《診斷學(xué)》第二版PPT第二十四章--臨床常用免疫學(xué)檢測課件

1、第二十四章 臨床常用免疫學(xué)檢測臨床常用免疫學(xué)檢查包括一、血清免疫球蛋白檢測二、血清補(bǔ)體檢測三、細(xì)胞免疫檢測四、腫瘤標(biāo)志物檢測五、自身抗體檢測六、感染免疫檢測免疫系統(tǒng)免疫學(xué)方法第一節(jié) 血清免疫球蛋白（Ig）檢測定義：是由漿細(xì)胞合成分泌的一組具有抗體活性的球蛋白，存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液和部分細(xì)胞的膜上。檢測：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的診斷、鑒別診斷、疾病進(jìn)展和預(yù)后。血清免疫球蛋白分類根據(jù)重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)和抗原特異性的不同，分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE血清免疫球蛋白分類檢測方法酶聯(lián)免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)熒光標(biāo)記免疫(IFA)化學(xué)發(fā)光

2、法（CLIA)免疫透射比濁、免疫散射比濁一、血清免疫球蛋白G檢測IgG人體內(nèi)含量最多，占Ig的70-80再次免疫應(yīng)答的主要抗體對細(xì)菌、病毒和寄生蟲都有抗體活性唯一可通過胎盤的Ig一、血清免疫球蛋白G檢測參考值7.016.6 g/L臨床意義-IgG 增高 多克隆性增高 見于各種慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺結(jié)核、鏈球菌感染以及自身免疫性疾病單克隆性增高 僅見一種Ig增高，主要見于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多發(fā)性骨髓瘤臨床意義-IgG 降低見于各種先天性和獲得性免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病、也見于重鏈病、輕鏈病、腎病綜合癥、病毒感染和免疫抑制劑患者二、免疫球蛋白A檢測兩型：血清型IgA，分泌型I

3、gA（SIgA）。血清型IgA以單體形式存在分泌型IgA（S IgA）由J鏈連接的二聚體和分泌片組成。參考值血清IgA 0.73.5 g/L， IgA占10-15。SIgA 唾液0.3 g/L，淚液3080 g/L，初乳5.06 g/L，糞便1.3 g/L臨床意義IgA增高 見于IgA型MM，SLE,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，肝硬化，濕疹和腎臟疾病等IgA降低 見于反復(fù)呼吸道感染，非IgA型MM，重鏈病，輕鏈病，原發(fā)和繼發(fā)性免疫缺陷病和自身免疫性疾病三、免疫球蛋白M檢測IgM是五聚體，分子量最大的Ig不能通過血管壁，不能通過胎盤個體發(fā)育過程中最早合成的抗體，臍帶血IgM增高提示胎兒宮內(nèi)感染體液免疫應(yīng)答中

4、IgM是最早產(chǎn)生的抗體參考值參考值 0.5 2.6 g/L臨床意義IgM增高 見于初期病毒性肝炎、肝硬化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、SLE等，原發(fā)性巨球蛋白血癥時， IgM呈單克隆性明顯增高IgM降低 見于IgG型重鏈病， IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制劑，淋巴系統(tǒng)腫瘤和腎病綜合癥。四、免疫球蛋白E的檢測IgE是血清中最少的一種Ig，占血清總Ig的0.002%。是一種親細(xì)胞抗體，介導(dǎo)型變態(tài)反應(yīng)，與變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲感染和皮膚過敏等有關(guān)。參考值ELISA法為0.1 0.9m g/L臨床意義IgE增高 見于IgE型MM、重鏈病、肝臟病、結(jié)節(jié)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，以及各種過敏性疾病和寄生蟲感染等。Ig

