HPLC法測定阿奇霉素散劑的含量

1、HPLC法測定阿奇霉素散劑的含量【摘要】目的建立HPL法測定阿奇霉素散劑的含量。方法采用8柱，以0.045l/L磷酸二氫胺溶液乙腈(21)(用三乙胺調(diào)pH至7.35)為流動相，流速1l/in，檢測波長210n，柱溫40。結(jié)果阿奇霉素的線性范圍為50.31006g/l，平均回收率100.1%，r=1.0000，RSD=0.8%(n=9)。結(jié)論HPL法測定結(jié)果與微生物檢定法比擬無顯著性差異。本方法可準(zhǔn)確、快速、簡便地測定阿奇霉素散劑的含量。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；阿奇霉素散劑；含量測定ntentdeterinatinfazithryinpderbyHPLABSTRATbjetiveTestabl

2、ishanHPLethdfrthedeterinatinfazithryinpder.ethdThehratgraphinditinsereasflled:8lun,0.045l/Laniuphsphatenbasislutinaetnitrile(21)(adjustedtpH7.35ithtriethylaine)asbilephase,teperature:40,theflrate:1.0l/in,detetinavelength:210n.ResultsThelinearrangeasintherangef50.31006g/l(r=1.0000),andtheeanrevery(n=

3、9)as100.1%(RSD=0.8%).nlusinTheethdisrapid,sipleandauratetdeterinethententfazithryinpder.KEYRDSHPL;Azithryinpder;ntentdeterinatin阿奇霉素為氮雜內(nèi)酯類抗生素，日抗基和?中國藥典?2022年版1均采用微生物檢定法測定其含量，?歐洲藥典?4.6版和USP26版中均采用HPL法，專屬性較強(qiáng)，試驗周期短，但均使用的是聚合物極性柱，?歐洲藥典?柱溫為70，USP采用電化學(xué)檢測器，其采用的設(shè)備在我國藥檢部門尚未普及2。抗生素微生物檢定法操作較為復(fù)雜，試驗周期長，影響因素多，誤差較大

4、。本文采用HPL法測定阿奇霉素散劑含量，可使阿奇霉素與其有關(guān)物質(zhì)得到較好的別離，方法簡便、快速、準(zhǔn)確。3方法與結(jié)果3.1方法的專屬性考察精細(xì)稱取阿奇霉素對照品20g，分別置10l容量瓶中，進(jìn)展如下破壞試驗：酸破壞：參加0.1l/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，室溫放置2h；堿破A：輔料空白；B：阿奇霉素對照品；：供試品；D：阿奇霉素與紅霉素對照品(1：阿奇霉素；2：紅霉素)圖1HPL色譜圖略壞：參加0.1l/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，制成約2g/l的溶液，室溫放置2h；氧化破壞：參加5%雙氧水溶解并稀釋至刻度，室溫放置2h；熱破壞：60加熱破壞6h，加流動相溶解并稀釋刻度。按上述色譜條件進(jìn)

5、樣記錄圖譜(圖2)，結(jié)果說明阿奇霉素對熱較穩(wěn)定，其它條件均不穩(wěn)定，破壞產(chǎn)生的各相關(guān)雜質(zhì)峰與主峰均能基線別離，說明該色譜條件能準(zhǔn)確測定阿奇霉素的含量。3.2線性關(guān)系精細(xì)稱取阿奇霉素對照品，加流動相溶解并稀釋，搖勻，制成2g/l的儲藏液。精細(xì)量取儲藏液0.5、1、2.5、5、10l分別置于10l容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20l，每一組濃度進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以阿奇霉素素對照品濃度x(g/l)對色譜峰面積y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：y0.4791x-1.7562r=1.0000結(jié)果說明，阿奇霉素濃度在50.31006g/l范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。3.3進(jìn)樣精細(xì)度對

6、同一份對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定峰面積，RSD為0.07%。3.4穩(wěn)定性試驗取上述溶液分別放置0、1、4、6、8和12h后測定，其峰面積根本一致，RSD為0.8%，說明溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。3.5最低檢測限按信噪比31計，阿奇霉素的檢測限為60ng。3.6加樣回收率試驗精細(xì)稱取份含量的同一批號的樣品，各置50l容量瓶中，分別參加精細(xì)稱定的阿奇霉素對照品，用流動相制成相當(dāng)于含量測定濃度的80%、100%和120%的溶液，3個濃度各測定三次，計算回收率，低、高、中三種濃度回收率分別為99.2%、100.8%和100.4%；RSD分別為0.66%、0.75%和0.36%，得平均回收率

7、為100.1%。因此選獲得高效液相色譜法準(zhǔn)確度較好。圖2方法的專屬性圖譜略表1含量測定略4討論(1)阿奇霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，紫外吸收較弱，取其末端吸收210n波長處測定，可得到滿意的響應(yīng)值。柱溫較低時峰形拖尾，在40時明顯改善。(2)對多種不同的流動相如乙腈0.1%三乙胺水溶液(3070)(用磷酸調(diào)pH值至4.0)3；0.5%磷酸二氫銨乙腈(7327)；甲醇水(928)4等進(jìn)展試驗，結(jié)果顯示，以0.045l/L磷酸二氫胺溶液乙腈(21)(用三乙胺調(diào)pH至7.35)為流動相時峰形較好，保存時間適宜，主峰與輔料及雜質(zhì)峰(紅霉素峰)能到達(dá)基線別離。(3)阿奇霉素散劑中的輔料如十六醇、蔗糖等在210n處有吸收，但均與主峰很好別離，不干擾對阿奇霉素的含量測定。(4)雖然采用HPL法和微生物檢定法對阿奇霉素散劑的含量進(jìn)展測定沒有顯著性差異，但HPL法快速、簡便，精細(xì)度高，誤差小，結(jié)果準(zhǔn)確。【參考文獻(xiàn)】1國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2022：2912TheUnitedStatesPharapEialnventinIn.TheUnitedStatesPharapeialS.RhvilleD:TheUnitedStatesPharapeialv