solidworks二次開發(fā)及SNP開發(fā)驗(yàn)證的研究方法和技術(shù)路線

1、2.3Solidworks二次開發(fā)Solidworks是在windows環(huán)境下實(shí)現(xiàn)的三維機(jī)械CAD軟件。它采用了windows用戶界面,擁有強(qiáng)大、動(dòng)態(tài)激活的屬性管理器,以靈活的草圖繪制為基礎(chǔ),輔助以特征建立能力以及裝配控制功能，并提供了自由、開放、功能完整的API開發(fā)工具接口。這些功能使solidworks實(shí)現(xiàn)了三維CAD軟件所提倡的易操作性、高效性以及功能完全性。Solidworks軟件進(jìn)行參數(shù)化建模的主要技術(shù)特點(diǎn)是：（1）基于特征。將某些具有代表性的平面幾何形狀定義為特征,并將其所有尺寸存為可調(diào)參數(shù),進(jìn)而形成實(shí)體,以此為基礎(chǔ)來進(jìn)行更為復(fù)雜的幾何形體的構(gòu)造。（2）全尺寸約束。將形狀和尺寸聯(lián)系

2、起來考慮,通過尺寸約束來實(shí)現(xiàn)對(duì)幾何形狀的控制。（3）尺寸驅(qū)動(dòng)設(shè)計(jì)通過編輯尺寸數(shù)值來驅(qū)動(dòng)幾何形狀的改變,尺寸參數(shù)的修改將導(dǎo)致其他相關(guān)模塊中的相關(guān)尺寸的全盤更新。采用這種技術(shù)的理由在于它能夠徹底地克服了自由建模的無(wú)約束狀態(tài),幾何形狀均以尺寸的形式而被牢牢地控制住。Solidworks通過OLE（對(duì)象的嵌入與鏈接）或者COM為用戶提供了自由開放、功能完整的二次開發(fā)接口（API）。因此，凡支持OLE和COM編程的開發(fā)工具，諸如VisualBasic、VisualC+等均可用于Solidworks的二次開發(fā)，以創(chuàng)建出使用人員所需的、專門化的Solidworks應(yīng)用模塊。Solidworks支撐Activ

3、eXAutomation技術(shù)，在VB環(huán)境下建立客戶程序可以直接訪問Solidworks中的對(duì)象，在這里，為求方便，我們可將solidworks理解為一個(gè)服務(wù)程序，把二次開發(fā)工具的VB程序作為客戶程序，它們之間只是服務(wù)器與客戶的關(guān)系。用戶主要在VB上進(jìn)行操作，VB就可以驅(qū)動(dòng)Solidworks完成相應(yīng)的工作。通過調(diào)用API對(duì)象屬性的設(shè)置和方法，就可以在開發(fā)的程序中實(shí)現(xiàn)與solidworks相同的功能。對(duì)于一般零件我們可采用人機(jī)交互的形式建立模型，設(shè)定合理的設(shè)計(jì)變量，再通過VB程序驅(qū)動(dòng)設(shè)計(jì)變量實(shí)現(xiàn)模型的更新方法，系統(tǒng)開發(fā)流程如圖2-5示：建立零件三維模型設(shè)定尺寸變量引用solidworks對(duì)象庫(kù)編

4、寫VB應(yīng)用程序圖2-5二次開發(fā)幾乎是所有應(yīng)用CAD軟件企業(yè)的共同需求，商品化軟件開發(fā)機(jī)構(gòu)為了開拓市場(chǎng)、擴(kuò)大市場(chǎng)份額、保持產(chǎn)品的市場(chǎng)地位，也非常重視企業(yè)在應(yīng)用CAD軟件時(shí)的這個(gè)共性需求。本設(shè)計(jì)闡述了利用SolidWorksAPI接口開發(fā)嵌入式功能模塊以擴(kuò)充原SolidWorks功能的關(guān)鍵技術(shù)，已在企業(yè)SolidWorks二次開發(fā)中得以廣泛運(yùn)用，并且形成了客戶化定制的SolidWorks軟件系統(tǒng)，具有明顯的實(shí)用價(jià)值。其中SolidWorksAPI(SolidWorksApplicationProgrammingInterface)提供了支持二次開發(fā)的應(yīng)用編程接口，通過該接口可以開發(fā)嵌入式功能模塊以

