不同色譜條件對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉色譜分離的影響

1、不同色譜條件對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉色譜分離的影響摘要：目的：采用RP-HPLC法對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉進行分離。研究不同色譜條件對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉色譜分離的影響，建立較優(yōu)的色譜流出曲線。方法：采用不同型號C-18柱；流動相：0.02mol/L乙酸銨：甲醇（比例分別采用82：18、85：15以及88：12）；流速：分別采用0.8、1.0以及1.2mL/min；柱溫：30C；進樣量：10“L。檢測波長：254nm、230nm。結(jié)果：流速、流動相、波長對分離均有不同程度的影響。關鍵詞：高效液相色譜，色譜條件，色譜分離，影響添加劑苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標

2、，它直接關系到人們的身體健康，這些添加劑的長期過量食用對人體有一定危害,在我國食品添加劑使用衛(wèi)生標準l（GB2760-1996沖對這些添加劑的使用范圍和最大使用限量均有明確規(guī)定。目前，高效液相色譜（HPLC）作為化學分離分析的一種重要手段得到廣泛應用。高效液相色譜分析實現(xiàn)了分析速度快、分離效率高、樣品用樣量少且靈敏度高和操作自動化。采用RP-HPLC法對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉進行分離。研究不同色譜條件對苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉色譜分離的影響，建立較優(yōu)的色譜流出曲線具有重要意義。儀器與試劑1.1儀器：Shimadzu高效液相色譜儀（SPD-1OAVP紫外-可見檢測器、LC-6A高壓泵、CT

3、O-10ASVP柱溫箱含7725i型手動進樣器），浙大智達N2000工作站；SartoriusCP225D型電子天平；MilliporeMilli-Q型純水儀；SartoriusBP-20型pH計。1.2試劑：甲醇為色譜純；苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉對照品（Dr.Ehrenstorfer公司提供）；其余試劑均為分析純。材料與方法：2.1色譜條件色譜柱：不同型號C-18柱；流動相：0.02mol/L乙酸銨：甲醇（比例分別采用82:18、85:15以及88:12）；流速：分別采用0.8、1.0以及1.2mL/min,柱溫：30C；進樣量：10“L檢測波長：254nm、230nm。結(jié)果與分析不同波長

4、對分離的影響波長對半峰寬、保留值、理論塔板數(shù)、分離度的影響由表一可看出，在檢測波長分別為230nm和245nm,流速為l.Oml/min,流動相0.02mol/L乙酸銨：甲醇比例為82:18、85：15、88：12時，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的半峰寬、保留值、理論塔板數(shù)以及分離度的變化不大,說明波長對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的半峰寬、保留值、理論塔板數(shù)以及分離度影響不大。3.1.2波長對峰面積的影響由表一看出，不同流動相下，在波長為230nm時苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的峰面積比在254nm時的峰面積要大許多，表明波長對峰面積影響顯著。同一種物質(zhì)對不同波長光的吸光度不同，在波長為230nm時苯甲酸、山

5、梨酸、糖精鈉吸光度大于在254nm時的吸光度。表一：不同波長對分離的影流動半峰寬保留值理論塔板數(shù)分離度平均峰面積相比例波長(nm)苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸糖精鈉山梨酸R1R2苯甲酸山梨酸糖精鈉2540.1070.1380.0982.6123.2063.0133301523729902.30.9640400688560035404982:182300.1060.1310.0972.6073.1633.0613351551732302.60.533721749435656240886485:152540.0920.0960.0992.7773.0893.4345048573666

6、6622.14160599151273723972300.0920.0950.12.7723.0823.4215029583164841.9523806739459759240827788:122540.0980.0980.0983.0873.5294.0385497718476032.72.94050448996243590942300.0930.10.1063.183.6231.1726477727285822.73.28456221381645273483.2流速對分離的影響流速對半峰寬、保留值、理論塔板數(shù)的影響由表二可看出，在三個比例不同的流動相下，流速分別為流速1：0.8ml/min

7、、流速2：l.Oml/min、流速3：1.2ml/min時，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的半峰寬、保留值和理論塔板數(shù)均隨流速的增大而減小，柱效減小。3.2.2流速對分離度的影響由表二可知，流速對分離度影響不大。無論流速怎樣改變，在流動相比例為82：18時，糖精鈉與山梨酸分離度均小于1.5，不利于糖精鈉與是山梨酸分離。其他情況下分離度均大于1.5，分離較好。表二流速對分離的影響檢測波長：254nm流動相比例流速ml/min半峰寬W1/2保留值tR理論塔板數(shù)n分離度R苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸山梨酸糖精鈉R1R20.80.1270.1740.1193.2493.9823.74436262

