醫(yī)學(xué)專題藥分04

1、結(jié)構(gòu)性質(zhì)（物理、化學(xué)性質(zhì)） 分析方法（鑒別、檢查、含量測定）2021/7/20 星期二1醇酚羥基烯醇羥基酚2021/7/20 星期二2胺芳胺芳伯氨基2021/7/20 星期二3羧酸芳酸2021/7/20 星期二4第三章 定量分析樣品的前處理方法2021/7/20 星期二5第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法2021/7/20 星期二6一、含鹵素有機藥物的分析 含鹵素有機藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽結(jié)構(gòu)特點：CX2021/7/20 星期二7（一）鹵原子的活潑性1. 鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)

2、系2021/7/20 星期二8（1）乙烯型鹵和芳鹵 不活潑2021/7/20 星期二9（2）烯丙型鹵和芐鹵 活潑（3）鹵代烷型 介于兩者之間2021/7/20 星期二102. 分子中所含鹵原子的個數(shù) 分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，活潑性越強，特別是同一碳上含多個鹵原子或一個苯環(huán)上含多個鹵原子時，活潑性增強更加明顯2021/7/20 星期二113. 鹵素的種類IBrClF常見的含鹵素有機藥物：2021/7/20 星期二12三氯叔丁醇六氯對二甲苯2021/7/20 星期二13泛影酸2021/7/20 星期二14膽影酸2021/7/20 星期二15碘他拉酸2021/7/20 星期二16碘番酸2021/

3、7/20 星期二17碘苯酯I2021/7/20 星期二18鹽酸胺碘酮2021/7/20 星期二19諾氟沙星2021/7/20 星期二20醋酸氟輕松2021/7/20 星期二21磺溴酞鈉2021/7/20 星期二22（二）含鹵素有機藥物的分析直接回流后測定法堿性或酸性還原后測定法氧瓶燃燒分解后測定法2021/7/20 星期二231. 直接回流后測定法 本法是將含鹵素有機藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液（或定量過量的硝酸銀滴定液）后，加熱回流使其水解，將有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用銀量法（Volhard法）測定。2021/7/20 星期二24 本法適用于含鹵素有機藥物

4、結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。 2021/7/20 星期二25 原理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。 例三氯叔丁醇的測定 Ch.P（2005）2021/7/20 星期二26CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕紅色）(

5、Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 2021/7/20 星期二27測定方法 取本品約0.1g，精密稱定，加乙醇5ml，溶解后，加20%氫氧化鈉溶液5ml，加熱回流 15分鐘，放冷，加水20ml與硝酸5ml，精密加硝酸銀滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加鄰苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，強力振搖后，加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.216mg的C4H7Cl3O1/2H2O。2021/7/20 星期二28滴定度，每1

6、 ml滴定液相當(dāng)于被測組分的mg數(shù)，mg/ml滴定液濃度，mol/L被測物的摩爾質(zhì)量，g/mol1 mol樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)，常體現(xiàn)為反應(yīng)摩爾比，即1n。反應(yīng)摩爾比為132021/7/20 星期二29 2. 堿性或酸性還原后測定法 本法是將含鹵素有機藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子，然后采用銀量法（Fajans法）測定。2021/7/20 星期二30 本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原子的含鹵素有機藥物。 2021/7/20 星期二31 （1） 堿性還原后測定法例 泛影酸的測定 Ch.P （

7、2005）2021/7/20 星期二32 取本品約0.4g，精密稱定，加氫氧化鈉溶液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30分鐘，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。2021/7/20 星期二33COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O2021/7/20 星期二34

8、 USP（28）、BP（2004） Ch.P（2005）收載的膽影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法測定。 2021/7/20 星期二35 （2）酸性還原后測定法例 碘番酸的測定 JP (14)2021/7/20 星期二36 取本品的干燥品約0.4g，精密稱定，加鋅粉1g及冰醋酸10ml，加熱回流30min，放冷，冷凝管用水30ml洗滌，用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌2次，每次20ml，洗液與濾液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。終點時黃色沉淀變?yōu)榫G色。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.031mg的C11H12

