醫(yī)院檢驗中心ENA多肽抗體譜操作規(guī)程

1、醫(yī)院檢驗中心ENA多肽抗體譜操作規(guī)程原理本試劑盒采用國際先進(jìn)的生物技術(shù)-免疫印跡技術(shù)（Immunoblotting）,將具有多種抗原性的細(xì)胞核鹽水可提取性抗原（ENA,經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)印于硝酸纖維膜上，可一次檢測8-10種自身抗體，用于系統(tǒng)工斑狼瘡（SLE）、混合性結(jié)締組織?。∕CTD健皮?。≒SS）,干燥綜合癥（SS）和多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PD/DM）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等六種不同風(fēng)濕性疾病的診斷和鑒別診斷。試劑1.濃縮洗滌液25mlX24.顯色液B25mlX12.酶標(biāo)抗體0.6mlX25.終止液25mlXI3.顯色液A25mlx16.膜條8條X5步驟1.將濃縮洗滌液用蒸儲水作1:10稀釋。

2、2.每槽各加0.5ml洗滌液，然后加待測血清10ul，充分混勻,置37c孵育30分鐘.3,取由反應(yīng)槽，棄去槽中液體，在吸水紙拍干，用洗滌液洗滌4次，每次1ml,搖動，每次1分鐘,4,每槽加入洗滌液0.5ml,再加酶標(biāo)抗體20ul,混勻后置37c孵育30分鐘.5.同(3)洗滌6,加入顯色劑A0,5ml+顯色劑B0.5ml,室溫反應(yīng)10分鐘.7.待陽性帶顯色清晰，即加終止液0.5ml,終止反應(yīng)1分鐘后棄去液體，用自來水洗滌后取由薄膜，待干后即可判定結(jié)果,結(jié)果觀察檢測膜上顯色區(qū)帶與自身抗體檢測判斷“色K帶立置代口檢測抗體說明29KDB'抗Sm主要看D,D總與B一起由現(xiàn)單獨由現(xiàn)B'/B

3、無D,不能判斷抗Sm陽性28KDB13.5KDD73KD抗U1RNP73KD（即國外報道的70KD）,和A可同時由現(xiàn)，也可分別由現(xiàn),C常伴上述二區(qū)起由現(xiàn)，單獨由現(xiàn)少見，抗U1RNPT時也可與B'.B反應(yīng)由現(xiàn)顯色區(qū)帶32KDA17.5KDC52KD抗SSA本試劑盒用兔胸腺為抗原來源，因此缺60KD蛋白多肽48KD抗SSB二區(qū)帶不僅同時由現(xiàn)，也與52KD區(qū)帶同時由現(xiàn)，但48/47KD后時很弱，不易分辨47KD45KD86KD抗兩區(qū)帶同時由現(xiàn)，在兩區(qū)帶間后時可見到兩Scl-70條較弱的區(qū)帶，它們都是100KD的降解產(chǎn)物70KD55KD抗Jo-1確定55KD需慎重,因臨床意義不明的54.56K

4、D和55KD在位置上相差和U138KD抗核糖體三區(qū)帶同時由現(xiàn)，但有時16.5,15KD區(qū)帶較弱16.5KD15KD注意事項1 .結(jié)果判斷請參看標(biāo)準(zhǔn)譜帶圖，零位線（蘭線）下約2mmt的第一條顯色帶為試劑質(zhì)控線，此顯色帶若不由現(xiàn)，說明試劑失效。4c保2 .本試劑盒放4c保存。酶標(biāo)抗體勿放一20c保存。取膜條時。剪開鋁塑外包裝，剩余的膜條須放入自封袋中，仔細(xì)封好自封袋口，以防膜條被潮濕，并將其置存。3 .濃縮洗滌液需臨用前稀釋，整個操作中，洗滌液用量大約為每人份1伽l,可參照此量稀釋。未用完的洗滌液棄之，不可留作下次用。4 .全部操作最好在生化搖擺平臺上擺動進(jìn)行，改用手工問隙晃動也可檢測，但敏感性會有所下降。5 .顯色液A、B需恢復(fù)至室溫方可使用。顯色液有棕色顆粒時，不影響檢測結(jié)果。6 .標(biāo)準(zhǔn)帶譜為根據(jù)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)血清定位后，用電腦制作，每個試劑盒對應(yīng)一張標(biāo)準(zhǔn)帶譜，進(jìn)行結(jié)果判斷時，不同試劑盒間的標(biāo)準(zhǔn)帶譜不能混用，要注意膜條鋁塑袋上批號與標(biāo)準(zhǔn)帶譜下方批號一致。7 .判斷結(jié)果時，要注意將譜帶定位與帶型結(jié)合起來。帶型指一種抗體有多條區(qū)帶時，區(qū)帶間相對不變的位置關(guān)系構(gòu)成的圖型。如抗Scl-70常由現(xiàn)4條；抗SSB常由現(xiàn)2條，且總是與抗SSA同時由現(xiàn)；抗Sm常由現(xiàn)2-3條;抗D'E（抗Ijl4）常由現(xiàn)56條等等。譜帶定位時與標(biāo)準(zhǔn)帶相差1mmrt屬允許范圍。8 .本試劑盒也可作抗D