8、90154842.40.951.00.1070.1380.0982.6123.2063.0133301299052372.30.9682:181.20.0930.1230.0932.1882.6782.523067262640682.10.80.80.110.1140.1203.4713.8614.29355166355709022.11.00.0920.0950.1002.7723.0823.4215029583164842285:151.20.0810.0840.0872.3262.5852.8654568524760081.91.90.80.1130.1170.1243.7484.276

9、4.8536095740084862.72.81.00.0980.0980.0983.0873.5294.0385497718476032.72.988:121.20.0880.0870.0972.6423.0173.4754994666271102.52.9（注：流動相0.02mol/L乙酸銨：甲醇比例為82：18時，R1為苯甲酸與糖精鈉的分離度，R2為糖精鈉與山梨酸的分離度，流動相比例為85：15與88：12時,R1為苯甲酸與山梨酸的分離度，R2為山梨酸與糖精鈉的分離度，下同。）3.3不同流動相對分離的影響3.3.1流動相對半峰寬的影響由表三可看出，在檢測波長為230nm與流速為1.0ml

10、/min條件下，流動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈為85：15時半峰寬最小，其次是88：12，半峰寬最大時是流動相比例為82：18。在檢測波長為245nm與流速為別為0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下，半峰寬同樣在流動相比例為85：15時最小，其次是88：12,半峰寬在流動相比例為82：18時最大。說明對半峰寬最適宜的流動相0.02mol/L乙酸銨與乙腈比例是82：18.3.3.2流動相對保留值與理論塔板數(shù)的影響由表三可知，檢測波長為230nm,流速為1.0ml/min條件下與檢測波長為254nm,流速分別為0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/

11、min條件下時，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保留值與理論塔板數(shù)隨乙酸銨與乙腈比例82：18、85：15、88：12逐漸增大，表明乙酸銨與乙腈混合流動相中乙酸銨比例增大，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保留值和理論塔板數(shù)也增大，柱效增大。3.3.3流動相對分離度的影響對分離度R1的影響同樣由表三可看出，檢測波長為230nm,流速為1.0ml/min條件下與檢測波長為254nm，流速分別為0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下時，流動相0.02mol/L乙酸銨：乙腈=85:15時分離度R1最小，流動相0.02mol/L乙酸銨：乙腈=82：18時分離度R1較大，流動相0.02mol/L

12、乙酸銨：乙腈=88：12時R1最大，且均大于1.5，有利于混合標樣的分離。對分離度R2的影響同樣由表三可看出，檢測波長為230nm,流速為1.0ml/min條件下與檢測波長為254nm，流速分別為0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下時，分離度R2隨乙酸銨與乙腈比例82：18、85：15、88：12逐漸增大，表明乙酸銨與乙腈混合流動相中乙酸銨比例增大，分離度R2也增大。表三不同流動相對分離的影響流速(ml/min)流動相比例半峰寬W1/2保留值tR理論塔板數(shù)n分離度R苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸山梨酸糖精鈉苯甲酸山梨酸糖精鈉R1R21.082:180.1060.1310.

13、0970.6073.0633.1613351323055172.60.5（波長85:150.0920.0950.1002.7723.0823.4215029583164841.952230nm)88:120.0930.1000.1063.1803.6231.1726477727285822.73.282:180.1270.1740.1193.2493.9823.7443626290154842.40.9585:150.1100.1140.123.4713.8614.29355166355709022.10.888:120.1130.1170.1243.7484.2764.85360957400

14、84862.72.882:180.1070.1380.0982.6123.2063.0133301299052372.30.9685:150.0920.0960.0992.7773.0893.43450485736666622.11.088:120.0980.0980.0983.0873.5294.0385497718476032.72.982:180.0930.1230.0932.1882.6782.523067262640682.10.885:150.0810.0840.0872.3262.5852.8654568524760081.91.91.288:120.0880.0870.0972

