《血庫操作規(guī)程》word版

1、北川羌族自治縣人民醫(yī)院血庫標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號：BC-2-2013編制：呂強審核：施偉批準(zhǔn)：施偉生效日期：2013年4月14日北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容目 錄生效日期：20130414第 1頁 共13頁目 錄序號主 題 內(nèi) 容頁 號目錄11ABO 血型鑒定（正定型）12Rh（抗D）血型鑒定3凝聚胺介質(zhì)交叉配血4離心機操作標(biāo)準(zhǔn)操作程序5離心機維護保養(yǎng)操作程序6血庫冰箱維護保養(yǎng)操作程序7移動紫外消毒車使用操作程序8電熱恒溫水浴箱操作規(guī)程9101112 北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題

2、內(nèi)容ABO 血型鑒定（正定型）生效日期：20130414 第2頁 共13頁ABO 血型鑒定（正定型）1、實驗原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A 抗原或（和）B 抗原，將血型分為A型、B型、AB型和O型四種。可利用紅細(xì)胞凝集試驗，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定A B O 血型。所謂正定型，是用已知抗A和抗B分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或（和）B抗原；所謂反定型，是用已知A紅細(xì)胞B紅細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗A或（和）抗B。2、使用的標(biāo)本種類和收集方法2.1、受檢者5紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液制備：采取受檢者的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，取壓積紅細(xì)胞1滴加入生理鹽水16滴（0.8ml）配成5的紅細(xì)胞懸液。2.2

3、、受檢者血清采取受檢著靜脈血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，分離上層血清備用。2.3、標(biāo)本接收、血型鑒定不接收臨床送檢標(biāo)本（除外2.3.2規(guī)定內(nèi)容）。、特殊急診檢驗人員無法采血時，接收臨床送檢標(biāo)本需登記采血護士姓名及送檢護士姓名、并查對標(biāo)本標(biāo)簽和檢驗單內(nèi)容是否相符，如有不符可以拒收標(biāo)本。2.4、標(biāo)本容器要求：潔凈一次性塑料試管3、使用的試劑3.1、抗A 、抗B定型試劑（單克隆抗體）、批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S10980059、生產(chǎn)廠家：上海血液生物醫(yī)藥有限公司、保存條件：2-8避光保存，有效期內(nèi)使用。25 A、B及O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液、制備方法分別采取已知A、B、O三

4、種血型的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3 次，經(jīng)鹽水洗滌3次，取壓積紅細(xì)胞1滴加入生理鹽水16滴（0.8ml）配成5的紅細(xì)胞懸液。、保存條件：配制好的5的紅細(xì)胞懸液在試管上注明紅細(xì)胞血型及配制時間，2-8避光保存，有效期3天。4、儀器： 4.1、儀器型號：型醫(yī)用離心機4.2、儀器廠家：北京菲恰爾醫(yī)療器械有限公司4.3、許可證號：京藥管械（試）字2001第2030436號北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容ABO 血型鑒定（正定型）生效日期：20130414第3頁 共13頁4.4、儀器使用具體要求見離心機使用維護程序。5、操作步驟、報告結(jié)果5.1、 正定型

5、：取清潔試管2支作好標(biāo)記，分別加入抗A（藍色）和抗B（黃色）標(biāo)準(zhǔn)血清各2滴。每管加入被檢者5紅細(xì)胞懸液各2滴，混勻，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心一分鐘或在室溫放置1小時，輕輕搖勻，涂至載玻片上，用顯微鏡觀察是否凝集。5.2、反定型：取清潔試管2支作好標(biāo)記。用滴管分別加入被檢者血清各2滴，A和B型5標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液各2滴。混合。立即以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，輕輕搖勻，涂至載玻片上，用顯微鏡觀察是否凝集。5.3、結(jié)果見下表：抗A 抗B 血型 A細(xì)胞 B細(xì)胞 + - A - + - + B + - - - O + + + + AB - - 注：（） 凝集（） 不凝集6、注意事項6.1、標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量應(yīng)符合要