5、E降低 見于先天性和獲得性丙種球蛋白缺乏癥、惡性腫瘤、長期應(yīng)用免疫抑制劑和共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)展癥等。五、血清M蛋白檢測M蛋白(M protein)或稱單克隆免疫球蛋白，是一種單克隆B細(xì)胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。參考值蛋白電泳法、免疫比濁法或免疫電泳法：正常人為陰性。臨床意義檢測到M蛋白，提示單克隆免疫球蛋白增殖病。見于：多發(fā)性骨髓瘤：以IgG型最常見，其次為IgA型，IgD和IgE罕見，也有IgM型的報道。巨球蛋白血癥：該病血液中存在大量單克隆IgM。重鏈?。撼霈F(xiàn)Ig重鏈輕鏈?。撼霈F(xiàn)單克隆游離輕鏈。臨床意義檢測到M蛋白，提示單克隆免疫球蛋白增殖病。見于

6、：半分子?。合涤梢粭l重鏈和一條輕鏈組成的單克隆Ig片段。惡性淋巴瘤：血液中可出現(xiàn)M蛋白。良性M蛋白血癥：第二節(jié) 血清補(bǔ)體檢測補(bǔ)體是一組具有酶源活性的糖蛋白，由傳統(tǒng)途徑的九種成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途徑的三種成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子組成參與機(jī)體的抗感染和免疫調(diào)節(jié),介導(dǎo)病理反應(yīng)補(bǔ)體的三條激活途徑一、總補(bǔ)體溶血活性檢測(CH50)原理:抗體致敏的綿羊紅細(xì)胞(抗原抗體復(fù)合物)可激活血清中的補(bǔ)體C1,從而引起補(bǔ)體經(jīng)典途徑的連鎖反應(yīng),導(dǎo)致綿羊紅細(xì)胞膜上形成多分子的聚合物，綿羊紅細(xì)胞溶解。在分光光度計(jì)上542nm讀取吸光度。溶解程度與樣品中補(bǔ)體量正相關(guān)。主要反應(yīng)補(bǔ)體經(jīng)典途

7、徑的綜合水平。+C一、溶細(xì)胞作用：靶細(xì)胞抗 體抗原抗體 復(fù)合物C1-C9靶細(xì)胞溶 解Ca+C1rC1sC1q C4C4ab細(xì)胞膜識 別 階 段C3轉(zhuǎn)化酶的形成C4bMg+C4aCa+C1rC1sC1q C2C2abC2bC4b2b 為C3轉(zhuǎn)化酶活化階段C5轉(zhuǎn)化酶的形成C4bMg+C4aCa+C1rC1sC1q C2aC2bC3 C3abC4b2b3b 是C5 轉(zhuǎn)化酶; 它導(dǎo)致膜攻擊復(fù)合體(MAC)的形成活化階段C3b C2aC4bC5bC5a C5b C6C7膜攻擊階段MAC形成并插入到細(xì)胞內(nèi)C5b C6C7C8 C9C9C9C9C9C9C9C9C9CH50在50%溶血附近，“S”形曲線最陡，

8、接近一條直線。在此范圍內(nèi)補(bǔ)體活性稍有變動，溶血程度就有明顯變化，即是以50%溶血作為反應(yīng)的終點(diǎn)比以100%溶血作為終點(diǎn)更為敏感，因而該試驗(yàn)被稱為補(bǔ)體50%溶血試驗(yàn)，即CH50試驗(yàn)。CH50測定的臨床意義增高：見于急性炎癥，組織損傷和某些惡性腫瘤。減低：免疫復(fù)合物性疾?。ㄈ缒I小球腎炎）、自身免疫性疾病活動期、感染性心內(nèi)膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重癥營養(yǎng)不良和遺傳性補(bǔ)體成分缺乏癥等二、補(bǔ)體C3檢測是一種由肝臟合成的2-球蛋白。C3在補(bǔ)體系統(tǒng)各成分中含量最多，是經(jīng)典途徑和旁路途徑的關(guān)鍵物質(zhì)。它也是一種急性時相反應(yīng)蛋白。 參考值： 成人血清C3：O815gL。 臨床意義增高：常見于一些急性時