9、I 3NO2。2021/7/20 星期二373. 氧瓶燃燒分解后測定法（1）原理2021/7/20 星期二38 氧瓶燃燒法：本法是將分子中含有鹵素或硫等元素的有機藥物在充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒產(chǎn)物吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校俨捎眠m宜的分析方法來檢查或測定鹵素或硫等元素的含量2021/7/20 星期二39 適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機藥物的分析2021/7/20 星期二40 本法特點是簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析2021/7/20 星期二41（ 2） 儀器與材料 儀器裝置 燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑

10、絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀2021/7/20 星期二42稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品 無灰濾紙 B. 液體樣品 紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹2021/7/20 星期二432021/7/20 星期二44吸收液 A. 作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)氧氣2021/7/20 星期二45B. 吸收液的選擇氟 水 氯 NaOH溶液溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液2021/7/20 星期

11、二46（3）操作方法燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備 用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。2021/7/20 星期二47樣品的準(zhǔn)備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。2021/7/20 星期二48樣品的燃燒 點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然后按各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或測定。2021/7/20 星期二49根據(jù)被燃燒

12、分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。（4）注意事項 Ch.P（2005）規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析2021/7/20 星期二50 待分解樣品量 燃燒瓶的體積 2030mg（半微量分析）500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多 2000ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶2021/7/20 星期二51 正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。2021/7/20 星期二52測定含氟有機藥物時，用石英制燃燒瓶鉑絲燃燒時起催化作用應(yīng)同時做空白試驗2021/7/20 星期二

13、53燃燒時要注意防爆燃燒要完全燃燒產(chǎn)生的煙霧完全被吸收2021/7/20 星期二54（5）應(yīng)用例 磺溴酞鈉的含量測定 Ch.P (2005)2021/7/20 星期二55燃燒分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O22021/7/20 星期二56溴 取本品約0.2g，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進(jìn)行有機破壞，選用1000ml燃燒瓶，以0.4%氫氧化鈉溶液10ml、濃過氧化氫溶液0.5ml與水10ml作為吸收液，俟生成的煙霧完全吸入吸收液后，用水稀釋至100ml，煮沸5分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸銀滴定液（

14、0.1mol/L）20ml，搖勻，再加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于7.990mg的溴(Br)。2021/7/20 星期二57例 碘苯酯的含量測定 Ch.P（2005）碘苯酯I2021/7/20 星期二58原理 碘苯酯系有機碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色

15、消失即為終點2021/7/20 星期二59 取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機破壞，用氫氧化鈉試液2ml與水l0ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成100ml)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2。 202

16、1/7/20 星期二60滴定度的計算 放大反應(yīng)2mol碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2molNaIO3即2mol碘苯酯2molNaIO32021/7/20 星期二612mol NaIO3+10I-6molI2即2mol碘苯酯1molI2 6molI212molNa2S2O3反應(yīng)摩爾比為162021/7/20 星期二62二、含金屬有機藥物的分析 含金屬的有機藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物 如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵2021/7/20 星期

17、二63 有機金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢固 如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利2021/7/20 星期二64酒石酸銻鉀2021/7/20 星期二65硬脂酸鎂富馬酸亞鐵2021/7/20 星期二66葡萄糖酸銻鈉2021/7/20 星期二67卡巴胂醋酸苯汞2021/7/20 星期二68汞撒利2021/7/20 星期二69含金屬有機藥物定量分析前的處理方法 不經(jīng)有機破壞的分析方法 直接測定法;經(jīng)水解后測定法;經(jīng)還原-汞齊化后測定法2021/7/20 星期二70 經(jīng)有機破壞的分析方法 濕法破壞(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等);干法破壞2021/7/20 星期二71（

