島津ATLCsolution儀器操作

1、島津島津20AT-solution儀器培訓(xùn)儀器培訓(xùn)主講人：宋戰(zhàn)鋒主講人：宋戰(zhàn)鋒 2010.11.2目目 錄錄 色譜法：又稱色層法和層析法，是一種物理化學(xué)分離和分析方法，這種分離方法是基于物質(zhì)溶解度、蒸汽壓、吸附能力、立體結(jié)構(gòu)或離子交換等物理化學(xué)性質(zhì)的微小差異，使其在流動(dòng)相和固定相之間的分配系數(shù)的不同，而當(dāng)兩相做相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，組分在兩相間進(jìn)行連續(xù)多次分配，從而達(dá)到彼此分離。 1906年，俄過科學(xué)家茨維特用石油醚、碳酸鈣分離葉綠素的試驗(yàn)被認(rèn)為是色譜法最早的應(yīng)用，色譜即由chroma(色彩)和graphos(圖譜)構(gòu)成，就是我們現(xiàn)在所用的chromatography(色譜)一詞。色譜的工作原理色譜的工

2、作原理液相色譜儀器系統(tǒng)液相色譜儀器系統(tǒng)溶劑傳輸系統(tǒng)高壓泵樣品引入系統(tǒng)進(jìn)樣器樣品分離系統(tǒng)色譜柱信號(hào)檢測系統(tǒng)檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件流動(dòng)相的選擇v在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱。v正相色譜的流動(dòng)相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。v反相色譜的流動(dòng)相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。 流動(dòng)相的選擇v 乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。 價(jià)格是甲醇的67倍。v 100%甲醇的沖洗強(qiáng)度相當(dāng)于89%的乙腈/水 。v截止波長乙腈190、甲醇205、正己烷210、乙醚220、四氫呋喃225、二氯甲烷245

3、、氯仿245nm。 緩沖鹽流動(dòng)相注意點(diǎn)(1)現(xiàn)配現(xiàn)用.低溫下密封保存一般不超過3天。(2)確認(rèn)檢測波長下緩沖液是否有大的吸收（在波 長210nm附近進(jìn)行檢測時(shí)，不能用醋酸和檸檬 酸的緩沖液）(3)緩沖液必須過濾膜。(4)使用緩沖液期間，用注射器推純水，清洗柱塞 桿，延長泵密封墊壽命。(5)工作完畢后及時(shí)沖洗LC系統(tǒng)內(nèi)的緩沖液。(6)梯度洗脫時(shí),確認(rèn)不同比列的緩沖液與有機(jī)溶劑 能互溶。流動(dòng)相的過濾和脫氣流動(dòng)相的過濾流動(dòng)相的過濾 濾膜類型： 聚四氟乙烯濾膜： 適用于所有溶劑，酸和鹽。 醋酸纖維濾膜： 不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。 尼龍66濾膜： 適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強(qiáng)

4、酸， 不適用于二甲基甲酰胺。 再生纖維素濾膜： 蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑脫氣的目的 1. 防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障 1）泵中氣泡使液流波動(dòng)，改變保留時(shí)間和峰面積 2）柱中氣泡使流動(dòng)相繞流，峰變形2. 防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動(dòng)引起的檢測不穩(wěn)定程度 1）示差折射率檢測器*使折射率變化 2）UV檢測器（200nm以下） *溶解氧氣有吸收 3）熒光檢測器*溶解氧氣有消光作用脫氣的方法脫氣的方法1. 減壓吸氣脫氣法減壓吸氣脫氣法 *可以抑制配制流動(dòng)相時(shí)產(chǎn)生的氣泡可以抑制配制流動(dòng)相時(shí)產(chǎn)生的氣泡 *只是暫時(shí)的脫氣法只是暫時(shí)的脫氣法 *不能解決因溶解氣體造成的問題不能解決因溶解

