鹽酸小檗堿的分離純化論文

1、.PAGE . - . - - 可修編-黃連中鹽酸小蘗堿的提取別離與鑒定：王倩系別：信息工程系 班級：13級生物二班指導(dǎo)教師 ： 靜 日期：2014年11月30日. TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc22563 摘 要 PAGEREF _Toc22563 1 HYPERLINK l _Toc27600 第1章 前言 PAGEREF _Toc27600 2 HYPERLINK l _Toc1498 1.1小檗堿特性 PAGEREF _Toc1498 2 HYPERLINK l _Toc18170 1.2小檗堿作用 PAGEREF _Toc18170 2 HYPERLIN

2、K l _Toc19664 1.3小檗堿提取純化鑒定方法 PAGEREF _Toc19664 2 HYPERLINK l _Toc31022 1.4本工程研究的意義 PAGEREF _Toc31022 3 HYPERLINK l _Toc5670 1.5 研究容 PAGEREF _Toc5670 3 HYPERLINK l _Toc19461 第2章 黃連中小檗堿的提取 PAGEREF _Toc19461 4 HYPERLINK l _Toc6400 2.1實驗材料與方法 PAGEREF _Toc6400 4 HYPERLINK l _Toc27325 2.2 結(jié)果與分析 PAGEREF _T

3、oc27325 4 HYPERLINK l _Toc32302 第3章 鹽酸小檗堿的別離純化 PAGEREF _Toc32302 5 HYPERLINK l _Toc20942 3.1實驗材料與方法 PAGEREF _Toc20942 5 HYPERLINK l _Toc5982 3.2 結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc5982 6 HYPERLINK l _Toc5461 第4章 鹽酸小檗堿的鑒定 PAGEREF _Toc5461 7 HYPERLINK l _Toc4476 4.1實驗材料與方法 PAGEREF _Toc4476 7 HYPERLINK l _Toc4627 4.2 結(jié)

4、果與分析 PAGEREF _Toc4627 8 HYPERLINK l _Toc27545 第5章 結(jié)論 PAGEREF _Toc27545 9 HYPERLINK l _Toc24019 參考文獻 PAGEREF _Toc24019 10摘 要生物堿是植物中含氮的堿性有機化合物,大都有明顯的生理活性,是許多中草藥中的有效成分。小檗堿是一種季銨堿,其游離堿為黃色針晶,Mp.145(乙醚),微溶于水,能溶于熱水和乙醇中，難溶于苯、丙酮、氯仿，幾乎不溶于石油醚。小檗堿與氯仿、丙酮、苯在堿性條件下均能形成加成物。小檗堿鹽酸鹽難溶于冷水，易溶于熱水；硫酸鹽易溶于水。溶解度分別為:小檗堿,1冷水,110

5、0(冷乙醇);鹽酸鹽,1500(冷水);硫酸鹽,130(冷水),利用這些特性提取鹽酸小檗堿。主要研究結(jié)果為:鹽酸小檗堿精制2.氧化鋁柱層析別離純化鹽酸小檗堿。3.鹽酸小檗堿的鑒定。關(guān)鍵字:鹽酸 小檗堿 提取別離第1章 前言1.1小檗堿特性小檗堿是一種季銨堿,其游離堿為黃色針晶,Mp.145(乙醚),微溶于水,能溶于熱水和乙醇中，難溶于苯、丙酮、氯仿，幾乎不溶于石油醚。小檗堿與氯仿、丙酮、苯在堿性條件下均能形成加成物。小檗堿鹽酸鹽難溶于冷水，易溶于熱水；硫酸鹽易溶于水。溶解度分別為:小檗堿,1冷水,1100(冷乙醇);鹽酸鹽,1500(冷水);硫酸鹽,130(冷水),利用這些特性提取鹽酸小檗堿。

6、1.2小檗堿作用小檗堿是一種常用的廣譜抗菌藥，抵抗多種原因引起的腹瀉， 并具有抗病原體作用，通常用于治療原發(fā)性高血壓、心律失常、高脂血癥、消化性潰瘍和2型糖尿病等疾病。常用的小檗堿提取方法有：醇提、酸水、石灰乳、酶解和酸性乙醇等。本實驗以黃柏為原料，分別用以上5種方法提取其中的小檗堿，并對各種方法的得率進展了比擬，以期篩選出適于黃檗中小檗堿提取的最正確方法1.3小檗堿提取純化鑒定方法掌葉防己堿本實驗是利用小檗堿屬于季銨堿，其游離型在水中的溶解度最大。而它們的鹽類以含氧酸鹽在水中溶解度較大，不含氧酸鹽難溶于水，其鹽酸鹽在水中溶解度則更小。利用此性質(zhì)結(jié)合鹽析法，可從黃連中提取小檗堿。再利用兩種生物

7、堿極性不同，采用柱色譜別離。1.4本工程研究的意義2014年中國小檗堿市場研究報告依托多年對小檗堿行業(yè)的研究，結(jié)合小檗堿行業(yè)歷年供需關(guān)系變化規(guī)律，立足國市場，兼顧全球市場環(huán)境，對小檗堿行業(yè)企業(yè)群體進展了深入的調(diào)查與研究。同時，2014年中國小檗堿市場研究報告也針對小檗堿行業(yè)及其上下游行業(yè)的特點，從不同角度切入行業(yè)，為小檗堿行業(yè)企業(yè)提供了強大的數(shù)據(jù)支持與專業(yè)級的市場導(dǎo)向。并為企業(yè)制定開展戰(zhàn)略、進展投資決策和企業(yè)經(jīng)營管理提供權(quán)威、充分、可靠的決策參考。1.5 研究容1.5.1黃連中鹽酸小檗堿的提取1.5.2 小檗堿的別離純化1.5.2 小檗堿的鑒定第2章 黃連中小檗堿的提取2.1實驗材料與方法2.