5、擴(kuò)充原SolidWorks的功能，形成客戶化定制的SolidWorks軟件系統(tǒng)。本節(jié)對(duì)SolidWorks二次開發(fā)接口API對(duì)象、DLL動(dòng)態(tài)連接庫(kù)三種SolidWorks二次開發(fā)關(guān)鍵技術(shù)分別進(jìn)行分析和簡(jiǎn)要論述。2.3.1SolidWorks二次開發(fā)接口API對(duì)象SolidWorksAPI(ApplicationProgrammingInterface)是SolidWorks基于ActiveXAutomation的應(yīng)用編程接口，利用SolidWorksAPI可以方便高效地設(shè)計(jì)具有Windows風(fēng)格的、與SolidWorks無(wú)縫集成的應(yīng)用程序。SolidworksAPI的調(diào)用是指調(diào)用Solidwo

6、rks的事件、方法、屬性及相關(guān)功能,Solidworks是一個(gè)自上而下的樹形網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，調(diào)用下層對(duì)象時(shí)，一定要先調(diào)用上層對(duì)象。Solidworks應(yīng)用程序?qū)ο笫撬姓{(diào)用SolidworksAPI功能的最頂層，也是調(diào)用其他對(duì)象的入口。在其之下是Solidworks活動(dòng)文檔對(duì)象，它包括“零件環(huán)境”、“裝配環(huán)境”“工程圖環(huán)境”及“非工作環(huán)境”四個(gè)狀態(tài)。得到的Solidworks活動(dòng)文檔對(duì)象主要是當(dāng)前活動(dòng)的工作環(huán)境,一旦上述兩個(gè)對(duì)象調(diào)用之后,就可以調(diào)用戶提供的其他功能。在進(jìn)行二次開發(fā)的過程中,只有調(diào)用正確的對(duì)象,才可以調(diào)用對(duì)象相應(yīng)的事件、屬性、方法及相關(guān)函數(shù)。所以，API的層次調(diào)用對(duì)二次開發(fā)有著重要的意

7、義。Solidworks的OLE對(duì)象總共可以分為十個(gè)大類，數(shù)百個(gè)對(duì)象，涵蓋從Solidworks基本操作如打開、保存等到建模、修改等各個(gè)功能。但是需要注意并不是所有的對(duì)象都可以被VB所調(diào)用。Solidworks對(duì)象,可以實(shí)現(xiàn)應(yīng)用程序的最基本的操作.如創(chuàng)建、打開、關(guān)閉和退出Solidworks文檔，設(shè)置當(dāng)前的活動(dòng)文檔，并可以對(duì)Solidworks的系統(tǒng)環(huán)境進(jìn)行設(shè)置。ModelDoc對(duì)象屬于模型層，是sldworks的子對(duì)象。用ModelDoc對(duì)象可以實(shí)現(xiàn)視圖設(shè)置、輪廓線修改、參數(shù)控制、對(duì)象選擇打開和保存文檔、創(chuàng)建編輯特征參量、創(chuàng)建框架等與實(shí)體模型相關(guān)的各類操作，ModelDoc對(duì)象包括PartD

8、oc、AssemblyDoc和DrawingDoc等三個(gè)常用的對(duì)象。不管是用何種編程語(yǔ)言對(duì)Solidworks進(jìn)行外部開發(fā)或在其內(nèi)部進(jìn)行開發(fā)，都是通過調(diào)用Solidworks的對(duì)象體系結(jié)構(gòu)來進(jìn)行的。Solidworks的API編程接口封裝了所有的ActiveX對(duì)象供編程所用。Solidworks的對(duì)象層次結(jié)構(gòu)可以描述為自上而下的樹型結(jié)構(gòu)模型如圖所示。最低層的根對(duì)象是Sldworks對(duì)象，其他對(duì)象都是他的子對(duì)象。其中父對(duì)象與子對(duì)象之間的關(guān)系并不是繼承關(guān)系，而是包含關(guān)系也就是說如果VB要與Solidworks的一個(gè)特定對(duì)象通信，必須先從Sldworks對(duì)象對(duì)其子對(duì)象進(jìn)行遍歷，直到找到該特定的對(duì)象。