15、.6423.0173.4754994666271102.534、樣品分析由于各種物質(zhì)在一定的色譜條件下均有確定的保留值，因此保留值可作為一種定性指標，通過與表一數(shù)據(jù)與樣品在各種條件下所得的保留值相對照，可較準確地將樣品進行定性分析。4.1樣品一的分析流動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=82:18檢測波長：230nm檢測波長：254nm流速2：1.0mL/min圖一圖二出現(xiàn)的保留值：圖一：1.188、1.672、2.605、2.988圖二：1.207、1.857、1.982、2.457、2.848、3.040、3.215、4.157、4.565與表一相對照，圖一中峰三保留值為2.605與苯甲

16、酸保留值2.612相近，峰四保留值2.988與糖精鈉保留值3.013相近。圖二中峰四保留值2.457與苯甲酸保留值2.607相近，峰六保留值3.040與糖精鈉保留值3.061相近，峰七保留值3.215與山梨酸保留值3.163相近。初步判定樣品一中含苯甲酸與糖精鈉。流動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=85:15檢測波長：254nm圖四檢測波長：230nm流速2：1.0mL/min圖三時間tjnixi)時間Sin)出現(xiàn)的保留值：圖三：1.188、1.687、1.860、2.790、3.085、3.443圖四：1.182、1.640、2.782、3.082、3.423與表一相對照圖三中峰四保留值

17、2.790與苯甲酸保留值2.772相近，峰五保留值3.085與山梨酸保留值3.082相近峰六保留值3.443與糖精鈉保留值3.421相近。圖四中峰三保留值與苯甲酸保留值2.777相近，峰四保留值3.082與山梨酸保留值3.089相近，峰五保留值3.423與糖精鈉保留值3.434相近。初步判定樣品二中含苯甲酸、糖精鈉。流動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=88:12檢測波長：230nm流速2：1.0mL/min檢測波長：254nm圖五圖六出現(xiàn)的保留值：圖五：1.182、1.707、1.890、3.190、3.632、4.190圖六：1.182、1.673、3.198、3.632、4.198與表

18、一相對照，圖五中峰四、峰五、峰六的保留值與苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保留值3.180、3.623、4.172相近。圖六中峰三、峰四、峰五的保留值與苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保留值3.087、3.529、4.038相近。初步判定樣品一中含苯甲酸、糖精鈉。綜上所述，最終可判定樣品一中含苯甲酸、糖精鈉。樣品二流動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=82:18檢測波長：230nm流速2：1.0mL/min檢測波長：254nm圖1圖2出現(xiàn)的保留值：圖1：1.215、1.707、1.907、2.298、2.773、3.002、3.215圖2：1.223、1.682、1.907、2.182、2.315、2.78

19、2、3.232與表一對照，圖1中峰五、峰六、峰七與苯甲酸、糖精鈉、山梨酸保留值2.6073.061、3.163相近，圖2中峰六、峰七保留值與苯甲酸、山梨酸保留值2.612、3.206相近，初步判定樣品中含山梨酸。動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=85:15檢測波長：254nm檢測波長：230nm流速2：1.0mL/min圖3圖4出現(xiàn)的保留值：圖3：1.183、1.675、1.873、2.120、2.332、2.483、2.783、3.073、3.427圖4：1.185、1.632、1.852、2.482、2.778、3.077與表一相對照，圖3中峰七、峰八、峰九的保留值與苯甲酸、山梨酸、糖

20、精鈉的保留值2.772、3.082、3.421相近，圖4中峰四、峰五與苯甲酸、糖精鈉的保留值2.326、2.865相近，初步判定樣品中含苯甲酸、糖精鈉，可能含山梨酸。動相：0.02mol/L乙酸銨：乙腈=88:12檢測波長：230nm檢測波長：254nm流速2：1.0mL/min圖6圖5出現(xiàn)的保留值：圖5：1.198、1.690、1.890、3.198、3.625、4.198圖6：1.198、1.640、3.623與表一相對照，圖5中峰四、峰五、峰六的保留值與苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保留值3.180、3.623、4.172相近，圖6中峰三的保留值與苯甲酸的保留值3.748相近。初步判定含苯甲酸，可能含山梨酸與糖精鈉。綜合評價，樣品二中含苯甲酸、山梨酸、糖精鈉4討論:在檢測波長分別為230nm和245nm,流速為l.Oml/min,流動相0.02mol/L乙酸銨：甲醇比例為82:18、85：15、88：12時，波長對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的半峰寬