場(chǎng)第一步，第二步箱體溫度升高到23，這一步有時(shí)升高幅度過大，超越3就會(huì)對(duì)細(xì)胞呵斥影響。第三步箱體溫度降到-5，第四步箱體溫度降到-20，第五步對(duì)看管溫度降低到-40，第六步對(duì)看管溫度降到-80，第七步終了。拿出血液放入液氮罐中。4.干細(xì)胞的前景與展望如今我國(guó)的干細(xì)胞庫還不是非常健全，還保管在全人工階段，而美國(guó)的

22、干細(xì)胞庫曾經(jīng)全自動(dòng)化，大部分的嬰兒都保管了臍血干細(xì)胞，這樣就使得安康得到了保證。自動(dòng)化后的臍血干細(xì)胞庫可以保管的臍血與復(fù)蘇后的運(yùn)用勝利率都大大的提高了，我國(guó)13億人口每年要有多少的嬰兒出生!這是多么大的一個(gè)市場(chǎng)啊，前景將不可限量。 干細(xì)胞的運(yùn)用非常廣泛，21世紀(jì)人們的生活理念都傾向于安康與美麗。而干細(xì)胞不僅僅是運(yùn)用于醫(yī)療，其分化成各種組織細(xì)胞的才干完全可以改善人體細(xì)胞的活力，提高免疫力，活化皮膚細(xì)胞，活化頭皮細(xì)胞到達(dá)保健，美容等效果。而最新的報(bào)道說干細(xì)胞曾經(jīng)勝利培育成小鼠的皮膚細(xì)胞，假以時(shí)日假設(shè)可以用干細(xì)胞培育出人體的組織和器官那將會(huì)使人類的壽命跨出無與倫比的一步。參考文獻(xiàn)1LI Chun; GE Xiao-dong; ZHU J