6、求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。如出現(xiàn)混濁或變色則不能使用。6.2、試劑紅細(xì)胞以3 個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌3 次，以除去存在于血清中的抗體及可溶性抗原。6.3、試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。6.4、操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清， 然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。6.5、離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。6.6、觀察時應(yīng)注意區(qū)別真假凝集。6.7、判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對，記錄，避免筆誤。7、臨床意義 輸血已成為臨床上必不可少的治療手段，輸血必須輸入A B O 同型血，如輸入異型血，輸入的紅細(xì)胞可能迅速破壞，導(dǎo)致

7、嚴(yán)重的溶血反應(yīng)， 常常威脅生命甚至造成死亡。8、方法的局限性：本方法不能檢測出亞型。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容Rh（抗D）血型鑒定生效日期：20130414第4頁 共13頁Rh（抗D）血型鑒定1.原理： Rh血型系統(tǒng)通過輸血或妊娠可產(chǎn)生免疫性抗體，當(dāng)遇有相應(yīng)抗原，可致溶血反應(yīng)或新生兒溶血病。若誤診誤治，可導(dǎo)致患者殘廢或死亡。有條件者應(yīng)作此檢查。目前，一般應(yīng)用5種分型血清來檢查紅細(xì)胞抗原。臨床上，凡帶有D抗原者，稱為Rh陽性，不帶D抗原者，稱為Rh陰性。2、使用的標(biāo)本種類和收集方法2.1、受檢者2-3紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液制備：采取受檢

8、者的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，取壓積紅細(xì)胞1滴加入生理鹽水32滴（1.6ml）配成2-3的紅細(xì)胞懸液。2.2、標(biāo)本接收、血型鑒定不接收臨床送檢標(biāo)本（除外2.3.2規(guī)定內(nèi)容）。、特殊急診檢驗人員無法采血時，接收臨床送檢標(biāo)本需登記采血護士姓名及送檢護士姓名、并查對標(biāo)本標(biāo)簽和檢驗單內(nèi)容是否相符，如有不符可以拒收標(biāo)本。2.3、標(biāo)本容器要求：潔凈一次性塑料試管3. 儀器和試劑：3.1、儀器型號：型醫(yī)用離心機3.2、儀器廠家：北京菲恰爾醫(yī)療器械有限公司3.3、許可證號：京藥管械（試）字2001第2030436號3.4、儀器使用具體要求見離心機使用維護程序3.5、Rh抗血清本科使用上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)

9、的Rh抗血清試劑產(chǎn)品注冊號:國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2009第3400648號4. 操作4.1 取小試管2支,用蠟筆標(biāo)記，分別加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液2滴,混勻。離心：3200-3400轉(zhuǎn)/min,15-30秒4.2結(jié)果判斷:輕搖試管，觀察結(jié)果：如受檢管凝集,即表示陽性；受檢管不凝集,即表示陰性。5、注意事項5.1、Rh抗血清質(zhì)量應(yīng)符合要求，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。如出現(xiàn)混濁或變色則不能使用。5.2、。試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。5.3、操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清， 然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。5.4、離心時間不宜過長或過

10、短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。5.5、觀察時應(yīng)注意區(qū)別真假凝集。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容Rh（抗D）血型鑒定生效日期：20130414第5頁 共13頁5.6、判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對，記錄，避免筆誤。5.7、當(dāng)用未經(jīng)洗滌的細(xì)胞作試驗時，試樣中的自身凝集和異常蛋白質(zhì)可能引起假陽性結(jié)果。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容凝聚胺介質(zhì)交叉配血生效日期：20130414 第6頁 共13頁凝聚胺介質(zhì)交叉配血原理 紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)生聚集，當(dāng)紅細(xì)胞懸浮

11、在電解質(zhì)時，陽離子會被紅細(xì)胞的負(fù)電荷所吸引，此時紅細(xì)胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，而形成Zeta電位，決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。 凝聚胺技術(shù)首先利用低離子溶液（LIM），降低介質(zhì)的離子強度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，以促進紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體結(jié)合。 其后，加入凝聚胺（溶液，它是一種高階陽離子多聚物，肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞Zeta電位降低，縮短紅細(xì)胞之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。 最后，加入凝聚胺(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）的作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝集散開，