18、一）不經(jīng)有機破壞的分析方法1. 直接測定法 適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬有機藥物或某些CM鍵結(jié)合不牢固的有機金屬藥物。2021/7/20 星期二72富馬酸亞鐵的含量測定 Ch.P（2005） 取本品約0.3g，精密稱定，加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，放冷，加新沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于16.99mg 2021/7/20 星期二73原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ Fe2+ + e-Fe3+紅色淺藍(lán)色OOCCHOHCCO+Fe2+

19、2021/7/20 星期二74 例 葡萄糖酸銻鈉的測定 Ch.P（2005） 取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg的Sb。 2021/7/20 星期二752021/7/20 星期二76如枸櫞酸鐵銨的測定 Ch.P（2000） 取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中。加水15ml溶解后，加硫酸lml，加熱至溶液由暗棕

20、色變成淡黃色，放冷至約15，滴加高錳酸鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù)5s，加鹽酸15ml與碘化鉀試液15ml，密塞，靜置3min，加水50ml稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于5.585mg的Fe。 2021/7/20 星期二772. 用硫酸水解后測定法例 硬脂酸鎂的測定 Ch.P（2005） 取本品約0.1g，精密稱定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油層澄清，繼續(xù)加熱10min，放冷，加甲基橙指示液12滴，用氫氧化鈉滴定液

21、(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于2.016mg的MgO。2021/7/20 星期二78原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 2021/7/20 星期二79 某些含汞有機藥物，由于CHg鍵不牢固，在水溶液（冰?。┲械渭恿蛩崾蛊渌?，將有機汞定量轉(zhuǎn)化成硫酸汞，再用硫氰酸銨滴定液滴定。2021/7/20 星期二80例 汞撒利的測定 取本品約0.5g，精密稱定，加蒸餾水10ml，置冰浴中，滴加硫酸10ml，隨滴隨攪拌，至產(chǎn)生的沉淀復(fù)溶解，再加蒸餾水5

22、0ml，硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于25.29mg的汞撒利。2021/7/20 星期二813. 經(jīng)還原-汞齊化后測定法 本法系在酸性或堿性溶液中，加鋅粉、加熱回流，將藥物中有機結(jié)合的汞還原析出金屬汞，并與過量的鋅生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝酸后，選用適當(dāng)?shù)姆椒y定汞的含量，并換算成含汞有機藥物的含量。 2021/7/20 星期二82如醋酸苯汞的含量測定 取本品約0.5g，精密稱定，置100ml燒瓶中，加水15ml，甲酸5ml與鋅粉1g，附回流冷凝器，煮沸30min。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸餾水洗滌至洗液對石蕊

23、試紙不顯酸性反應(yīng)。將鋅汞齊溶解在稀硝酸(12)40ml中，置蒸氣浴上加熱3min，加尿素0.5g和足夠的高錳酸鉀試液至顯桃紅色。冷卻后，加過氧化氫溶液脫色，加硫酸鐵銨指示劑lml，用硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每1ml硫氰酸銨液(0.1mol/L)相當(dāng)于16.84mg的C8H8O2Hg。 2021/7/20 星期二83（二）經(jīng)有機破壞的分析方法 適用于金屬原子與碳原子結(jié)合牢固的有機金屬藥物。2021/7/20 星期二841. 濕法破壞 （1） 硝酸-高氯酸法 本法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞，有機金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機金屬離子一般呈高價態(tài)。 本法不能用于含氮雜環(huán)藥

24、物的破壞2021/7/20 星期二85 （2） 硝酸-硫酸法 本法適用于大多數(shù)有機物質(zhì)的破壞，破壞得到的無機金屬離子均為高價態(tài)。 本法不能用于含堿土金屬有機藥物的破壞2021/7/20 星期二86 （3） 硫酸-硫酸鹽法 本法是往樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽提高硫酸的沸點，增強硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。 2021/7/20 星期二87 本法常用于含砷或銻有機藥物的破壞，破壞得到的無機金屬離子多為低價態(tài)。2021/7/20 星期二88 （4） 其它濕法 硝酸硫酸高氯酸法 硫酸氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀） 破壞后，金屬呈高價態(tài)2021/7/20 星期二892. 干法破壞

