一SFRP過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT基因表達(dá)譜的影響

1、一SFRP過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT基因表達(dá)譜的影響研 究 背 景研究背景CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179 結(jié)直腸癌的發(fā)病率研究背景Wnt信號(hào)通路 分泌型卷曲相關(guān)蛋白SFRP 一組分泌型糖蛋白家族SFRPs有五個(gè)家族成員在人類組織中表達(dá)定位于染色體8p 1211.1 包括一個(gè)特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一個(gè)C-末端。 （除SFRP3以外）研究背景分泌型卷曲相關(guān)蛋白SFRP通過與Wnt信號(hào)的蛋白質(zhì)相互作用以阻止它們結(jié)合到Fz蛋白或與Fz形成無功能復(fù)合物而阻礙Wnt信號(hào) 研究背景研 究 目 的檢測SFRP4基因轉(zhuǎn)染腸癌細(xì)胞株HCT116后基因

2、表達(dá)譜的變化，深入探討SFRP4在結(jié)直腸癌發(fā)生中的作用機(jī)制。 技術(shù)路線pcDNATM 3.1-SFRP4重組質(zhì)?；蛐酒瑱z測（Pathway分析）雙酶切鑒定WB鑒定SFRP4表達(dá)轉(zhuǎn)染HCT116后篩選穩(wěn)定表達(dá)株結(jié)果pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果pcDNA3.1載體大小為5500bp，SFRP4基因片段大小為1056bp EcoRI和HindIII雙酶切重組質(zhì)粒后凝膠電泳圖 Western Blot 檢測pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞后SFRP4的表達(dá) 0道為pcDNA3.1空載體

3、，1和2道為pcDNA3.1-SFRP4 pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果GenBank ID Gene nameCommentsInduction-fold NM_001040056MAPK3絲裂素活化蛋白激酶34.3NM_001006617MAPKAP1絲裂素活化蛋白激酶相關(guān)蛋白15.0NM_002756MAP2K3MAPKK32.3NM_007181MAP4K1MAPKKKK12.8NM_021970MAP2K1IP1MAPKK1相關(guān)蛋白12.3NM_021284MEK蛋氨酸腦啡肽3.0上調(diào)的MAPK家族基

4、因 下調(diào)的TNF家族基因GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_006291TNFAIP2腫瘤壞死因子，alpha-誘導(dǎo)蛋白20.25NM_006290TNFAIP3腫瘤壞死因子，alpha-誘導(dǎo)蛋白30.38NM_014350TNFAIP8腫瘤壞死因子，alpha-誘導(dǎo)蛋白80.25NM_003844TNFRSF10A腫瘤壞死因子受體超家族10A0.44NM_003840TNFRSF10D腫瘤壞死因子受體超家族10D0.5凋亡相關(guān)基因的改變GenBank ID Gene nameCommentsInduction-foldNM_000875I

5、GF1R胰島素樣生長因子受體4.9NM_000043FASTNF受體超家族成員62.6NM_006538BCL2L11Bcl2-L110.13pcDNATM 3.1-SFRP4質(zhì)粒的構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的鑒定芯片生物信息學(xué)分析RT-PCR驗(yàn)證部分基因芯片的結(jié)果1，細(xì)胞轉(zhuǎn)染SFRP4前；2，細(xì)胞轉(zhuǎn)染SFRP4后。-actin作為對照。 RT-PCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果討論我們通過基因芯片技術(shù)對基因組進(jìn)行高通量的研究，通過生物信息學(xué)分析，我們篩選出比較重要的p38MAPK信號(hào)通路相關(guān)基因、TNF家族基因和凋亡有關(guān)基因的變化來探討SFRP4對腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制。討論MAPK信號(hào)通路參與細(xì)胞增殖、分化及凋亡的調(diào)控，并在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的病理過程中發(fā)揮重要作用 腫瘤壞死因子（TNF）家族是一類具有廣泛生物學(xué)活性的分子，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化等作用。