9、另外，本節(jié)所提供的Solidworks對(duì)象表是所有SolidworksActive對(duì)象的總括，其中的箭頭符號(hào)表示該對(duì)象下面還包含子對(duì)象。SolidWorksAPI是一個(gè)自上而下的多層次的樹形網(wǎng)絡(luò)（層次結(jié)構(gòu)見圖）。SldWorks是根目錄對(duì)象類，位于應(yīng)用程序的底層，是訪問SolidWorksAPI所有對(duì)象的入口程序。接口對(duì)SolidWorksAPI的調(diào)用實(shí)行逐級(jí)尋訪，即先調(diào)用能實(shí)現(xiàn)所需功能的對(duì)象的父對(duì)象，然后調(diào)用與父對(duì)象相關(guān)的子對(duì)象，如果子對(duì)象所封裝的屬性和方法不能實(shí)現(xiàn)所需要的功能，則繼續(xù)調(diào)用該子對(duì)象的下級(jí)子對(duì)象，如此逐級(jí)遍歷，直到結(jié)束。對(duì)SolidWorksAPI對(duì)象的調(diào)用不能跨級(jí)，因?yàn)楦笇?duì)象

10、與子對(duì)象是包含關(guān)系，而不是繼承關(guān)系，父對(duì)象包含子對(duì)象的屬性和方法，子對(duì)象自身不帶有該屬性和方法，跨級(jí)調(diào)用程序?qū)?huì)出錯(cuò)。swconst.bas，SolidWorks安VB模塊，將SolidWorksAPI的常量SolidWorks提供了一個(gè)BASIC模塊該模塊包含了預(yù)先定義的許多SolidWorks常數(shù)值，swconst.bas在裝目錄下的samplesappComm文件夾內(nèi)。編制應(yīng)用程序時(shí)，添加swconst.bas包含在VB工程中，否則API函數(shù)調(diào)用將會(huì)出錯(cuò)。SolidworksAPI中的各對(duì)象關(guān)系圖2-6對(duì)象模型OtherObject:EnumLpops2EnumComponentEnum

11、DrSectionEnumSketchHatchesEnumSketchPointsEnumSketchSegmentEnumDisplaydimentionsEnumModelViews圖2-7solidworks對(duì)象模型在調(diào)用solidworks的過程中，我們只有對(duì)各個(gè)函數(shù)之間的關(guān)系和層次分的明了清楚，才能保證正確調(diào)用。如上圖表所示，在編程中可以用作對(duì)象參考。要調(diào)用solidworks的API其他功能，必須先調(diào)用接口對(duì)象。一般的在程序里寫作：DimswAppAsObjectSetswApp=CreateObject(SldWorks.Application)2.3.2DLL動(dòng)態(tài)連接庫(kù)Sol

12、idworks本身自帶有程序編輯器VBA，通過宏錄制可以實(shí)現(xiàn)對(duì)SolidWorks的驅(qū)動(dòng)，應(yīng)用程序在SolidWorks環(huán)境下直接執(zhí)行，編程時(shí)不需要考慮SolidWorks的庫(kù)文件，而直接調(diào)用SolidWorksAPI所有函數(shù)及對(duì)象，隨時(shí)編輯應(yīng)用程序，環(huán)境支持如單步調(diào)試、逐過程調(diào)試等多種調(diào)試手段，調(diào)試的同時(shí)可進(jìn)行修改。但VBA的功能較弱，所提供的控件數(shù)目較少，對(duì)象的屬性、事件以及方法等不完全，用VBA二次開發(fā)SolidWorks將頗費(fèi)周折，選用DLL動(dòng)態(tài)連接庫(kù)技術(shù)從外部操作SolidWorks非常方便。DLL動(dòng)態(tài)連接庫(kù)(DynamicLinkLibrabry)是運(yùn)行時(shí)連接的可執(zhí)行代碼和數(shù)據(jù)模塊

13、，用它能節(jié)省內(nèi)存、方便地進(jìn)行應(yīng)用程序中的參數(shù)傳遞和通信、實(shí)現(xiàn)代碼共享、升級(jí)方便、且獨(dú)立于編程語(yǔ)言。SolidWorks允許用戶建立獨(dú)立的可執(zhí)行文件(StandaloneEXE)、應(yīng)用型動(dòng)態(tài)鏈接庫(kù)文件(UserDLL)及擴(kuò)展型動(dòng)態(tài)鏈接庫(kù)文件(ExtensionDLL)DLL是基于Windows程序設(shè)計(jì)的一個(gè)非常重要的組成部分。在建立應(yīng)用程序的可執(zhí)行文件時(shí)，不必將DLL鏈接到程序中，而是在運(yùn)行時(shí)動(dòng)態(tài)裝載DLL,裝載時(shí)DLL被映射到進(jìn)程的地址空間中。在每次運(yùn)行SolidWorks時(shí)，DLL文件自動(dòng)裝載，操作方便。SolidworksAPI的調(diào)用是指調(diào)用Solidworks的事件、方法、屬性及相關(guān)功能

