抗溫和氣單胞菌單克隆抗體的制備及初步鑒定

1、抗暖和睦單胞菌單克隆抗體的制備及開端斷定陳瑞,唐旭,于輝,金曉航,黃威權(quán),師開國【關(guān)鍵詞】暖和睦單胞菌;,單克隆抗體;,雜交瘤摘要目的:制備抗暖和睦單胞菌(Aernassbria,As)單克隆抗體(Ab)并舉行斷定。要領(lǐng):以滅活的暖和睦單胞菌免疫BALB/小鼠,接納通例雜交瘤技能制備抗暖和睦單胞菌Ab。用間接ELISA法對Ab的特性舉行開端斷定。效果:得到6株能不變排泄抗暖和睦單胞菌Ab的雜交瘤細(xì)胞株,別離定名為1A8、2A8、2F11、36、3D11、4G2。經(jīng)測定雜交瘤細(xì)胞造就上清及其誘生的腹水Ab效價(jià)別離為110-2110-3、110-5110-6。6株雜交瘤細(xì)胞系所排泄的Ab亞類是:2

2、A8、2F11為IgG1,1A8、3D11為IgG2a,36為IgG2b,4G2為IgG3。此中Ab36經(jīng)交織反響試驗(yàn)證明,與弧菌屬其他幾種細(xì)菌均不起反響,特異性強(qiáng)。結(jié)論:樂成地制備了抗暖和睦單胞菌Ab的雜交瘤細(xì)胞株,為該病的免疫學(xué)診斷及防治提供了基矗關(guān)鍵詞暖和睦單胞菌;單克隆抗體;雜交瘤暖和睦單胞菌是我國養(yǎng)殖淡水魚類及海產(chǎn)物中最常見的致病性弧菌之一1,也是我國沿海地域人群中最常見的致病性弧菌之一2。此菌可以通過受熏染的魚類經(jīng)消化道熏染人,造成腹瀉、敗血癥等疾病而嚴(yán)峻威脅人類康健。如今,對暖和睦單胞菌病的臨床診斷照舊依靠臨床不雅察、剖解及一樣平常細(xì)菌學(xué)查抄要領(lǐng),其檢測速率和正確性均受到必然的限

3、定。對該菌病的防治重要是利用抗生素及其他化學(xué)藥物等傳統(tǒng)要領(lǐng),對魚類食品的營養(yǎng)品格和情況衛(wèi)生都存在極大的損害。而單克隆抗體Ab應(yīng)用在致病性細(xì)菌的診斷及防治等方面有其他要領(lǐng)所無法相比的良好性。鑒于國表里尚未見抗該菌Ab的報(bào)道,我們制備了抗該菌的Ab,以為該病的免疫學(xué)診斷及防治提供基矗1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料暖和睦單胞菌由福建省淡水水產(chǎn)研究所提供,經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)隸屬西京病院查驗(yàn)科全主動(dòng)細(xì)菌生化斷定儀斷定證明。骨髓瘤細(xì)胞Sp2/0細(xì)胞,系第四軍醫(yī)大學(xué)國度“863課題組惠贈,交融前使細(xì)胞處于對數(shù)生恒久。BALB/小鼠8周齡、雌性,由本校實(shí)行動(dòng)物中央提供。HRP標(biāo)識表記標(biāo)幟的羊抗鼠IgG抗體購自華美生物工程

4、公司。Ig亞類斷定試劑盒系本校免疫學(xué)教研室惠贈。1.2要領(lǐng)2效果2.1雜交瘤細(xì)胞系的創(chuàng)立共舉行2次細(xì)胞交融,交融率別離為635%、561%?？贵w陽性率別離為283%、306%。克隆化后,共得到6株能不變排泄Ab的陽性細(xì)胞株,別離定名為:1A8、2A8、2F11、36、3D11和4G2。2.2Ab的特性斷定1效價(jià)測定:雜交瘤細(xì)胞造就上清及BALB/小鼠腹水Ab的效價(jià)別離為110-2110-3和110-5110-6。2Ab的Ig亞類斷定:經(jīng)斷定2A8、2F11為IgG1,1A8、3D11為IgG2a,36為IgG2b,4G2為IgG3。3Ab與其他相干細(xì)菌的交織反響試驗(yàn)4,5見表1。表1抗暖和睦單

