鈣、鎂、磷的測定課件

1、實驗血清鈣、鎂、磷的測定西安醫(yī)學院檢驗教研室 第1頁，共38頁。（一）血清鈣測定西安醫(yī)學院檢驗教研室 第2頁，共38頁。血漿鈣的存在形式血鈣可擴散鈣非擴散鈣離子鈣可溶性不解離的鈣鹽占血漿總鈣60%，能透過毛細血管壁與血漿蛋白結合，占血漿總鈣40%，不能透過毛細血管壁血漿中直接發(fā)揮生理作用的鈣相關知識 第3頁，共38頁。血鈣的測定包括總鈣測定和離子鈣測定法。總鈣測定方法包括同位素稀釋質譜法-決定性方法，原子吸收光譜法(AAS) 參考方法、分光光度法和絡合滴定法等。第4頁，共38頁。分光光度法中以鄰甲酚酞絡合酮法（OCPC）、甲基百里香酚藍比色法和偶氮胂比色法（Arsenazo colorimet

2、ry）最常用。離子鈣測定目前臨床最常用離子選擇電極法。第5頁，共38頁。血清總鈣測定鄰甲酚酞絡合酮比色法西安醫(yī)學院檢驗教研室 第6頁，共38頁。掌握：OCPC法測定血清總鈣的基本原理及提高準確性的方法。 熟悉：血清總鈣測定的注意事項。了解：總鈣與離子鈣的關系 實驗目的 第7頁，共38頁。 鄰甲酚酞絡合銅是金屬絡合染料，同時也是酸堿指示劑，在堿性條件下與鈣絡合，生成紫紅色絡合物。在600nm處有特征吸收，用8-羥基喹啉以消除標本中鎂離子的干擾，與同樣處理的的鈣標準液比較即可測得出血鈣含量。原理第8頁，共38頁。試劑與器材 1.R1：乙醇胺緩沖液。2.R2：OCPC、8-羥基喹啉3.氯化鈣標準液：

3、2.50mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即為工作液。4.分光光度計第9頁，共38頁。操作步驟 取試管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 標準管 測定管工作液 3.0 3.0 3.0 蒸餾水 0.06 標準品 0.06 血清 0.06 充分混勻， 37水浴5分鐘，在波長600nm處，以空白管調零，讀取吸光度值。第10頁，共38頁。計算 參考范圍：2.032.54mmol/L第11頁，共38頁。用血清或肝素抗凝血漿；不能用鈣的螯合劑及草酸鹽做抗凝劑的標本；膽紅素可產(chǎn)生負干擾，可用血清對照消除。鎂離子也可與OCPC試劑產(chǎn)生紫紅色絡合物，因此，試劑中加入8-羥基喹啉是起絡合鎂離子的作用，

4、以消除鎂離子的干擾。注意事項 第12頁，共38頁。pH對OCPC試劑的顯色有很大影響，pH10.512時，反應的敏感性最好，所以選用pH11.0為宜。此法對鈣離子有很高的敏感性，測定器皿要潔凈，所有試劑應在聚乙烯瓶內保存；且配制試劑最好用高質量的去離子水或重蒸餾水。第13頁，共38頁。臨床意義 血鈣增高常見于下列疾?。杭谞钆韵贆C能亢進癥、代謝性酸中毒、維生素D增多癥、多發(fā)性骨髓瘤、惡性腫瘤等。血鈣降低見于下列疾?。杭谞钆韵贆C能減退、慢性腎炎尿毒癥、佝僂病和軟骨病、大量輸入檸檬酸鹽抗凝血等。第14頁，共38頁。西安醫(yī)學院檢驗教研室 （二）血清鎂測定第15頁，共38頁。鎂是人體內含量占第四位的金屬

5、元素，50%以磷酸鹽、碳酸鹽、氟化物的形式存在于骨骼中，45%在細胞內液，細胞外液中僅占5%。血清中鎂55%為離子型，15%與磷酸鹽、枸椽酸鹽等形成復合物，30%與蛋白結合。相關知識 第16頁，共38頁。鎂測定的參考方法是原子吸收分光光度法，國內外多數(shù)實驗室采用金屬顯色染料直接顯色和比色分析，其中甲基麝香草酚藍、鈣鎂試劑廣泛應用于鎂的自動分析或手工操作。第17頁，共38頁。血清鎂測定鈣鎂試劑比色法西安醫(yī)學院檢驗教研室 第18頁，共38頁。掌握：鈣鎂試劑比色法測定血清鎂的基本原理。熟悉：有關試劑在反應中的作用。了解：本法檢測過程中的注意事項及血鎂檢測的臨床意義。實驗目的 第19頁，共38頁。 血