14、，Solidworks是一個(gè)自上而下的樹形網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，調(diào)用下層對(duì)象時(shí)，一定要先調(diào)用上層對(duì)象。Solidworks應(yīng)用程序?qū)ο笫撬姓{(diào)用SolidworksAPI功能的最頂層，也是調(diào)用其他對(duì)象的入口。在其之下是Solidworks活動(dòng)文檔對(duì)象，它包括“零件環(huán)境”、“裝配環(huán)境”、“工程圖環(huán)境”及“非工作環(huán)境”四個(gè)狀態(tài)。得到的Solidworks活動(dòng)文檔對(duì)象主要是當(dāng)前活動(dòng)的工作環(huán)境，一旦上述兩個(gè)對(duì)象調(diào)用之后,就可以調(diào)用用戶提供的其他功能。在進(jìn)行二次開發(fā)的過程中,只有調(diào)用正確的對(duì)象,才可以調(diào)用對(duì)象相應(yīng)的事件、屬性、方法及相關(guān)函數(shù)。所以，API的層次調(diào)用對(duì)二次開發(fā)有著重要的意義。在接下來的幾個(gè)章節(jié)中本設(shè)計(jì)

15、將對(duì)輪腿機(jī)構(gòu)的部分組成構(gòu)件作參數(shù)化分析，并注相應(yīng)程序代碼。SNP開發(fā)/驗(yàn)證的研究方法和技術(shù)路線分子標(biāo)記：分子標(biāo)記，我想這部分是我們分子標(biāo)記組最核心的任務(wù)?，F(xiàn)在，我們沒有任何可用的標(biāo)記檢測(cè)我們的定位材料。即使想要驗(yàn)證已經(jīng)定位的QTLs，我們也需要相對(duì)應(yīng)的區(qū)間內(nèi)的分子標(biāo)記，尤其是SNP標(biāo)記。全基因組SNPAffymetrix芯片：一套完整的全基因組的SNP芯片，相對(duì)于Douglas體系，其操作簡(jiǎn)單，高通量?？梢灾苯訉?duì)定位群體進(jìn)行初定位的掃描或是對(duì)育種材料的背景進(jìn)行分析。在國(guó)家玉米改良中心，有一套3k的Illumina芯片，就是用來對(duì)玉米材料進(jìn)行高通量檢測(cè)，基因型檢測(cè)結(jié)果通常可以用來QTLs初定位，

16、育種材料的群體劃分與純度鑒定以及低密度的關(guān)聯(lián)分析等。在此，我建議我們應(yīng)該開發(fā)一套番茄基因型檢測(cè)的芯片。目前，只是查找到Illumina芯片有一套全基因SNP信息，包含7,720條探針。而Affymetrix公司目前并沒有相應(yīng)的產(chǎn)品。但是通過跟Affymetrix公司了解，可以利用Illumina芯片已有的結(jié)果進(jìn)行開發(fā)。番茄目前測(cè)序結(jié)果顯示其全基因組大小為760Mb，而玉米為2,500Mb，但是他們包括的基因數(shù)目30,000個(gè)，整體情況相近。另外，番茄作為自交植物，其LD的衰減值應(yīng)該更大，有效的歷史重組會(huì)更少，遺傳多樣性低。因此，綜合考慮，我建議我們可以開發(fā)3k芯片，應(yīng)該可以滿足大多數(shù)研究材料、