5、胞菌Ab與相干菌的反響性略3討論氣單胞菌的構(gòu)成以嗜水氣單胞菌和暖和睦單胞菌占絕對上風(fēng)6,7。暖和睦單胞菌是一類重要漫衍于淡水水體的細(xì)菌,可見于河道、湖泊、池塘等多種水域,魚類暖和睦單胞菌熏染最嚴(yán)峻的是可以引起出血性敗血癥,此病常爆發(fā)盛行,殞命率極高,嚴(yán)峻危害漁業(yè)、水財(cái)產(chǎn)的生長。此菌可通過受熏染的魚類或被污染的水源經(jīng)消化道熏染人而造成腹瀉,其引起肝膽疾病及惡性腫瘤等免疫成效低下者的熏抱病例不竭增長,病死率較高8,如今以為其產(chǎn)生的腸毒素和細(xì)胞毒素是重要的致病因素9。以往對該菌的分散斷定多接納通例要領(lǐng),操縱技能較繁瑣,實(shí)行工程多達(dá)幾十種,斷定本錢昂揚(yáng),且需不雅察47d才氣作出陳訴,常給實(shí)行診斷帶來困

6、難。而Ab應(yīng)用可以降服該菌傳統(tǒng)診斷及防治等方面的明顯缺點(diǎn)。我們用甲醛滅活的暖和睦單胞菌菌體免疫BALB/小鼠,經(jīng)篩癬克隆化得到6株能不變排泄Ab的雜交瘤細(xì)胞系,此中1株經(jīng)交織反響試驗(yàn)證明,與弧菌屬其他幾種細(xì)菌均不起反響,特異性強(qiáng)。其他幾株Ab那么與弧菌屬其他幾種常見細(xì)菌存在差異程度的交織反響。按照以上效果,Ab36可用于特異性地檢測暖和睦單胞菌、創(chuàng)立檢測該菌的免疫學(xué)要領(lǐng)和以免疫構(gòu)造化學(xué)要領(lǐng)檢測出該菌熏染的病理標(biāo)本。抗暖和睦單胞菌Ab的樂成制備為該菌的免疫學(xué)檢測及防治提供了有效試劑。參考文獻(xiàn):1趙俊華,楊澤,曾衛(wèi)東,等.出口水產(chǎn)養(yǎng)殖場鮮活淡水魚和塘水中致病性弧菌的視察研究J.觀光醫(yī)學(xué)科學(xué),202

7、2,102:1-15.2吳玲,張景隆,倪語星,等.我國沿海五省市致病性弧菌的漫衍視察及病原學(xué)研究J.中華盛行病學(xué)雜志,1998,195:301-303.3徐志凱.有用單克隆抗體技能.西安:陜西科學(xué)技能出書社,1992:27-102.4李別虎,李元,白光春,等.抗創(chuàng)傷弧菌單克隆抗體細(xì)胞系的創(chuàng)立及其特性斷定J.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2001,171:78.5夏永娟,黃威權(quán),李元,等.抗鰻弧菌單克隆抗體細(xì)胞系的創(chuàng)立及其特性斷定J.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2000,161:81.6GhengheshKS,ElGhdbanA,DkakniR,etal.Prevalene,speiesdifferentia

8、tin,haelytiativity,andantibitisuseptibilityfaernadsinuntreatedellaterJ.eInstsaldruz,2001,962:169-173.7ParkYH,LeeH,SngHG,etal.Reentinreaseinantibiti-resistantirrganissinpatientsithspntaneusbaterialperitnitisadverselyaffetsthelinialuteinkreaJ.JGastrenterlHepatl,2022,188:927-933.8曲芬,崔恩博,夏灼爍,等.肝硬化氣單胞菌敗血癥50例臨床特性及轉(zhuǎn)歸