9、相反應(yīng)，如急性炎癥、傳染病早期、腫瘤、排異反應(yīng)、急性組織損傷。減低：見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動期、大多數(shù)腎小球腎炎(如鏈球菌感染后腎小球炎、狼瘡性腎炎、基底膜增殖性腎小球腎炎)、慢性活動性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝壞死、先天性補(bǔ)體缺乏(如遺傳性C3缺乏癥)等。它們或是由于消耗或丟失過多或是由于合成能力降低造成。 第三節(jié) 腫瘤標(biāo)志物檢測腫瘤標(biāo)志物（TM）：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，由腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生或機(jī)體在腫瘤細(xì)胞刺激下產(chǎn)生的，與腫瘤存在相關(guān)的物質(zhì)，存在于血液、細(xì)胞、組織液、體液中。腫瘤標(biāo)志物免疫分析現(xiàn)實(shí)的腫瘤標(biāo)志物靈敏度有限；特異性有限；存在正常異常交錯；存在不穩(wěn)定性與臨床表現(xiàn)存在差異

10、理想的腫瘤標(biāo)志物腫瘤患者血液中含量明顯增高；與腫瘤組織的定位有關(guān)；腫瘤標(biāo)志物的含量與腫瘤的大小分期有關(guān)；腫瘤標(biāo)志物的含量與腫瘤的生長、消退或轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有關(guān)；假陰性率與假陽性率低。TM分類蛋白質(zhì)類，如AFP、CEA和PSA等。糖脂類，如CA19-9和CA-50等酶類，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受體等其它腫瘤標(biāo)志物，如核酸、多胺等。一、蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物檢測（一）甲胎蛋白（AFP）測定在胎兒發(fā)育早期,由肝臟和卵黃囊合成，出生后一年內(nèi)降至正常水平。細(xì)胞惡變后又重新具有分泌AFP的能力。對診斷肝細(xì)胞癌及滋養(yǎng)細(xì)胞惡性腫瘤有重要的臨床價值。參考值血清 300g/L。病毒性肝炎與肝硬

11、化患者血清中AFP可增高，但常300g/L。生殖器胚胎性腫瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。妊娠時AFP可升高，峰值低于400g/L，若異常升高應(yīng)考慮胎兒神經(jīng)管缺損畸形。（二）癌胚抗原（CEA）早期胎兒的胃腸道及某些組織均有合成CEA的能力胎兒出生后血清 CEA的含量極低參考值：血清 5g/L臨床意義升高主要見于胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、胃癌等消化系統(tǒng)腫瘤。血清CEA連續(xù)隨訪檢測，可用于惡性腫瘤治療后的療效觀察及預(yù)后判斷。病情好轉(zhuǎn)時，CEA濃度下降，病情加重時可升高。腸道憩室炎，直腸息肉，結(jié)腸炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。抽煙（三）前列腺特異性抗原（PSA)前列腺分

12、泌的單鏈糖蛋白存在于前列腺管道的上皮細(xì)胞，前列腺癌時血清水平明顯升高總PSA (t-PSA）中，80結(jié)合形式，20游離（ f-PSA)參考值： t-PSA4.0g/L、 f-PSA0.25臨床意義前列腺癌是60-90患者血清t-PSA明顯升高前列腺炎、增生，輕度升高， t-PSA 4.0-10.0g/L t-PSA 4.0-10.0g/L ， f-PSA /t-PSA 的比值對診斷更有價值，f-PSA /t-PSA0.1時提示前列腺癌二、糖脂類腫瘤標(biāo)志物檢測腫瘤細(xì)胞內(nèi)糖基化過程發(fā)生變異，從而導(dǎo)致細(xì)胞分泌性或細(xì)胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列發(fā)生改變，形成了一種和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用

13、單克隆抗體技術(shù)檢測這些抗原，結(jié)果誕生了糖蛋白類抗原。作為新一代的腫瘤標(biāo)記物，遠(yuǎn)較酶和激素類標(biāo)記物敏感、特異。 （一）CA19-9 為唾液酸化的型乳糖系巖藻五糖，有六個糖基組成 正常在胰腺導(dǎo)管、膽道、胃、腸、子宮內(nèi)膜和涎腺上皮細(xì)胞中均有表達(dá)CA19-9的應(yīng)用CA19-9的器官特異性不強(qiáng)在各種腺癌特別是消化系統(tǒng)的惡性腫瘤如： 7193胰腺癌、67肝膽管癌、4050胃癌、3050肝癌、30直腸癌和15乳腺癌的CA19-9都有升高在急性胰腺炎、膽汁淤積性膽管炎、膽道結(jié)石和肝臟疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超過120kU/L，往往是呈“一過性”升高。CA19-9在胰腺癌中的應(yīng)用CA19-9在胰腺