8、1.1實驗材料黃連粗粉2.1.2實驗試劑2%硫酸溶液、石灰乳、Hcl、Nacl.2.1.3實驗儀器粉碎機，滲漉筒，燒杯2.1.4實驗方法取黃連粗粉，放入粉碎機，稱重約50g加0.3硫酸500ml超過藥材0.2cm浸漬20分鐘，裝入滲漉筒30分鐘，濾過藥渣濾液加石灰乳調(diào)PH值至中性放置10分鐘抽濾濾液加HCl調(diào)PH23，加濾液體積10的NaCl，放置過夜，抽濾鹽酸小檗堿粗品2.2 結(jié)果與分析通過以上操作，制得鹽酸小檗堿的粗品，由于操作過程中試劑配制微小誤差，使得提取的鹽酸小檗堿的粗品比預(yù)計的少。第3章 鹽酸小檗堿的別離純化3.1實驗材料與方法3.1.1實驗材料鹽酸小檗堿的粗品，3.1.2實驗試劑

9、黃連根粉,0.5%硫酸，石英砂，脫脂棉，石灰乳，10%鹽酸，濃鹽酸，氧化鋁，95%乙醇，無水乙醇，10氫氧化鈉溶液,濾紙，硅膠，氯仿-氨-甲醇(3011 鹽酸 (111，下層)3.1.3實驗儀器層析柱、研缽、燒杯、硅膠薄層板、濾紙、抽濾裝置、紫外燈、層析缸等3.1.4實驗方法3.1.41鹽酸小檗堿精制取所得粗品(未枯燥)放入20倍量沸水中，攪拌溶解后，繼續(xù)加熱數(shù)分鐘，趁熱過濾4。濾液滴加一滴濃鹽酸，靜置(過夜),濾取結(jié)晶，用蒸餾水洗數(shù)次,抽干，50以下真空枯燥，即為精制鹽酸小檗堿氧化鋁柱層析別離純化鹽酸小檗堿5a 氧化鋁層析柱制備:取一支2.0cm30cm層析柱,柱底覆蓋少許脫脂棉,柱參加一定

10、體積95%乙醇,翻開活塞,讓溶液慢慢流出。此時將已攪拌混均的氧化鋁95%乙醇懸液(層析氧化鋁120-140目,25-30g)不斷參加層析柱,至加完后,輕敲柱體,使各局部氧化鋁均勻嚴密一致。待氧化鋁沉降穩(wěn)定(外表應(yīng)平整),外表保持有少量溶劑(0.5cm左右)，關(guān)閉活塞。b 進樣:取約50 mg左右的鹽酸小檗堿粗品，用盡量少的無水乙醇溶解制成溶液。用吸管吸取樣液沿柱壁四周小心參加,翻開層析柱活塞使有溶劑滴下,待液面近與氧化鋁外表相平,迅速用少量無水乙醇將柱壁樣液洗下,待液面下降后再洗,反復(fù)屢次,直至外表溶劑無色,讓樣品完全持留于氧化鋁中,并保存有1cm左右溶劑,此時參加少許石英砂覆蓋氧化鋁外表,并

11、沿管壁參加足量洗脫劑。在此過程中要準確迅速,洗滌溶劑盡量少并盡可能不要擾動,氧化鋁外表平整。c 洗脫:使溶劑繼續(xù)滴下,(注意向柱添加無水乙醇,保持柱體濕潤),洗脫樣品。按每流分5-10 mL收集洗脫液,并著重收集各個色段(從下至上):鮮黃色、桔紅色(棕色段可不再洗脫),收集到的洗脫液經(jīng)濃縮后進展檢測鑒定。d 氧化鋁再生回收:層析后棄去氧化鋁柱上端帶深色局部,取出剩余氧化鋁,依次用10氫氧化鈉溶液和水洗滌,晾干后經(jīng)400烘4-6小時活化再生即可備用。3.2 結(jié)果與分析通過以上操作，得到一定純度的鹽酸小檗堿純品。第4章 鹽酸小檗堿的鑒定4.1實驗材料與方法1取自制精制鹽酸小檗堿0.05g溶于50m