25、 適用于濕法不易破壞完全的有機物以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機藥物。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機藥物的破壞2021/7/20 星期二90注意事項：（1）加熱或灼燒時，應(yīng)控制溫度在420以下（2）一定要灰化完全（3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但不要輕易棄去2021/7/20 星期二91第二節(jié) 定量分析方法特點2021/7/20 星期二92常用的含量測定方法 化學(xué)分析法儀器分析法生物學(xué)方法酶化學(xué)方法2021/7/20 星期二93容量分析法 經(jīng)典化學(xué)分析 重量分析法 現(xiàn)代儀器分析技術(shù) 光譜分析法 色譜分析法 電化學(xué)分析法 2021/7/20 星期二94 容量分析法（滴定分析法

26、） 酸堿滴定法 氧化還原滴定法 配位滴定法 沉淀滴定法 非水溶液滴定法 一、容量分析法2021/7/20 星期二95 容量法用于常量組分測定。雖專屬性不高，但由于其具有準(zhǔn)確度較高（一般相對誤差可達(dá)0.2%以下）、精密度好、儀器設(shè)備簡單、試驗成本低及操作簡便、快速等優(yōu)點，廣泛用于原料藥的含量測定?；瘜W(xué)原料藥含量測定首選。 （一）容量分析法的特點2021/7/20 星期二96（二）容量分析法的計算1. 滴定度2. 百分含量的計算 原料藥2021/7/20 星期二97 （1）原料藥，直接滴定法含量測定結(jié)果的計算： 滴定時，供試品消耗滴定液的體積，ml濃度校正因子供試品的質(zhì)量，g。2021/7/20

27、星期二98（2）原料藥，直接滴定法，有空白校正的計算： 滴定時，空白消耗滴定液的體積，ml2021/7/20 星期二99（3）原料藥，剩余滴定法，有空白試驗，含量測定結(jié)果的計算： 2021/7/20 星期二100（4）原料藥，剩余滴定法，無空白試驗，含量測定結(jié)果的計算： 2021/7/20 星期二101光譜分析法 紫外可見分光光度法 UVVis 原子吸收分光光度法 AAS 熒光分析法 二、光譜分析法2021/7/20 星期二102（一）紫外可見分光光度法 根據(jù)物質(zhì)對波長為200760 nm這一范圍的光吸收特性建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。 2021/7/20 星期二1031. 基本

28、原理 物質(zhì)對單色光吸收強弱與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度關(guān)系定律 （1） Lambert -Beer定律2021/7/20 星期二104（2） 吸收系數(shù) C以“g/100ml”為單位的吸收系數(shù)。 其物理意義為：當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%（1g/100ml），液層厚度為1cm時的吸光度。 百分吸收系數(shù)2021/7/20 星期二105摩爾吸收系數(shù) C以“mol/L”為單位的吸收系數(shù)。2021/7/20 星期二106 （1）定期全面檢定 （2）測定前對波長進(jìn)行校正 汞燈、氘燈、鈥玻璃 2. 儀器的校正和檢定2021/7/20 星期二107（3）吸光度準(zhǔn)確度的檢定 重鉻酸鉀的硫酸溶液（4）雜散光 碘化鈉和亞硝

29、酸鈉 2021/7/20 星期二1083. 吸光度的測定方法（1）對溶劑的要求（2）測定波長的確證2021/7/20 星期二109 紫外可見分光光度法測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長作為測定波長。 2021/7/20 星期二110（3）供試品溶液濃度應(yīng)使測得的吸光度在0.30.7之間。2021/7/20 星期二1114. 在含量測定中的應(yīng)用（

30、1）吸收系數(shù)法（絕對法）吸光度百分吸收系數(shù)液層厚度，cm，如無特別注明，L=1cm可在手冊或文獻(xiàn)中查到2021/7/20 星期二112（2）對照法供試品溶液的吸光度對照品溶液的吸光度供試品溶液的濃度對照品溶液的濃度2021/7/20 星期二113條件：A. 待測物與對照品在相同 條件下測定B. 待測物與對照品濃度相近（3）計算分光光度法2021/7/20 星期二1145. 百分含量的計算 原料藥（1）吸收系數(shù)法溶液體積ml稀釋倍數(shù)2021/7/20 星期二115（2）對照法2021/7/20 星期二1166. 特點 UVVis 靈敏度高，操作簡便、快速、儀器價格較低廉，因此應(yīng)用廣泛。但由于儀器