14、癌中的陽性率最高，常被認(rèn)為是針對胰腺癌的一種腫瘤標(biāo)記物。早期胰腺癌CA19-9敏感性較低， T1期為60.7、T2期為78.4 檢測胰腺癌的治療效果及術(shù)后復(fù)發(fā)情況 （二）CA125糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于上皮性卵巢組織及患者血清中CA-125在卵巢診斷中的應(yīng)用8090的卵巢上皮癌中CA-125可明顯升高子宮內(nèi)膜癌、透明細(xì)胞癌、輸卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明顯升高粘液性卵巢癌患者的陽性率則較低CA-125在卵巢包塊良惡性的鑒別上特別有價值，敏感度為78、特異性95、陽性預(yù)測價值82、陰性預(yù)測價值91 。 CA-125和CEA聯(lián)合測定，計(jì)算兩者比值，可提高卵巢癌檢出的敏感性

15、和特異性。 （三）CA15-3 分子量約為40 000的糖蛋白是抗原決定簇、糖和多肽組成的糖蛋白臨床意義 CA15-3作為乳腺癌的主要標(biāo)記物 23的原發(fā)性乳腺癌和69轉(zhuǎn)移性乳腺癌可有 CA15-3的升高乳腺癌的期和期，僅有1020的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期診斷臨床意義 主要用于乳腺癌病人的治療監(jiān)測和預(yù)后判斷。乳腺癌患者血清CA15-3濃度比原來水平升高預(yù)示病情進(jìn)展、腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，其濃度升高比臨床癥狀出現(xiàn)或影像學(xué)檢查的發(fā)現(xiàn)時間早。對晚期病人，當(dāng)CA15-3100 kU/L 時，肯定有轉(zhuǎn)移，敏感性高于CEA、TPA。 第四節(jié) 自身抗體檢測正常情況下，機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身抗原物質(zhì)不產(chǎn)生免

16、疫應(yīng)答或只產(chǎn)生極微弱的免疫應(yīng)答自身免疫性疾病是指機(jī)體免疫功能紊亂時,針對自身組織抗原產(chǎn)生自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞,并導(dǎo)致組織損傷而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫學(xué)特征為血清或其它體液中出現(xiàn)高滴度的自身抗體和致敏淋巴細(xì)胞,因此通過對自身抗體的檢測輔助自身免疫性疾病的診斷.一、類風(fēng)濕因子(RF)的檢測RF是變性IgG刺激機(jī)體產(chǎn)生的一種自身抗體，是一種以變性IgG的作為靶抗原的自身抗體。RF主要為IgM型抗體, 但也有 IgG, IgA IgD、IgE型抗體。存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)。檢測方法與參考值乳膠致敏凝集實(shí)驗(yàn)：1:10為陰性。酶連免疫吸附實(shí)驗(yàn)（E

17、LISA）：陰性。速率散射比濁法：30KIU/L臨床意義類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者RF的陽性率為52%-92%，平均為70%。RF的量或滴度與疾病的嚴(yán)重程度不平行，但與疾病的活動性有關(guān)。IgG型與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)外癥狀有關(guān)，IgM型與IgA型的效價與骨質(zhì)破壞有關(guān)。臨床意義RF的特異性不強(qiáng)，在其他結(jié)締組織病也有一定的陽性率，如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥綜合征、慢性活動性肝炎等患者等。不過RF的含量相對較低，且持續(xù)時間較短。二、抗核抗體(ANA)檢測經(jīng)典ANA：是一類以細(xì)胞核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。廣義ANA：整個細(xì)胞成分，包括細(xì)胞核和細(xì)胞漿。無器官與種屬的特異性。主要是IgG.檢測方法