12、l熱水中，參加10%NaOH溶液2ml混合均勻后，于水浴上加熱至50，參加丙酮5ml，放置，即有檸檬色丙酮小檗堿結(jié)晶析出。抽濾，水洗后，枯燥，測mp。 2取自制精制鹽酸小檗堿少許，加稀鹽酸2ml待溶解后，加漂白粉少許，即顯櫻紅色。3取自制精制鹽酸小檗堿少許，加水1ml待溶解后，加12滴，即產(chǎn)生綠色硝酸小檗堿沉淀。 4取自制精制鹽酸小檗堿少許，加1ml待溶解后，加鋅粉少許，再分數(shù)次參加濃硫酸數(shù)滴，每隔10min加1次，觀察其黃色是否消退。 薄層色譜檢識 吸附劑：硅膠G-CMC-Na薄層板對照品：鹽酸小檗堿甲醇溶液樣品：不同色帶的甲醇溶液 展開劑：CHCl3-MeOH-冰醋酸7：1：2檢視：先在紫

13、外燈光365nm下觀察熒光，再噴改進碘化鉍鉀試劑。記錄圖譜并計算Rf值4.1.1實驗材料鹽酸小檗堿純品4.1.2實驗試劑NaOH溶液、稀鹽酸、漂白粉、濃硝酸、鋅粉、濃硫酸、鹽酸小檗堿甲醇溶液、CHCl3-MeOH-冰醋酸、改進碘化鉍鉀試劑。4.1.3實驗儀器紫外可見分光光度計、燒杯，硅膠G-CMA-Na薄層板，真空枯燥箱。 4.1.4實驗方法取自制精制鹽酸小檗堿0.05g溶于50ml熱水中，參加10%NaOH溶液2ml混合均勻后，于水浴上加熱至50，參加丙酮5ml，放置，即有檸檬色丙酮小檗堿結(jié)晶析出。抽濾，水洗后，枯燥，測mp。2.取自制精制鹽酸小檗堿少許，加稀鹽酸2ml待溶解后，加漂白粉少許

14、，即顯櫻紅色。3.取自制精制鹽酸小檗堿少許，加水1ml待溶解后，加12滴，即產(chǎn)生綠色硝酸小檗堿沉淀。4.取自制精制鹽酸小檗堿少許，加1ml待溶解后，加鋅粉少許，再分數(shù)次參加濃硫酸數(shù)滴，每隔10min加1次，觀察其黃色是否消退。 5.薄層色譜檢識 吸附劑：硅膠G-CMC-Na薄層板對照品：鹽酸小檗堿甲醇溶液樣品：不同色帶的甲醇溶液 展開劑：CHCl3-MeOH-冰醋酸7：1：2檢視：先在紫外燈光365nm下觀察熒光，再噴改進碘化鉍鉀試劑。記錄圖譜并計算Rf值結(jié)果與分析通過顏色與RF值分析，得出薄層色譜檢驗后純度大大提高，但收率降低。第5章 結(jié)論小檗堿是一種常用的廣譜抗菌藥，抵抗多種原因引起的腹瀉

15、， 并具有抗病原體作用，通常用于治療原發(fā)性高血壓、心律失常、高脂血癥、消化性潰瘍和2型糖尿病等疾病。本工程以黃連作為試驗材料，從黃連中提取鹽酸小檗堿，通過氧化鋁層析柱的方法進一步純化，進而得到純度較高的鹽酸小檗堿。主要研究結(jié)果為:1通過硫酸酸化水、石灰乳沉淀的方法，高效簡便的提取得到了一定量的鹽酸小檗堿粗品。2 通過鹽析和氧化鋁層析柱的方法，對鹽酸小檗堿粗品進展了純化。3 對鹽酸小檗堿粗品和純品進展紙層析和薄層層析測定，得知鹽酸小檗堿純度提高，但收率降低。注釋1各地產(chǎn)黃連根莖小檗堿及總生物堿含量分別為4.2-6.7%，6.6-9.6%；栽培種比野生種含量少20左右。黃連除根莖作藥材外，各部位均

16、含小檗堿，黃連須根0.8-5.5，葉為1.49，老葉為2.5-2.8，花為0.56，種子為0.23.2浸泡藥材粗粉的硫酸水溶液，濃度不宜過高，一般為02-03為宜。假設(shè)硫酸水溶液濃度過高，小檗堿可成為硫酸氫小檗堿，其溶解度1：100明顯較硫酸小檗堿1：30為小，降低提取效率。硫酸水溶液浸出效果與浸泡時間有關(guān)，浸泡12小時約可浸出小檗堿80，浸泡24小時，可浸出92。常規(guī)浸出應(yīng)浸泡屢次，使小檗堿提取完全，本實驗中浸出液只收集第1次的浸泡液。3鹽析時，參加氯化鈉的量，以提取液量的10計算，即可到達析出鹽酸小檗堿的目的。氯化鈉的用量不宜過多，否則溶液的相對密度增大，造成鹽酸小檗堿微細結(jié)晶呈懸浮態(tài)難以下沉。4在精制鹽酸小檗堿過程中，因鹽酸小檗堿放冷極易析出結(jié)晶，所以加熱煮沸后，應(yīng)迅速抽濾或保溫過濾，防止溶液在過濾過程中冷卻，析出鹽酸小檗堿結(jié)晶，過濾困難，降低收率。5進展柱層析別離時,洗脫過