31、和操作的原因，誤差較容量分析法大，除甾體激素類藥物和某些抗生素外，原料藥盡可能避免使用。 2021/7/20 星期二117（二）熒光分析法 物質(zhì)受光照射時，在吸收某種波長光的同時又發(fā)射出比原來波長更長的光，激發(fā)光停止照射，光線隨之消失，這種光稱為熒光。熒光為發(fā)射光。利用熒光的物理特性進(jìn)行定性與定量測定的方法稱為熒光分析法。1. 熒光及熒光分析法2021/7/20 星期二1182. 熒光激發(fā)光譜與熒光發(fā)射光譜 以熒光發(fā)射光波長為橫坐標(biāo)，發(fā)射光強度（熒光強度）為縱坐標(biāo)熒光發(fā)射光譜（熒光光譜）2021/7/20 星期二119熒光激發(fā)光譜（激發(fā)光譜） 激發(fā)光波長為橫坐標(biāo)，發(fā)射光強度（熒光強度）為縱坐標(biāo)

32、2021/7/20 星期二1203. 熒光光度計（1）激發(fā)光源 汞燈、氙燈（2）單色器 兩個單色器（3）樣品池 低熒光玻璃或石英池（4）檢測器 光電倍增管，在與激發(fā)光源成直角的方向檢測熒光2021/7/20 星期二1214. 在含量測定中的應(yīng)用 當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件一定時，在較稀濃度范圍內(nèi)藥物的熒光強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比。 2021/7/20 星期二122對照品比較法RC供試品溶液試劑空白的熒光強度2021/7/20 星期二123片劑含量測定結(jié)果的計算 2021/7/20 星期二124片劑，熒光法平均片重，g/片2021/7/20 星期二1255. 特點 熒光法最主

33、要的優(yōu)點是測定靈敏度高，選擇性好。2021/7/20 星期二126 利用物質(zhì)在流動相與固定相兩相中分配系數(shù)差異而得以分離，并在檢測中能檢出其信號，從而達(dá)到分離、分析的一類分析方法。（一）色譜法三、色譜法 2021/7/20 星期二127 色譜法是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法。具有高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快及應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點。2021/7/20 星期二128（二）常用的色譜法色譜分析法 高效液相色譜法 HPLC氣相色譜法 GC 2021/7/20 星期二1291. GC 常用氣液分配色譜，硅藻土為載體，涂高沸點固定液或化學(xué)鍵和相，常用N2作流動相。2021/7/20 星期二130

34、2. HPLC （1）液固吸附色譜法 固定相為硅膠等吸附劑、流動相是烷烴作底劑加入適量極性調(diào)整劑2021/7/20 星期二131（2）液液分配色譜法 固定相幾乎全是化學(xué)鍵合相2021/7/20 星期二132 流動相極性小于固定相極性。固定相為氰基或氨基健合硅膠，流動相是烷烴作底劑加入適量極性調(diào)整劑，用于分離溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì) 正相色譜法2021/7/20 星期二133 流動相極性大于固定相極性。固定相為十八烷基硅烷健合硅膠（ODS或C18柱）或辛烷基硅烷健合硅膠（C8柱），流動相是甲醇水或乙腈水，主要用于分離非極性至中等極性的各類分子型化合物 反相色譜法2021/7/20