18、：間接免疫熒光法（IIF)核仁型核仁型：抗核小體抗體，多見于硬皮病、皮肌炎及類分關(guān)等均質(zhì)型抗DNP或抗組蛋白抗體，也可是多種自身抗體高度密集的形態(tài)表現(xiàn)。多見于活動期SLE、藥物性狼瘡等。邊緣型是抗dsDNA或抗脫氧核糖核蛋白的形態(tài)學(xué)反應(yīng)。高滴度周邊型核熒光多見于SLE。顆粒型抗ENA抗體臨床意義未經(jīng)治療的系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的ANA陽性率在90%以上，因此ANA對SLE的診斷具有較高的靈敏度。ANA滴度或量與SLE的活動性平行，因此ANA是判斷SLE活動與否的指標(biāo)之一。其它自身免疫病ANA也可陽性，如全身性硬皮病的陽性率為約為8595%，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎約為20%。（二）可提取核抗原 (ENA

19、) 抗體譜ENA又稱鹽水可溶性抗原或磷酸鹽可浸出抗原，是指在鹽水中或磷酸鹽可溶解的核抗原。ENA多肽抗體譜是針對核內(nèi)ENA的一類自身抗體，約有10余種，主要為抗核糖核蛋白(RNP)抗體和抗Sm抗體，其它還有抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗Scl-70抗體、抗JO-1抗體等。不同的自身免疫病可產(chǎn)生不同的抗ENA抗體。通過檢測抗ENA抗體的類型及其組合，可綜合診斷自身免疫病的類型。檢測方法免疫印跡技術(shù)（最常用）臨床意義抗RNP抗體陽性見于多種風(fēng)濕性疾病，如MCTD、SLE、系統(tǒng)性硬化病、皮肌炎等，以MCTD的陽性率最高，約為95-100%，且抗體的滴度亦高，故此抗體對MCTD有較高的診斷價值?？?/p>

20、JO-1抗體陽性對多發(fā)性肌炎與皮肌炎的診斷有一定的價值。臨床意義抗Sm抗體主要見于SLE及其重疊綜合征，在SLE的非活動期亦可檢出，是SLE的特異性標(biāo)志抗體之一，陽性率約為30-40%，而其它疾病鮮見陽性。若聯(lián)合檢測抗ds-DNA和抗Sm抗體可提高SLE診斷的準(zhǔn)確性。抗Rib抗體陽性主要見于SLE，為SLE的又一標(biāo)志抗體臨床意義抗SS-A、抗SS-B抗體陽性多見于干燥綜合征及合并SLE的干燥綜合征，偶見MCTD，因此抗SS-A、抗SS-B抗體為干燥綜合征的標(biāo)志抗體?？筍cl-70抗體為進(jìn)行性全身硬化的標(biāo)志抗體。特異地出現(xiàn)于該病患者的血清中，陽性多伴有肺纖維化，局限性硬皮病該抗體常陰性。（三）抗

21、DNA抗體抗雙鏈 DNA（ds-DNA）抗體；抗單鏈DNA （ss-DNA）抗體；抗Z-DNA抗體檢測方法與參考值 檢測抗dsDNA抗體最特異和最敏感的方法是用馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲作為抗原基質(zhì)進(jìn)行間接免疫熒光測定。臨床意義抗dsDNA抗體陽性 見于活動期SLE，陽性率7090。本試驗(yàn)特異性較高，但敏感性較低?？箂sDNA抗體陽性 見于SLE(陽性率7095)，尤其是合并有狼瘡性腎炎。還可見于一些重疊結(jié)締組織病、藥物誘導(dǎo)的狼瘡和慢性活動行肝炎等，但不具特異性。第五節(jié) 感染免疫檢測（一）抗鏈球菌溶血素“O”測定溶血素“O”是A族溶血性鏈球菌的具有溶血活性的蛋白質(zhì)，具有抗原性抗鏈球菌溶血素“O”（Anti-streptolysin、ASO）是以鏈球菌溶血素“O”為靶抗原的抗體。參考值乳膠凝集法 500 U免疫比濁法 200 U臨床意義陽性表示病人近期內(nèi)有A群溶血性鏈球菌感染，常見于活動性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心肌炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚和