木犀草素聯(lián)用紫杉醇對食管癌的體內(nèi)外抗腫瘤作用及機(jī)制研究

1、木犀草素聯(lián)用紫杉醇對食管癌的體內(nèi)外抗腫瘤作用及機(jī)制研究目的 1. 探討木犀草素與紫杉醇在體外聯(lián)用對食管癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡的影響及作用機(jī)制。 2. 探討木犀草素與紫杉醇在體內(nèi)聯(lián)用對食管癌裸鼠移植瘤生長、凋亡的影響及分子機(jī)制 , 并對此給藥方案的潛在毒性進(jìn)行初步評價(jià)。方法1.采用SR收驗(yàn)檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對于食管癌細(xì)胞活力的影響。 使用細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對食管癌細(xì)胞增殖能力的影響。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對食管癌細(xì)胞克隆形成的影響。 2. 采用劃痕實(shí)驗(yàn)、 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對于食管癌細(xì)胞遷移的影響 ; 使用倒置顯

2、微鏡觀察木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對食管癌細(xì)胞形態(tài)的影響 ; 采用 Western Blotting 實(shí)驗(yàn)檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對SIRT1 及 EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)的影響。3. 使用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對于食管癌細(xì)胞凋亡的影響 , 使用活性氧檢測試劑盒檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對于食管癌細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的影響 , 采用 Western Blotting 實(shí)驗(yàn)檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對線粒體凋亡通路、ROS/JNK!路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。4.建立食管癌細(xì)胞裸鼠移植 瘤模型 , 檢測木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對于食管癌裸鼠移植瘤生長的影響。通過HE染色及TUNEL色實(shí)驗(yàn)檢測木犀草素與紫

3、杉醇聯(lián)用對于食管癌細(xì)胞 體內(nèi)凋亡的影響。通過HE染色實(shí)驗(yàn)及裸鼠體重監(jiān)測對兩種藥物聯(lián)用的潛在毒性 進(jìn)行初步評價(jià)。通過Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測裸鼠移植瘤組織中 SIRT1、EMT相關(guān)蛋白、線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白、ROS/JNKffi路相關(guān)蛋白表達(dá)情況，探討木犀草素與紫 杉醇聯(lián)用的體內(nèi)機(jī)制。 結(jié)果 1. 木犀草素與紫杉醇聯(lián)用協(xié)同抑制食管癌細(xì)胞活力 木犀草素與紫杉醇聯(lián)用協(xié)同抑制食管癌細(xì)胞增殖及克隆形成。2. 木犀草素和紫杉醇聯(lián)用協(xié)同抑制食管癌細(xì)胞遷移并改變食管癌細(xì)胞形態(tài);木犀草素和紫杉醇聯(lián)用協(xié)同抑制 SIRT1 蛋白的表達(dá), 抑制間質(zhì)標(biāo)志蛋白NCadherin、0-Catenin、Vi

4、mentin 的表達(dá)，促進(jìn)上皮標(biāo)志蛋白 E-Cadherin、 Claudin-1 、 ZO-1 的表達(dá)。 3. 木犀草素與紫杉醇聯(lián)用可協(xié)同促進(jìn)食管癌細(xì)胞凋亡,協(xié)同抑制抗凋亡蛋白 Bcl-2 、 Mcl-1 的表達(dá) , 促進(jìn)促凋亡蛋白Bax 的表達(dá), 促進(jìn)BH3-only 死亡因子 Noxa 的表達(dá) , 促進(jìn) Cleaved Caspase-9 蛋白和 Cleaved Caspase-3 蛋白的表達(dá)。木犀草素與紫杉醇聯(lián)用可協(xié)同提高食管癌細(xì)胞內(nèi)的RO冰平，協(xié)同上調(diào)p-ASK1、p-MKK4 JNK及p-JNK蛋白的表達(dá)。4.在食管癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型上， 木犀草素與紫杉醇聯(lián)用可以協(xié)同抑制裸鼠移植瘤的生長并誘導(dǎo)食管癌裸鼠移植瘤細(xì)胞的體內(nèi)凋亡; 木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對食管癌裸鼠移植瘤中SIRT1、 EMT相關(guān)蛋白、線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白、ROS/JNK!路相關(guān)蛋白的影響與體外結(jié)果 基本一致。木犀草素與紫杉醇聯(lián)用對裸鼠體重沒有明顯影響, 對心臟、 肝臟、 脾臟、 肺、腎臟沒有明顯的毒性。結(jié)論1. 木犀草素與紫杉醇在體外聯(lián)用時(shí)可協(xié)同調(diào)控食管癌細(xì)胞的增殖、 遷移及凋亡; 其抑制細(xì)胞遷移的分子機(jī)制與抑制 SIRT1 及細(xì)胞 EMT進(jìn)程相關(guān)，其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制與ROS/JNK!路和線粒體凋亡通