三節(jié)植物離體培養(yǎng)體系建立

1、第三節(jié) 植物離體培養(yǎng)體系的建立1一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分： 通常將組織培養(yǎng)過程劃分為四個階段 1、起始培養(yǎng)階段（誘導(dǎo)階段） 2、增殖培養(yǎng)階段 3、生根培養(yǎng)階段 4、馴化移栽2 Stage 0 Selection & preparation of the mother plantsterilization of the plant tissue takes placeStage I - Initiation of cultureexplant placed into growth mediaStage II - Multiplicationexplant transferred to shoo

2、t media; shoots can be constantly dividedStage III - Rootingexplant transferred to root mediaStage IV - Transfer to soilexplant returned to soil; hardened off Steps of Micropropagation3二、外植體起始培養(yǎng)（無菌體系建立） 起始培養(yǎng)階段是指無菌體系的誘導(dǎo)和建立過程。主要受外植體、培養(yǎng)基、環(huán)境條件等因素的影響。4（一）外植體的起始培養(yǎng)過程 1、 起始培養(yǎng)的一般過程： A、選取適宜的基因型（品種）； B、選取適宜的外植

3、體；常用外植體有莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。 C、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。52、接種外植體的生長過程： A 細(xì)胞分裂的啟動； B 細(xì)胞增殖； C 組織和器官的形成。 6（二）影響外植體起始培養(yǎng)的因素： 1、影響外植體起始的因素 A 外植體的遺傳基礎(chǔ)及生理影響 B 培養(yǎng)基組成成分：礦物鹽類、微量有機(jī)成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳源、瓊脂、活性炭、酚類化合物、多胺等。 C 培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度 7A 外植體 (1) 外植體種類及基因型 (2) 外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài) (3) 外植體大小 (

4、4) 外植體的極性8外植體種類及基因型9單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。b. 木本植物較難誘導(dǎo)。c. 存在基因型差異（如番茄29%63%）d. 開始生長季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。10外植體狀態(tài)：11外植體大?。?外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。外植體極性： 當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。1213B、培養(yǎng)基 a 培養(yǎng)基類型: b 碳 源的影響:14 C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì) a 細(xì)胞分裂素和生長素類 b 赤霉素類 c 乙烯及其生物合成抑制劑 d 其他有機(jī)化合物15細(xì)胞分裂素和生長素：16a.部分植物單獨使用細(xì)胞分裂素（CTK）可以形成 無根苗b.部分

5、植物無根苗的形成需要細(xì)胞分裂素和生長素配合使用。c. 外源CTK與生長素必須維持適當(dāng)比例以改變內(nèi)源激素平衡，促進(jìn)器官發(fā)生。d. 不同細(xì)胞分裂素對分化的作用效果不同e. 苯基脲衍生物具有較高的細(xì)胞分裂素活性 （4PU、CPPU 、TDZ）17赤霉素類： 赤霉素與促進(jìn)細(xì)胞伸長和開花反應(yīng)，組織培養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用。 如馬鈴薯、甜菜、櫻桃等。乙烯及其生物合成抑制劑： 具有促進(jìn)和抑制兩方面的影響，但抑制作用多于促進(jìn)作用。因此在某些植物種類，乙烯抑制劑可以促進(jìn)芽的形成。 AgNO3 、CoCl、AVG18其他有機(jī)化合物： 腺嘌呤衍生物具有促進(jìn)器官分化作用。 椰子汁等物質(zhì)也具有促進(jìn)分化的功能。193. 培養(yǎng)條件及其他因素 （1）光照 通常10005000 Lx 16 小時光照。 非洲菊1000 lx ，洋蔥 16小時，馬鈴薯連續(xù)光照，葡萄要求短日照。 光質(zhì)也影響芽的再生，藍(lán)光有利于器官發(fā)生，煙草實驗，而紅光有利于根的發(fā)生。 20（2）溫度 大部分植物要求25 oC，少數(shù)要求較低溫度（15 20 oC）或較高的溫度（30 oC ） 如菖蒲、水仙、洋蔥、龜背竹等。 變溫處理對有些植物器官發(fā)生有促進(jìn)作用，如豌豆。21（3）濕度： 培養(yǎng)室相對濕度以7080為適宜，培養(yǎng)容器內(nèi)要保持適宜濕度，防止過于干燥或濕度過大。（4）氣體： 要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的