35、 星期二134 調(diào)整流動相pH值抑制組分解離，用于分離有機弱酸、弱堿 反相離子對色譜法 流動相中加入離子對試劑，用于分離有機酸、堿、鹽離子抑制色譜法2021/7/20 星期二135（三）高效液相色譜法1. 對儀器的一般要求2021/7/20 星期二136 指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗，應(yīng)符合要求。包括理論板數(shù)（n）、分離度（R）、重復(fù)性和拖尾因子（T）等四個指標(biāo)。2. 系統(tǒng)適用性試驗2021/7/20 星期二137（1）理論板數(shù) 色譜柱的理論板數(shù)越多，柱效越高。2021/7/20 星期二138（2）分離度 藥典要求 R 應(yīng)1.52021/7/20 星期二139 用對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，

36、峰面積RSD應(yīng)2.0%；或配制相當(dāng)于80%、100%、120%的對照液，加入規(guī)定的內(nèi)標(biāo)，分別進(jìn)樣3次，計算平均校正因子，RSD亦應(yīng)2.0%。 （3）重復(fù)性2021/7/20 星期二140（4）拖尾因子 峰高法定量時T應(yīng)在0.951.05之間2021/7/20 星期二141（1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量方法 內(nèi)標(biāo)物+對照品對照溶液，進(jìn)樣，測定，計算校正因子 3. 在含量測定中的應(yīng)用2021/7/20 星期二142供試品+內(nèi)標(biāo)供試品溶液，進(jìn)樣，測定供試品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計算含量2021/7/20 星期二1432021/7/20 星期二144 （2）外標(biāo)法測定供試品主成分含量

37、供試品供試品溶液對照品對照品溶液進(jìn)樣，測定，計算含量 2021/7/20 星期二145 缺點：不易準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量，宜用定量環(huán)進(jìn)樣2021/7/20 星期二146 HPLC 主要用于抗生素、生化藥品及含雜質(zhì)干擾測定的化學(xué)藥品。廣泛用于藥物制劑及多組分抗生素的含量測定。在藥典中收載率呈大幅度上升趨勢。 2021/7/20 星期二147（四）氣相色譜法 GC 用于樣品本身具揮發(fā)性，含有雜質(zhì)等干擾的品種，如維生素E。2021/7/20 星期二148第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證 2021/7/20 星期二149一、目的 證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求，方法驗證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品

38、標(biāo)準(zhǔn)起草或修訂說明中。2021/7/20 星期二150二、用途（一）建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，分析方法需經(jīng)驗證。（二）藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。2021/7/20 星期二151三、需驗證的分析項目1. 鑒別試驗；2. 雜質(zhì)定量檢查或限度檢查；3. 原料藥或制劑中有效成分含量測定；2021/7/20 星期二1524. 制劑中其它成分（如防腐劑等）的測定；5. 溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測試方法。 2021/7/20 星期二153 驗證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。四、驗證內(nèi)容 2

39、021/7/20 星期二154 （一） 準(zhǔn)確度（accuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用回收率（%）表示。2021/7/20 星期二155 測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”。 2021/7/20 星期二156 回收試驗 空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M2021/7/20 星期二157 加樣回收試驗 已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M2021/7/20 星期二158 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果評價。例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度分別

40、制備3份供試品溶液，進(jìn)行測定。2021/7/20 星期二1591. 含量測定方法的準(zhǔn)確度 原料藥可用已知純度的對照品或供試品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。 2021/7/20 星期二160 制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或與已知準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。2021/7/20 星期二161 中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在95105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在90110%范圍內(nèi)。RSD一

41、般在3%以內(nèi)。 2021/7/20 星期二1622雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較。2021/7/20 星期二163 （二）精密度（precision） 精密度是指在規(guī)定測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。 2021/7/20 星期二164偏差（d）：測量值與平均值之差相對偏差2021/7/20 星期二165標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD或S）2021/7/20 星期二166相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），也稱變

42、異系數(shù)（CV）2021/7/20 星期二167 1. 重復(fù)性 在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果評價，例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測定。或?qū)⑾喈?dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價。2021/7/20 星期二168 2. 中間精密度 同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度?？疾祀S機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。2021/7/20 星期二169 3. 重現(xiàn)性 在不同實驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度。法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行