12、試驗旨果為陰性；但如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結(jié)，凝集就不會散開，試驗結(jié)果為陽性。試劑本科使用珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的凝聚胺介質(zhì)試劑產(chǎn)品注冊號:國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2004第3400397號套組內(nèi)容： 150T裝量（BA-1003） 主要成份1LIM(Low Ionic Mediun) 1瓶55ml 葡萄糖、EDTA（2Na）2、Polybrene Solution 1瓶7.5ml Polybrene、氯化鈉3.Resuspending Solution 1瓶7.5ml 檸檬酸鈉、葡萄糖3、試驗步驟3.1取試管二支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2滴，加供血者3-5%紅細(xì)

13、胞懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴，次側(cè)管反之。3.2各加LIMml,混合均勻后,再各加Polybrene2滴,并混合均勻.3.3用血庫離心機3400轉(zhuǎn)/分離心10秒,然后把上清液倒掉,不要瀝干,讓管底殘留約液體.3.4輕輕搖動試管,目測紅細(xì)胞有無凝集,如無凝集,則必須重做.3.5最后加入Resuspending2滴,輕輕轉(zhuǎn)動試管混合并涂片,顯微鏡下觀察結(jié)果：在30秒-1分鐘內(nèi)凝集散開,代表是由Polybrene引起的非特異性聚集,配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。3.6。配學(xué)相合后，認(rèn)真填寫配血紀(jì)錄單和登記本，并通知臨床取血。4、注意事項：4.1可以

14、用含EDTA之血漿代替血清使用。4.2若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加4-6滴Polybrene溶液以中和肝素。4.3本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定。北北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容凝聚胺介質(zhì)交叉配血生效日期：20130414第7頁 共13頁4.4試劑使用前請回復(fù)室溫再行操作。4.5加做輔助性抗球蛋白試驗，目的是增加檢測抗-K的敏感性，對檢測其他紅細(xì)胞抗體無幫助。4.6在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配血試驗，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，面導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)。若有此懷疑，建議在最后滴入Resuspendin

15、g時，將試管立即置入37攝氏度水浴中，輕輕轉(zhuǎn)動試管混合，并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容離心機操作標(biāo)準(zhǔn)操作程序生效日期：20130414 第 8頁 共13頁離心機操作標(biāo)準(zhǔn)操作程序1、目的：使每個工作人員能正確地使用本儀器。2、范圍：本SOP僅適用于本室普通離心機。3、職責(zé)：3.1 實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。3.2 本SOP的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。4、操作：4.1 開機：接通電源，打開儀器電源開關(guān)，離心機自檢。4.2 按“O

16、pen”鍵，打開機蓋，旋開轉(zhuǎn)子蓋，平衡放入離心管，旋緊轉(zhuǎn)子蓋，關(guān)上機蓋，此時“Open”鍵的指標(biāo)燈亮。（如果接通電源后，機蓋為開的狀態(tài)，則無需此步操作）。4.3 離心條件的設(shè)定：通過按“Temp”、“Speed”、“Time”鍵的上下箭頭分別設(shè)定離心的溫度、速度和時間。其中離心速度可分為每分鐘轉(zhuǎn)速（rpm）和離心力（cfg）兩種，可通過同時按下“Speed”鍵的上下鍵頭相互轉(zhuǎn)換。4.4 運行：離心條件設(shè)定好后，按“Start/Stop”鍵，離心機啟動，“Open”鍵的指標(biāo)燈滅。當(dāng)達到設(shè)定的時間后，離心機自動停止，并發(fā)出提示音，“Open”鍵的指標(biāo)燈亮，按“Open”鍵，打開機蓋，旋開轉(zhuǎn)子蓋，取

