無菌薄膜過濾法（模版）

1、公司*產(chǎn)品無菌檢査方法適用性試驗1、樣品信息樣品名稱生產(chǎn)廠家規(guī)格型號批號2、培養(yǎng)基及試劑名稱生產(chǎn)廠家批號硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基胰酪大豆腺瓊脂培養(yǎng)基0.9%無菌氯化鈉溶液沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沖洗液及稀釋液3、菌種基本宿息:菌種名稱菌種來源菌種編號菌種代數(shù)金黃色葡萄球菌CMCC (B) 26003大腸埃希菌CMCC (B) 44102生抱梭菌CMCC (B) 64941枯草芽砲桿菌CMCC (B) 63501白色念珠菌CMCC (F) 98001黑曲霉CMCC (F) 980034、菌液制備：2.1接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽砲桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪

2、大豆 腺培養(yǎng)基中或胰酪大豆腺脂培養(yǎng)基上,3035C培養(yǎng)1824小時，培養(yǎng)物用0.9% 無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。2.2接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035C培養(yǎng)18 24小時，培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。2.3接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂斜 面培養(yǎng)基上，2025C培養(yǎng)2448小時，培養(yǎng)物用().9%無菌氯化鈉溶液制成每 lml含菌數(shù)小于lOOcfu的菌懸液。2.4接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025C 培養(yǎng)57天，加入35ml含0

3、.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉 溶液，將孑包子洗脫。然后，采用適宜的方法吸岀抱子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于lOOcfu 的菌抱子懸液。5、菌落計數(shù):菌種名稱稀釋級別菌落計數(shù)cfu/ml金黃色葡萄球菌大腸埃希菌生抱梭菌枯草芽砲桿菌白色念珠菌黑曲霉6、無菌檢查薄膜過濾法方法適用性試驗：6供試液準(zhǔn)備：描述供試液制備過程(每個試驗菌取樣品1()個)。6.2試驗組：取1個封閉式薄膜過濾器，每個過濾器取 上述6.1屮制備的供試 液總量進(jìn)行薄膜過濾后,用進(jìn)行沖洗，沖洗次，每次ml,在最后一次的沖洗液屮加

4、入小于lOOcfu的金黃色葡萄球菌、過濾，加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)；大腸埃希菌、生抱梭菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉按照上述步驟操作， 其中大腸埃希菌、生抱梭菌加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，枯草芽抱桿菌、白色念 珠菌、黑曲霉加入100ml胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基。6.3對照組：另取6個封閉式薄膜過濾器，其中3個濾筒內(nèi)分別加入100ml硫乙 醇酸鹽流體培養(yǎng)基，并在每個濾筒內(nèi)分別加入小于lOOcfu的金黃色葡萄球菌、 大腸埃希菌、生抱梭菌；另3個濾筒分別加入小于lOOcful枯草芽抱桿菌、白色 念珠菌、黑曲霉，并在每個濾筒分別加入胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基。注：6. 1和6.2中供試液

5、的制備過程、每個濾筒內(nèi)過濾供試液的量、沖洗液種 類、沖洗次數(shù)、每次沖洗量由企業(yè)根據(jù)產(chǎn)品的特性和藥典的要求確定。6.4培養(yǎng)：上述培養(yǎng)基置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過5天，逐日觀察記錄各管試驗菌 生長情況。6. 5驗證結(jié)果:培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基培養(yǎng)時間(d)1234512345金黃色葡萄球菌試驗組/對照組/大腸埃希菌試驗組/對照組/生總梭菌試驗組/對照組/枯草芽砲桿菌試驗組/對照組/白色念珠菌試驗組/對照組/黑曲霉試驗組/對照組/“/”表示不適用；“-”表示試驗菌生長微弱、緩慢或不生長；“+”表示試驗菌生長良好與對照管相比，含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，表明 経

6、和產(chǎn)品的檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽 略不計，照此檢查方法和檢査條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。6. 6供試品無菌檢查方法的確定：取供試品20個，以無菌操作拆開每個包裝，供試液制備方法（同6. 1）,取兩個封閉式薄膜過濾器進(jìn)行過濾，每個濾筒過濾ml的供試液后用進(jìn)行沖洗，沖洗次，每次沖洗 ml,濾筒內(nèi)分別加入100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和100ml胰酪大豆腺液體培養(yǎng)基。另取供試品10個，以無菌操作 拆開每個包裝，供試液制備方法（同6. 1）,用一個封閉式薄膜過濾器進(jìn)行過濾， 每個過濾器過濾ml的供試液后按上述方法進(jìn)行培養(yǎng)，并接種小于lOOcfu的作為陽性對照。按中華人民共和國藥典2015年版四部