43、重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。 2021/7/20 星期二170 （三） 檢測限（ LOD , limit of detection） 檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。限度試驗參數(shù)，無需定量測定。常用%、ppm、ppb表示。2021/7/20 星期二1711非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。 2021/7/20 星期二172 2信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃

44、度或量。一般以信噪比（S/N）31或21時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。2021/7/20 星期二1733數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。 2021/7/20 星期二174（四）定量限（ LOQ， 1imit of quantitation） 指試樣中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。2021/7/20 星期二175 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為101時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。 2021/7/20 星期二176 （五）專屬性（specificity） 指在其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確

45、測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時相互干擾程度的度量。2021/7/20 星期二177 （六） 線性 在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。2021/7/20 星期二178（七）范圍 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。2021/7/20 星期二179（八） 耐用性 指測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。2021/7/20 星期二180（九）應(yīng)用 1. 鑒別試驗除專屬性、耐用性外，其它

46、都不要求。2021/7/20 星期二181 2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。雜質(zhì)的定量測定除檢測限外，其它都要求。 3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。2021/7/20 星期二182第四節(jié) 生物樣品分析2021/7/20 星期二183一、概述 （一）生物樣品分析（體內(nèi)藥物分析） 是通過各種分析手段，研究藥物在體內(nèi)數(shù)量和質(zhì)量的變化，獲得藥物動力學(xué)的各種參數(shù)、藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化、代謝的方式與途徑等信息，從而為藥品生產(chǎn)、臨床醫(yī)療、實驗研究等方面對所研究的藥物作出估計與評價，以及對藥物的改進(jìn)與發(fā)展作出貢獻(xiàn)。2021/7/20 星期二184（二）生

47、物樣品 生物樣品分析的對象是體液、器官、組織及排泄物等2021/7/20 星期二185 生物樣品的介質(zhì)組成比較復(fù)雜：高分子蛋白質(zhì)和低分子糖、脂肪、尿素等有機物，Na+、K+、X-等無機物2021/7/20 星期二186 體內(nèi)藥物存在形式： 游離型原型藥物、代謝物; 藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合物主要與白蛋白、糖蛋白、脂蛋白結(jié)合，通過范德華力、氫鍵、靜電力結(jié)合，非特異性結(jié)合，可逆過程，動態(tài)過程；2021/7/20 星期二187 綴合物藥物經(jīng)代謝后，極性增強，與內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合，發(fā)生綴合反應(yīng)，共價鍵結(jié)合，不可逆。與葡萄糖醛酸結(jié)合葡萄糖醛酸苷，與硫酸形成硫酸酯綴合物。2021/7/20 星期二188（三）生物藥

48、物分析的特點 1. 樣品成分復(fù)雜，干擾物質(zhì)多，大多需要經(jīng)過分離、濃集后才能進(jìn)行測定預(yù)處理 2. 樣品的藥物濃度低，對分析方法的靈敏度有較高的要求靈敏度高 2021/7/20 星期二189 3. 樣品量少，且多數(shù)需在特定條件下采集，不易重新獲得細(xì)心操作 4. 數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差誤差大 5. 方法的探索性，在不斷發(fā)展與完善中創(chuàng)新2021/7/20 星期二190二、常用樣品的種類、采集和貯藏 常用樣品有血液（血漿、血清、全血）、尿液、唾液2021/7/20 星期二191（一）血液1. 采血方式 分布均勻后取樣動脈血、心臟取血動物靜脈采血毛細(xì)管采血2021/7/20 星期二1922. 全血、血漿及血清的制

49、備離心全血離心上層：血清下層：血細(xì)胞（凝塊）上層：血漿下層：血細(xì)胞血液自然凝結(jié)加抗凝劑2021/7/20 星期二193血清一般占全血量的40%左右血漿一般占全血量的50%左右抗凝劑：最常用肝素2021/7/20 星期二1943. 應(yīng)用 血漿（plasma）和血清（serum）是最常用的生物樣品。2021/7/20 星期二195血樣采集后應(yīng)及時分離血漿或血清，最好馬上分析；短期保存時應(yīng)置于冰箱冷藏室（4）中;長期保存時應(yīng)置于冰箱冷凍室（-20）中。4. 貯存 2021/7/20 星期二196（二）唾液唾液樣品的優(yōu)點： 1. 樣品容易獲得 2. 取樣無損害性 3. 取樣方式易被兒童接受2021/7