17、育種材料的基因型檢測(cè)需求。雖然目前下一代測(cè)序技術(shù)蓬勃發(fā)展，但是對(duì)于用于基因型檢測(cè)來講，其數(shù)據(jù)分析與成本相對(duì)于芯片都要更復(fù)雜和更高?？傊?，我們番茄處于剛剛發(fā)展階段，我認(rèn)為就基因型檢測(cè)方面，芯片有其很高的應(yīng)用價(jià)值。即使像玉米，這樣測(cè)序技術(shù)發(fā)展很多年的材料，芯片技術(shù)也在應(yīng)用。全基因組SNPDouglas：當(dāng)用Affymetrix芯片檢測(cè)鑒定完番茄基因型并完成基因型分析之后，1）對(duì)于優(yōu)良的QTLs或是基因，我們可以直接選擇覆蓋整個(gè)區(qū)間的分子標(biāo)記運(yùn)行Douglas系統(tǒng)進(jìn)行分子標(biāo)記輔助育種，2）對(duì)于需要進(jìn)一步驗(yàn)證的QTLs，我們也可以利用Douglas系統(tǒng)只檢測(cè)材料覆蓋定位區(qū)間的基因型，而不需要再一次利用

18、Affymetrix芯片或是其他方法進(jìn)行全基因檢測(cè)（圖1.1）。3）對(duì)于一些高信息量，均勻分布在全基因的SNP分子標(biāo)記，可以用來構(gòu)建番茄的指紋圖譜。因此，一套完整能夠與Affymetrix芯片相對(duì)應(yīng)的SNP標(biāo)記是必不可少的。圖1.1QTL區(qū)間上的SNP標(biāo)記分布圖注：藍(lán)色為深入片段，棕色為背景染色體。1.3Douglas系統(tǒng)下SNP標(biāo)記的開發(fā)通過建立穩(wěn)定、可靠的番茄DNA提取流程與優(yōu)化PCR反應(yīng)體系，篩選具有一致性、穩(wěn)定性與多態(tài)性SNP分子標(biāo)記引物，從而構(gòu)建番茄全基因組SNP分子標(biāo)記。全基因組的SNP分子標(biāo)記，可以用于番茄QTL定位群體的檢測(cè)，分子標(biāo)記輔助育種的選擇以及全基因組選擇的群體基因型的

19、檢測(cè)。同時(shí)，從中挑選高質(zhì)量，高信息量的分子標(biāo)記用于構(gòu)建一套完成的番茄指紋圖譜，檢測(cè)品種一致性。供試材料：22份材料的DNA用作特異性引物篩選，2份水作為NTC(NoneTemplateControl)，共計(jì)24份模板作為SNP引物的初期篩選。以上實(shí)驗(yàn)在Q6儀器上進(jìn)行。對(duì)于篩選獲得的一致性引物，在利用94株番茄自交系與2份水作為模板，進(jìn)一步在Douglas儀器上驗(yàn)證。DNA提?。喝?0mg植物組織，加入研磨介質(zhì)和400p!裂解液，研磨5min，3000g離心5mino加入裂解液1/3體積的提取液，旋渦振蕩混勻，冰浴(或置于-20C冰箱中)5min,于4C,3200Xg離心10min,吸取上清30

20、0400皿加入到樣品板中。3.按照下表在各96孔板中加入試劑：板號(hào)板型板名成分樣品及試劑體積1Microtiterdeepwell96plate樣品板(Lysis)樣品反應(yīng)液3004001無(wú)水乙醇40012Microtiterdeepwell96plate洗滌板I(W1)PW8001磁珠30p!3Microtiterdeepwell96plate洗滌板II(W2)80%乙醇800p!磁套4KingFisher96KFplate洗脫板(Elution)TE1.050100p!4.將各96孔板按儀器提示順序放入儀器中，運(yùn)行程序。5.程序運(yùn)行結(jié)束后，將DNA溶液轉(zhuǎn)移PCR板中并測(cè)量濃度(100ng/

21、M),進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或于-20C保存待用。1.3.3分子標(biāo)記命名：分子標(biāo)記全部采用統(tǒng)一的命名規(guī)則，這樣有利于結(jié)果的修改與維護(hù)。例如名稱IDSNP位點(diǎn)正向引物反向引物模板序列SolBeckman-00001-V1Sol00001A/G引物合成：由上海生工公司負(fù)責(zé)引物合成。1.3.4SNP分子標(biāo)記的開發(fā)：最近，Sim等人利用番茄的Illumina芯片檢測(cè)410份自交系與16份番茄品種的基因型。本研究在此基礎(chǔ)上，利用Illumina開發(fā)的7,720條探針序列，選擇其中丟失頻率小于10%，等位基因頻率大于10%的探針序列，獲得3,500條探針序列，作為SNP引物開發(fā)的模板序列(),每條序列的長(zhǎng)度為100