17、出離心管。若需在離心過程中停止離心，則需再按一次“Start/Stop”鍵。4.5 關(guān)機：離心完畢后，應(yīng)及時用干的軟布拭去離心室的冷凝水，關(guān)閉離心機電源，并記錄離記機使用情況。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容離心機維護保養(yǎng)操作程序生效日期：20130414第 9頁 共13頁離心機維護保養(yǎng)操作程序1、目的：對離心機進行正確的維護，以保證儀器正常運轉(zhuǎn)。2、適用范圍：本SOP僅適用于本室使用的離心機。3、職責(zé)：3.1 實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。3.2 本SOP的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下

18、述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。4、操作程序：4.1 離心室的清潔：為了避免樣本等殘留物的污染，應(yīng)經(jīng)常對離心機外殼和離心室進行清潔處理。對離心室清潔，應(yīng)先打開離心機蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機轉(zhuǎn)子旋下，再用中性去污劑（70%的異丙醇/水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤滑。4.2 轉(zhuǎn)子的清潔：轉(zhuǎn)子會被樣本殘留物污染，也可能會被某些化學(xué)試劑腐蝕，因此應(yīng)對轉(zhuǎn)子每月進行清潔維護。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器使用記錄本上作好記錄，以延長轉(zhuǎn)子的壽命。4.3 離心完畢后，應(yīng)及時用干的軟布拭去離心室的冷凝水。（此步僅適用于冷凍離心機）

19、4.4 離心結(jié)束后，使離心機蓋打開，然后關(guān)機。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容血庫冰箱維護保養(yǎng)操作程序生效日期：20130414 第 10頁 共13頁血庫冰箱維護保養(yǎng)操作程序1.目的： 對冰箱進行適當(dāng)?shù)木S護，以確保冰箱的正常使用。2.適用冰箱范圍： 本實驗室使用的各種品牌、型號的冰箱。3.職責(zé)：3.1 實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。3.2 本SOP的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。4.操作方法4.1 冰箱應(yīng)放置于水平地面并留有一定的散熱空間。4.2 外接電源

20、電壓必須匹配，并要求有良好的接地線。4.3 冰箱內(nèi)禁止存放與本實驗室無關(guān)的物品。4.4 放入冰箱內(nèi)的所有試劑、血液、樣品等必須密封分類保存。4.5 保持冰箱出水口通暢；非自動除霜冰箱應(yīng)定期除霜；定期清潔冰箱，清潔時切斷電源，用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時可用中性洗滌劑。4.6 每日由專人負(fù)責(zé)觀察冰箱內(nèi)溫度并記錄于表中，記錄表貼于門上，每月一張，一年裝訂成冊存檔。4.7 若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進行記錄。4.8 若溫控調(diào)節(jié)無效，報請設(shè)備科維修，修理后須驗收合格并簽字后方能正常使用。4.9定期用液體消毒劑消毒冰箱內(nèi)表面。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-20

21、13版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容移動紫外消毒車使用操作程序生效日期：20130414 第 11頁 共13頁移動紫外消毒車使用操作程序1、目的：正確使用紫外消毒車進行消毒。2、適用范圍：適用于本室使用的ZXC型紫外線消毒車（上海躍進醫(yī)用光學(xué)器械廠生廠）。3、職責(zé)：3.1 實驗室工作人員均應(yīng)熟知并嚴(yán)格遵守本SOP，室負(fù)責(zé)人監(jiān)督落實。3.2 本SOP的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：室負(fù)責(zé)人、科主任。4、操作程序：4.1 打開保護門；4.2 用手托住燈臂往上抬至需要位置；4.3 插上電源，打開帶燈開關(guān)；4.4 根據(jù)需要設(shè)定時間；4.5 使用完畢將按鈕摁到底，同時另一手托住燈臂慢慢將燈管放進燈箱內(nèi)關(guān)上保護門。4.6 不同實驗區(qū)的紫外線消毒車勿混用。北川縣人民醫(yī)院血庫作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： BC-2-2013版本/修訂號：BC/2主題內(nèi)容電熱恒溫水浴箱操作規(guī)程生效日期：20130414第 12頁 共13頁1、目的溶漿機室