重組抗體表達(dá)服務(wù)常見問題解析

1、在此處鍵入重組抗體表達(dá)服務(wù)常見問題解析重組抗體表達(dá)服務(wù)常見問題解析1.如何提高抗體的穩(wěn)定性？優(yōu)化洗脫條件，可以從高的PH逐漸降低；純化的樣品要及時(shí)中和，甚至一邊純化一邊中和；純化實(shí)驗(yàn)過程中樣品低溫制備和保存；添加蛋白保護(hù)劑比如甘油、吐溫；抗體濃度較高時(shí)需要及時(shí)稀釋，避免高濃度聚沉的風(fēng)險(xiǎn)。2.如果用哺乳體系進(jìn)行表達(dá)的話，選擇293或cho有什么區(qū)別？CHO細(xì)胞即中國倉鼠卵巢細(xì)胞，是目前表達(dá)外源蛋白最多最成功的細(xì)胞之一。該細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，是一種非分泌型細(xì)胞，自身很少分泌內(nèi)源蛋白，因此有利于目的蛋白的純化分離；相較于其他細(xì)胞類型，CHO細(xì)胞是治療性蛋白生產(chǎn)的主要宿主細(xì)胞的原因如下：（1）能在化學(xué)

2、成分限定和無血清懸浮培養(yǎng)中穩(wěn)定生長，（2）該細(xì)胞基因組信息明確，在人類致病病毒應(yīng)答方面表現(xiàn)出合理的安全性，（3）能夠表達(dá)與人相似的翻譯后修飾。此外， HYPERLINK /protein-expression-service-index-mammalian.html CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的最重要優(yōu)勢之一是能夠容易的得到基因改造的細(xì)胞。然而，因?yàn)樘腔Ｊ脚c人類不完全相同，導(dǎo)致CHO細(xì)胞產(chǎn)生的重組蛋白在某些時(shí)候仍然表現(xiàn)出免疫原性。HEK293細(xì)胞是 HYPERLINK /protein-expression-service-index.html 真核蛋白表達(dá)常用的細(xì)胞之一，它具有以下優(yōu)勢： 更快的

3、生長速度，更高的生長密度、轉(zhuǎn)染效率高，表達(dá)后修飾更接近人體蛋白的結(jié)構(gòu)，可能會(huì)有潛在的人病毒污染。3.鐘鼎表達(dá)重組抗體服務(wù)的優(yōu)勢是什么？可變區(qū)和高變區(qū)：(1)基于生物信息學(xué)的氨基酸序列分析，(2)基于結(jié)構(gòu)生物學(xué)的同源建模以及計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)和抗體改造(3)基于空間結(jié)構(gòu)的序列分析的重要氨基酸的回復(fù)突變恒定區(qū)：重鏈、輕鏈載體骨架，人源、鼠源多物種可供選擇。豐富的載體表達(dá)哺乳動(dòng)物抗體恒定區(qū)。4.重組抗體的載體如何選擇？重組抗體表達(dá)載體和細(xì)胞最好是配套的，比如293T細(xì)胞對(duì)應(yīng)PCDNA3.1載體，有EBNA改造的細(xì)胞對(duì)應(yīng)有Orip復(fù)制起點(diǎn)的載體，還有就標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，例如Thermo的293F對(duì)應(yīng)PCDNA3.4載體等。5.如何提高重組抗體的產(chǎn)量？選擇高表達(dá)系統(tǒng)，制備無內(nèi)毒素、高超螺旋質(zhì)粒，細(xì)胞狀態(tài)要好，時(shí)間允許可以表達(dá)優(yōu)化，延長表達(dá)時(shí)間，提高純化得率。6.表達(dá)的重組抗體是否具有活性？真核表達(dá)系統(tǒng)較原核表達(dá)的優(yōu)勢就是活性較好，理論上大部分都是有活性的，但是不同的樣品穩(wěn)定性不一樣，需要以實(shí)際實(shí)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。7.是否能高通量篩選重組抗體？可以做高通量抗體表達(dá)及篩選，利