22、bp，SNP上下游各50bp。初期，我們可以從3500條探針中，選取120探針序列作為模板發(fā)展引物，這120條序列要求分布在12條染色體上而且在每條染色體上盡量保證均勻分布。如果實(shí)驗(yàn)成功，我們可以逐步地將剩余的探針序列發(fā)展成為SNP引物。1.3.5正向引物設(shè)計(jì)：由于我們需要使用KASP基因分型檢測(cè)試劑盒，本試劑盒對(duì)正向引物已經(jīng)確定為SNP位點(diǎn)上游20bp（包括SNP位點(diǎn)），同時(shí)需要人工加上FAM或是HEX序列（圖1.2）。因此，我們需要單獨(dú)設(shè)計(jì)反向引物。A）KASPAssaymixAllele-specificforwardprimers:3Callel3AaHel圖1.2正向引物設(shè)計(jì)1.3.

23、6反向引物設(shè)計(jì)：利用Primer3.0軟件對(duì)模板序列進(jìn)行引物選擇，引物參數(shù)設(shè)定如下：引物長(zhǎng)度為1825bp；GC含量為4060%；TM值5862C。如果其上述模板序列不足以滿足引物開發(fā)的需要：我們可以利用剩余4,200條探針，繼續(xù)開發(fā)新的引物。另外，我們還可以利用PCR產(chǎn)物測(cè)序的方式獲得gap中序列，尋找新的SNP位點(diǎn)。1.3.6PCR反應(yīng)：PCR反應(yīng)體系：PCR反應(yīng)體系需要保證均一化，這樣可以滿足將來在Douglas系統(tǒng)下進(jìn)行SNP檢測(cè)。初期我們會(huì)在Q6儀器上進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索一致后，再在Douglas系統(tǒng)中進(jìn)行。PrimerMix反應(yīng)體系：名稱體積1)FAM-Primer12HEX-Prim

24、er12Reverse-Primer30ddH2O46Total100PCR反應(yīng)體系：名稱體積1)ReactionMix2.5PrimerMix0.7ddH2O0.8DNA1Total51.3.7PCR反應(yīng)程序：我們的PCR產(chǎn)物應(yīng)該都為100bp，因此我們可以采用統(tǒng)一設(shè)定，保證均一化。采用兩步法進(jìn)行PCR反應(yīng)，前期篩選引物我們?cè)O(shè)計(jì)3個(gè)復(fù)性梯度：60C、57C以及55C，以便找到最合適的復(fù)性溫度。首先，利用60C的復(fù)性溫度進(jìn)行篩選：步驟參數(shù)意義125C1:30min反應(yīng)前收集熒光294C10min預(yù)變性394C15s變性460C1min復(fù)性，延伸53-4重復(fù)40個(gè)循環(huán)625C1:30min反應(yīng)完

25、收集熒光如果SNP引物在60C復(fù)性溫度時(shí)擴(kuò)增結(jié)果正常，則保留該引物在60C復(fù)性進(jìn)行PCR反應(yīng)。如果得到引物擴(kuò)增效果不好，則降低復(fù)性溫度，利用57C進(jìn)行復(fù)性。57C復(fù)性溫度PCR反應(yīng)程序篩選：步驟參數(shù)意義125C1:30min反應(yīng)前收集熒光294C10min預(yù)變性394C15s變性457C1min復(fù)性，延伸53-4重復(fù)40個(gè)循環(huán)625C1:30min反應(yīng)完收集熒光如果SNP引物在57C復(fù)性溫度時(shí)擴(kuò)增結(jié)果正常，則保留該引物在57C復(fù)性進(jìn)行PCR反應(yīng)。如果得到引物擴(kuò)增效果不好，則降低復(fù)性溫度，利用55C進(jìn)行復(fù)性。最終，如果55C復(fù)性溫度時(shí)，反應(yīng)結(jié)果不好，則該SNP引物剔除去掉。55C復(fù)性溫度PCR反