5、氣體造成的問題2. He清除法清除法3. 使用氟樹脂膜的減壓脫氣法使用氟樹脂膜的減壓脫氣法4. 超聲波脫氣法超聲波脫氣法HeHe清除法清除法調(diào)壓閥調(diào)壓閥排氣閥排氣閥往送液泵往送液泵流動(dòng)相流動(dòng)相過濾器過濾器使用氟樹脂膜的減壓脫氣法使用氟樹脂膜的減壓脫氣法氟樹脂膜氟樹脂膜真空室真空室往送液泵往送液泵真空泵真空泵控制器控制器流動(dòng)相流動(dòng)相吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器進(jìn)樣器檢測器洗脫液LC-20AT泵：串聯(lián)式往復(fù)泵LC-20AD泵：并聯(lián)式往復(fù)泵單向閥結(jié)構(gòu)單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動(dòng)相單向閥原理單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭進(jìn)樣系統(tǒng)

6、v手動(dòng)進(jìn)樣器v自動(dòng)進(jìn)樣器手動(dòng)進(jìn)樣器的原理圖手動(dòng)進(jìn)樣器的原理圖 裝填狀態(tài)裝填狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)六通閥進(jìn)樣方式：v部分裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50%（最多75），并要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同。 v完全裝液法：進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的510倍（最少3倍），這樣才能完全置換定量環(huán)內(nèi)的流動(dòng)相，消除管壁效應(yīng)，確保進(jìn)樣的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。 注意事項(xiàng)：樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45m濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后

7、應(yīng)閥清洗接頭和注射器沖洗進(jìn)樣閥，防止交叉污染。自動(dòng)進(jìn)樣器注意事項(xiàng)：v樣品瓶中應(yīng)有超過瓶高1/3的樣品量v樣品瓶中樣品不要裝太滿，應(yīng)留有一定的空氣。v使用與儀器配套的樣品瓶。色譜柱v色譜柱的分類： 色譜柱按用途可分為分析型和制備型尺寸規(guī)格：常規(guī)分析柱（常量柱），內(nèi)徑25mm（常用4.6mm，國內(nèi)有4mm和5mm），柱長1030cm；窄徑柱（narrow bore，又稱細(xì)管徑柱、半微柱semi-microcolumn），內(nèi)徑12mm，柱長1020cm；毛細(xì)管柱（又稱微柱microcolumn），內(nèi)徑0.20.5mm半制備柱，內(nèi)徑5mm；實(shí)驗(yàn)室制備柱，內(nèi)徑2040mm，柱長1030cm； C18硅膠

8、填料結(jié)構(gòu)高效液相色譜檢測器UV熒光示差折光蒸發(fā)光散射信號(hào)吸光度熒光強(qiáng)度折光率散射光強(qiáng)流速影響無無無無溫度影響小小大小檢測限(g/ml)10-1010-1310-710-9梯度洗脫適宜適宜不宜適宜細(xì)管徑柱難難難適宜樣品破壞無無無無通用型否否是是熒光檢測器使用注意事項(xiàng)電化學(xué)檢測器L-ECD-6A檢測池構(gòu)造作用電極：玻璃狀碳制品比較電極：Ag/AgCL輔助電極：不銹鋼原理：n如測定兒茶酚胺：作用電極加足夠的電位，被測物質(zhì)在作用電極表面發(fā)生電子轉(zhuǎn)交換反應(yīng)，此時(shí)流動(dòng)的電子（電流）通過引線22-A流到L-ECD-6A的電流測定放大器上唄測定出來。流動(dòng)相：含有無極電介質(zhì)的水溶液或這種溶液和有機(jī)溶劑等分混合溶液LC-solution軟件系統(tǒng)吸濾頭吸濾頭單向閥單向閥單向閥單向閥柱塞密封圈柱塞密封圈流動(dòng)相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈管路過濾器管路過濾器排液閥壓力傳感器管路過濾器流動(dòng)相手動(dòng)進(jìn)樣器手動(dòng)進(jìn)樣器定子轉(zhuǎn)子塑料箍彈簧不銹