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文檔簡介

1、實驗六 胰蛋白酶活力的測定(先打開水浴鍋,溫度設(shè)置成40攝氏度)一、實驗目的二、實驗原理 三、實驗用品四、實驗步驟五、實驗內(nèi)容六、實驗報告1一、實驗目的掌握蛋白酶活力測定的原理與基本方法。了解紫外分光光度計的原理和使用方法,學習繪制標準曲線的方法2二、實驗原理1蛋白酶是一種水解酶，它將酪蛋白水解成酪氨酸等物質(zhì)。2用紫外分光光度計可以定量的比較顏色的深淺，從而推導出酪氨酸的量，根據(jù)生成物的含量可以計算蛋白酶的活力。3.蛋白酶活力單位定義：在40C，pH11的條件下，每ml水解液分解產(chǎn)生的酪氨酸的量。3三、器材儀器和主要試劑 紫外分光光度計 0.5% 酪蛋白 100 g/mL Tyr 溶液 4四、

2、實驗操作1、酪氨酸標準曲線的制作以酪氨酸濃度g/ml數(shù)為橫坐標， A275nm為縱坐標，作出標準曲線。 52、蛋白酶活力的測定管號酶液（ml）酪蛋白（ml）三氯醋酸（ml）40水浴準確保溫10分鐘三氯醋酸（ml）酪蛋白（ml）40水浴保溫10分鐘，過濾得濾液 1號(樣品)12-3-2號(對照)1-3-26酶活力單位定義：規(guī)定在 40 ， pH11 的條件下，水解酪蛋白每分鐘1 ml水解液產(chǎn)生酪氨酸的量： K （ A 樣 A 對 ） N /（t V）1. K ：標準曲線上光吸收為 1 時的酪氨酸微克數(shù)； A 樣 ：樣品液光吸收值； 2. A 對 ：對照液光吸收值； 3. N ：本次實驗酶液的稀釋倍數(shù)，54. t ：酶促反應的時間（分），本實驗 t =10 ； 5. V ：酶促反應管的總體積（毫升數(shù)），本實驗 V =5 ； 7五、思考題酶的試驗為何設(shè)對照又要設(shè)空白

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