6、清中鎂在堿性環(huán)境中與Calmagite染料生成紫紅色絡合物，顏色的深淺與鎂的濃度成正比。與同樣處理的標準品比較，可求得鎂的含量。溶液中加入EGTA可消除鈣的干擾，使用表面活性劑可使蛋白膠體穩(wěn)定，不必去除蛋白質而直接測定鎂。原理第20頁，共38頁。試劑與器材 1R1：氫氧化鉀、表面活性劑。2. R2： Calmagite 、EGTA3. 氯化鎂標準液：1.0mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即為工作液。4.分光光度計第21頁，共38頁。操作步驟 取試管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 標準管 測定管工作液 3.0 3.0 3.0 蒸餾水 0.03 標準品 0.03 血清 0.03

7、充分混勻， 室溫放置3分鐘，在波長546nm處，以空白管調零，讀取吸光度值。第22頁，共38頁。計算 參考范圍：0.71.2mmol/L第23頁，共38頁。1.溶血標本對本測定有明顯的正干擾；脂血標本應去脂處理后，方可測定。2.試劑宜置于塑料瓶中保存。顯色劑已褪色則不可使用。3.試劑防止污染，如自來水、器皿清洗不潔、試劑交叉污染等。4.溶液中的EGTA可消除鈣的干擾；表面活性劑則可消除蛋白質的干擾。5.適合于手工操作及大多數(shù)自動化分析儀注意事項 第24頁，共38頁。臨床意義 血清鎂增高：服用治療劑過量、腎臟疾病、內分泌疾病（甲狀腺機能減退等）、多發(fā)性骨髓瘤等。血清鎂降低：鎂攝入減少、鎂由消化道

8、丟失、鎂由尿路丟失、內分泌疾病（甲亢、醛固酮增多癥等）等。第25頁，共38頁。西安醫(yī)學院檢驗教研室 （三）血清磷測定第26頁，共38頁。血清中的無機磷主要有H2PO4-和HPO42-兩種磷酸鹽陰離子。由于這兩種陰離子在不同的pH環(huán)境中能快速相互轉換，因而不能確切的說出無機磷酸鹽的分子量。目前常用的測定無機磷的方法有磷鉬酸還原法、染料結合法、紫外分光光度法、黃嘌呤氧化酶比色法、同位素吸收質譜法和原子吸收分光光度法。相關知識 第27頁，共38頁。磷測定的決定方法是同位素稀釋質譜法。WTO推薦的常用方法是比色法。目前我國推薦的常規(guī)方法是以硫酸亞鐵或米吐爾（對甲基氨基酚硫酸鹽）作為還原劑的還原鉬藍比色

9、法。第28頁，共38頁。血清磷測定還原鉬藍法西安醫(yī)學院檢驗教研室 第29頁，共38頁。掌握：還原鉬藍法測定血清磷的基本原理。熟悉：血清磷測定的臨床意義了解：本法檢測過程中的注意事項實驗目的 第30頁，共38頁。 在酸性溶液中磷與鉬酸銨起反應生成磷鉬酸復合物，對甲基氨基酚硫酸鹽（米吐爾）還原生成鉬藍，與同樣處理的標準液進行比較，可求得血磷的含量。原理第31頁，共38頁。試劑與器材 1磷工作液：鉬酸銨溶液、米吐爾溶液。2. 磷標準液：磷酸二氫鉀1.29mmol/L3. 分光光度計第32頁，共38頁。操作步驟 取試管3支，按下表操作。加入物（ml） 空白管 標準管 測定管工作液 4.0 4.0 4.

10、0 蒸餾水 0.1 標準品 0.1 血清 0.1 充分混勻， 37水浴5分鐘，在波長650nm處，以空白管調零，讀取吸光度值。第33頁，共38頁。計算 參考范圍：成人 0.971.62mmol/L 兒童 1.452.10mmol/L第34頁，共38頁。1.血標本宜采用血清或肝素抗凝的血漿。應避免使用枸櫞酸鈉、EDTA和草酸鹽作為抗凝劑。2.標本應避免溶血，因為紅細胞中含有高濃度的有機磷酯，在貯存期間易水解生成無機磷。3.米吐爾試劑宜少量配置，放置時間不宜過長。4.血清中磷是穩(wěn)定的， 4可穩(wěn)定數(shù)天，冷凍時可穩(wěn)定數(shù)月。避免水分的蒸發(fā)注意事項 第35頁，共38頁。臨床意義 血清磷增高：腎小管對磷的重吸收增強（甲狀旁腺機能減退）；排泄障礙（慢性腎炎晚期、尿毒癥）；維生素D過多；多發(fā)性骨髓瘤、淋