50、/20 星期二197（三）尿液 體內(nèi)藥物的清除主要是通過尿液排出，藥物可以原型（母體藥物）或代謝物及其綴合物等形式排出。 2021/7/20 星期二198 尿藥測定主要用于藥物劑量回收研究，尿清除率、生物利用度的研究，或藥物代謝類型的確定。 2021/7/20 星期二199尿樣的采集 測定尿中藥物濃度時應(yīng)采用時間尿，即將一定時間內(nèi)（如8h 、12h或24h等）排泄的尿液全部儲存起來，并記錄其體積，取一部分測定藥物濃度，然后乘以尿量求得排泄總量2021/7/20 星期二200尿樣的保存 采集后應(yīng)立即測定 不能立即測定時，應(yīng)加入防腐劑(如甲苯、三氯甲烷、濃鹽酸等)置冰箱中保存; 保存時間為2436

51、h，可置冰箱冷藏室（4）中，長時間保存時，應(yīng)冷凍（-20）2021/7/20 星期二201三 、生物樣品分析前處理技術(shù)（一）概述1. 生物樣品的種類 血樣（去蛋白）、 唾液（去除黏蛋白）、尿液（綴合物水解2021/7/20 星期二2022. 被測藥物的性質(zhì) 結(jié)構(gòu)、藥理性質(zhì)等3. 測定方法（1）光譜法2021/7/20 星期二203（2）色譜法 參比方法 HPLC、GC、GCMS、HPLCMS2021/7/20 星期二204（3）免疫分析法 有時作為參比方法 放射免疫分析法（RIA） 酶免疫分析法（EIA） 熒光免疫分析法（FIA） 2021/7/20 星期二205（二）去除蛋白質(zhì)測定血樣時，首

52、先應(yīng)去除蛋白質(zhì)1. 加入與水相混溶的有機溶劑 常用的水溶性有機溶劑有：乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、丙醇、四氫呋喃等2021/7/20 星期二2062. 加入中性鹽 常用的中性鹽： 飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽及枸櫞酸鹽等 鹽析方法與有機溶劑提取法并用時，可提高藥物的回收率2021/7/20 星期二2073. 加入強酸 常用的強酸：10%三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸-鎢酸混合液及5%偏磷酸等 上清液pH為 04，在酸性下分解的藥物不宜用本法除蛋白。 為避免對下一步測定的干擾，過量的強酸要除去。 2021/7/20 星期二2084. 加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑 常用的沉淀劑：CuSO4-NaWO4 Z

53、nSO4-NaOH 2021/7/20 星期二2095. 酶解法 優(yōu)點：適用于測定酸不穩(wěn)定及蛋白結(jié)合牢固的藥物。 缺點：不適用于在堿性下易水解的藥物。 最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素2021/7/20 星期二210（三）綴合物的水解 測定尿液中藥物總量時，首先應(yīng)將綴合物水解。方法： 1. 酸水解法 2. 酶水解法 適用于遇酸及受熱不穩(wěn)定的藥物 2021/7/20 星期二211（四）分離、純化與濃集生物樣品的分析樣品的前處理（分離、純化與濃集）：儀器分析除去大量內(nèi)源性雜質(zhì)；提取出低濃度的被測藥物；濃集藥物與代謝物的濃度。2021/7/20 星期二2121. 液液提取法 多數(shù)藥物為親脂性化合物，而大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強極性的水溶性物質(zhì)，因此用有機溶劑提取一次即可除去大部分雜質(zhì)。2021/7/20 星期二213（1）常用萃取溶劑及萃取方法溶劑的選擇 最常用乙醚和三氯甲烷溶劑的用量 有機相：水相=