26、應(yīng)程序篩選:步驟參數(shù)意義125C1:30min反應(yīng)前收集熒光294C10min預(yù)變性394C15s變性455C1min復(fù)性，延伸53-4重復(fù)40個(gè)循環(huán)625C1:30min反應(yīng)完收集熒光SNP分子標(biāo)記準(zhǔn)確性驗(yàn)證：對(duì)于已在21份模板DNA擴(kuò)增穩(wěn)定的SNP引物，需要進(jìn)一步在大群體中驗(yàn)證其穩(wěn)定性、一致性、多態(tài)性。選擇84份番茄自交系或品種的DNA，通過相同的PCR方法，驗(yàn)證新開發(fā)的SNP分子標(biāo)記。目標(biāo)要求:番茄全基因組SNP標(biāo)記：在番茄的全基因上，我們獲得1200對(duì)特異的SNP引物（平均100對(duì)/染色體）覆蓋番茄的全基因組。已獲得在12份模板DNA能夠穩(wěn)定擴(kuò)增的SNP分子標(biāo)記，全部保留。2分子標(biāo)記輔

27、助育種：2.1ILs群體：如果利用現(xiàn)在群體不再進(jìn)一步構(gòu)建亞群體,Ls群體（Lpennellii漸滲系群體）76個(gè)自交系，整個(gè)群體數(shù)目較小，不利于定位及QTLs驗(yàn)證（圖2.1）o但是對(duì)于這些材料的滲入片段都已經(jīng)注視清楚，因此我們可以直接比較深入系與M82自交系的表型差異，如果存在顯著性差異，則可以定義為有深入片段引起的表型差異。當(dāng)鑒定結(jié)果與已定位的QTLs信息一致時(shí)，我們就認(rèn)為此QTL在區(qū)間內(nèi)。同時(shí)我們要檢索此QTL定位時(shí)的位置，以此為基礎(chǔ)發(fā)展SNP標(biāo)記，用于以后分子標(biāo)記輔助育種。對(duì)于每個(gè)QTL的區(qū)間，需要發(fā)展48個(gè)SNP標(biāo)記覆蓋其定位區(qū)間（圖1.1）,其中，區(qū)間外兩段各一個(gè)標(biāo)記，內(nèi)部26個(gè)SN

28、P標(biāo)記。這樣可以保證目標(biāo)QTL被完整的應(yīng)用。SNP標(biāo)記的開發(fā)，此時(shí)的SNP標(biāo)記只需要在ILs群體的兩個(gè)親本中有多態(tài)性就可以應(yīng)用。引物設(shè)計(jì)同全基因組SNP引物設(shè)計(jì)相同。性狀驗(yàn)證：對(duì)于確定的QTLs，我們需要開發(fā)對(duì)應(yīng)的SNP標(biāo)記，利用這些標(biāo)記重新驗(yàn)證定位結(jié)果：MY-1_J圭翦空dlEL3圖2.2IBLs群體構(gòu)建2.3性狀調(diào)查：從我的觀點(diǎn)出發(fā)，對(duì)于分子育種比較有價(jià)值研究的QTL,應(yīng)為育種家需求的性狀所對(duì)應(yīng)的QTL。我認(rèn)為我們需要跟番茄育種家合作并討論育種需求與育種目標(biāo)。鑒于目前ILs群體定位情況（表1,表2）,我認(rèn)為我們可以從中選擇一些我們能夠鑒定測(cè)量的性狀進(jìn)行研究，例如：糖分，可溶性固形物的含量，

29、果實(shí)形狀與大小等?？傊覀円軌驕y(cè)量這些性狀。同時(shí),對(duì)于需要研究性狀,我們需要對(duì)其進(jìn)行界定,比如果實(shí)大小,我們需要測(cè)量成熟后幾天的果實(shí),作為統(tǒng)一的判定。以保證性狀測(cè)量的準(zhǔn)確性。表1和用IL群悻定檢的番茄果實(shí)品質(zhì)基囲或QTUIWhigI200634航壞血曙閨建融Zuuclal2(KM網(wǎng)賓的風(fēng)昧Mzluuletul.i200712昨血馥Stow酣cm200S127果宜化學(xué)妳慌時(shí)恢選堊國(guó)Bennu日czuLaL.r200K耒2利用H.辭津克匱的番茄基因或QTIaIkbk2GtraMTL?ckjaitd礙出intrngre胡onfiirieflhitditfialo基恂或QIL;染色體丈IttGeiM./QTLs：PhmotypcClli.a11v