實(shí)驗(yàn)十三維生素AD膠丸中維生素A的含量測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)十三 維生素AD膠丸中維生素A的含量測(cè)定1簡(jiǎn)介 維生素A的結(jié)構(gòu)為具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烷，由于其中有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，并且其對(duì)酸不穩(wěn)定。其醋酸酯比維生素A穩(wěn)定，臨床使用一般將本品或棕櫚酸酯溶于植物油中應(yīng)用。因此，維生素A及其制劑除需密封在涼暗處保存外，還需充氮或加入合適的抗氧劑。維生素A與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。2一 目的要求 掌握UV三點(diǎn)校正法的原理和維生素A含量測(cè)定的方法。3二 基本原理1.雜質(zhì)的無(wú)光吸收在310nm340nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)幾乎呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增長(zhǎng)吸收度下降。2.物質(zhì)對(duì)光

2、吸收呈加和性的原理。即在某一樣品的吸收曲線上，各波長(zhǎng)處的吸收度是維生素A與雜質(zhì)吸收度的代數(shù)和，因而吸收曲線也是二者的疊加。 4三 實(shí)驗(yàn)儀器與器材1.溶液和試劑：維生素A膠丸（規(guī)格2.5萬(wàn)單位/粒）、環(huán)己烷、乙醚。2.儀器和其他用具：紫外可見分光光度儀（具掃描功能）、分析天平、石英比色皿、25mL容量瓶若干、移液管、注射器、刀片、燒杯若干個(gè)。5四 操作步驟1.膠丸內(nèi)容物平均重量的測(cè)定 取膠丸20粒，精密稱定，（2.4641g），用注射器將內(nèi)容物抽出，再用刀片切開丸殼，用乙醚逐個(gè)洗滌丸殼三次，置50mL燒杯中，再用乙醚浸洗1-2次，置通風(fēng)處，使乙醚揮散，精密稱定，得總殼重（0.7213g），算出每

3、丸內(nèi)容物的平均重量。6四 操作步驟2.供試品溶液的制備與測(cè)定 第一種方法 方法：精密稱取一粒維生素AD膠丸內(nèi)容物（0.0048g），用環(huán)己烷溶解并定量稀釋成25mL。取0.8mL再用環(huán)己烷稀釋至25mL，即制成每mL中含915單位的溶液。按照分光光度法，測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并分別在300nm,316nm,328nm,340nm,360nm五個(gè)波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度。7四 操作步驟 計(jì)算： （1）求E1%1cm ：由 A= E1%1cm CL求得 E1%1cm =A/（CL） （2）求效價(jià)（IU/g）：效價(jià)系指每克供試品中所含維生素A的國(guó)際單位數(shù)（IU/g）。 即IU/g= E1%1cm 19008四

4、 操作步驟（3）求維生素A占標(biāo)示量的百分含量： 標(biāo)示（% ）= （E1%1cm1900W）/標(biāo)示量 100%=（AD1900W）/（W100L標(biāo)示量）100%9四 操作步驟（4） A值的選擇 首先計(jì)算吸收度比值（即Ai/A328） 如果最大吸收波長(zhǎng)在326nm329nm之間，并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，均不得超過(guò)0.02時(shí)，則不用校正公式計(jì)算吸收度，而直接用328nm處測(cè)得的吸收度A328求得E1%1cm。 10四 操作步驟如果最大吸收波長(zhǎng)在326nm329nm之間， 并分別計(jì)算5個(gè)波長(zhǎng)下的差值，如有一個(gè)或幾個(gè)超過(guò)0.02，這時(shí)應(yīng)按以下方法判斷： 第一法校正公式：A328(校正)=3.52(2

5、A328-A316-A340) 再按下式計(jì)算校正吸收度與實(shí)測(cè)吸收度的差值對(duì)實(shí)測(cè)吸收度的百分率（d）： d =（A328(校正) A328(測(cè))）/ A328(測(cè)) 100%如果最大吸收波長(zhǎng)不在326nm329nm之間，也不能用本法測(cè)定，而應(yīng)用第二法（皂化法）測(cè)定含量。11四 操作步驟第二種方法 方法：精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于維生素A總量500單位以上，重量不多于2g），置皂化瓶中，加乙醇30mL與50（g/g）氫氧化鉀溶液3mL，依法皂化后用不含過(guò)氧化物的乙醚提取并定量稀釋成每1mL中含維生素A為915單位的溶液，在300、310、325、334nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并確定最大吸收波長(zhǎng)（應(yīng)為325nm）。計(jì)算：計(jì)算同第一法，換算因子為1830。 第二種方法校正公式： A325（校正）=6.815A3252.5553104.260A33412四 操作步驟維生素A吸收度差值13五 結(jié)果與討論（1）計(jì)算各波長(zhǎng)處吸收度與