課用肝糖原提取與PPT課件

1、實驗報告問題： 字如其人 結(jié)果無分析 照抄第1頁/共17頁糖原的結(jié)構(gòu)特點 糖原是一種高分子化合物(分子量約為400萬)。微溶于水，無還原性，與碘作用生成紅色。1. 葡萄糖單元以葡萄糖單元以 -1,4-1,4-糖苷糖苷 鍵鍵形成長鏈。形成長鏈。2. 約約1010個葡萄糖單元處形成分個葡萄糖單元處形成分枝，分枝處葡萄糖以枝，分枝處葡萄糖以 -1,6-1,6-糖苷鍵糖苷鍵連接，連接，分支增加，溶分支增加，溶解度增加。解度增加。第2頁/共17頁第3頁/共17頁實驗原理實驗原理 肝糖原是糖在體內(nèi)的重要儲存形式之一，儲存量雖然不多，但在代謝過程中，它是維持血糖平衡及體內(nèi)糖的重要來源之一，其合成或分解，對血

2、糖濃度的調(diào)節(jié)起著重要的作用。第4頁/共17頁肝臟蛋白質(zhì)(沉淀)糖原(上清)糖原沉淀與碘液反應(yīng)斑氏試劑三氯乙酸95%乙醇，離心HCl水解加H2O溶解肝糖原：棕紅色磚紅色沉淀第5頁/共17頁實驗試劑10（w/v）三氯乙酸溶液1（w/v）三氯乙酸溶液295（v /v）乙醇3濃鹽酸4第6頁/共17頁實驗試劑20%（w/v）NaOH溶液1碘液2斑氏試劑3第7頁/共17頁實驗器材洗凈的石英砂1研缽2離心機3電磁爐4第8頁/共17頁實驗步驟一、肝糖原的提取稱取肝組織2g（兩個組用），置研缽中。加入洗凈的石英砂少許及10三氯醋酸2ml，然后研磨。再加5三氯乙酸4ml，繼續(xù)研磨，至肝臟組織已充分磨成肉糜狀為止。

3、然后以2500rmin離心10min。將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，測量其體積。第9頁/共17頁加入等體積的95乙醇?；靹蚝?，靜置10min，此時可見糖原呈絮狀析出。將此混合物以2500rmin離心10min。棄去上清液，并將離心管倒置于濾紙上12min。向沉淀內(nèi)加入蒸餾水2ml，再用玻璃棒攪拌沉淀至溶解，即得糖原溶液。（分兩份）第10頁/共17頁實驗步驟二、肝糖原的鑒定糖原的顏色反應(yīng)：在白瓷盤的兩個凹槽內(nèi)，一個滴加3滴肝糖原溶液，一個滴加3滴蒸餾水。在兩個凹槽內(nèi)各加1滴I2-KI溶液，在桌面上來回晃動白瓷盤。比較兩凹槽內(nèi)溶液顏色有何不同，并解釋之。第11頁/共17頁取出冷卻，然后以20NaOH溶

4、液中和至中性(用pH試紙檢驗，加入約3滴)。在上述溶液內(nèi)，加入斑氏試劑2ml2ml。再將該試管置沸水浴加熱5min5min，取出冷卻。觀察沉淀的生成，并解釋之。肝糖原水解實驗：將剩余的糖原溶液轉(zhuǎn)入1支試管內(nèi)，加入濃鹽酸3滴后，將之放在沸水浴中加熱10 min。第12頁/共17頁注意事項 取肝臟組織時，吸去其附著血液，因血液可能含還原性葡萄糖，會影響后面糖原的鑒定。 研磨應(yīng)充分，使細胞破裂，肝糖原釋放出來。研磨不充分會得不到糖原或含量很少，影響后面的鑒定。 研磨后勻漿轉(zhuǎn)入離心管離心可用滴管轉(zhuǎn)移，如果采用倒入，不能灑落管外，應(yīng)盡量轉(zhuǎn)移干凈。 離心時與另一組的離心管平衡，對稱放入離心機。 上清液加入

5、95乙醇后，注意混勻，防止分層，可用滴管吹吸混勻，或玻璃棒攪拌混勻。 調(diào)節(jié)pH，必須調(diào)至中性。第13頁/共17頁糖原會在濃鹽酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有還原性的麥芽糖和葡萄糖。還原性糖會在堿性條件下，班氏試劑與其在沸水浴下生成磚紅色Co2O沉淀。班氏試劑為堿性溶液，所以須用20%NaOH溶液中和至中性。過酸，Cu2+會變得較為穩(wěn)定，不容易發(fā)生反應(yīng)，所以不能進行試驗。 如果溶液中還原糖含量較低，產(chǎn)生的氧化亞銅便會相應(yīng)減少，因此試驗后可能只會出現(xiàn)綠色、混濁的黃色或橙色沉淀物。班氏試劑中有CuSO4，NaCO3和檸檬酸鈉。CO32-提供堿性環(huán)境，檸檬酸鈉為絡(luò)合物，幫助Cu2+與葡萄糖反應(yīng)，

6、沸水浴下，Cu2+變?yōu)镃u+，即Cu2O，Cu2O為磚紅色沉淀。葡萄糖被氧化為糖酸，麥芽糖亦如此。第14頁/共17頁 糖原儲存于細胞內(nèi)，采用研磨勻漿等方法可使細胞破碎，低濃度的三氯醋酸能使蛋白質(zhì)變性，破壞肝組織中的酶且沉淀蛋白質(zhì)，而糖原仍穩(wěn)定地保存于上清液中，從而使糖原與蛋白質(zhì)等其它成分分離開來。糖原不溶于乙醇而溶于熱水，故先用95乙醇將濾液中糖原沉淀，再溶于熱水中。 糖原水溶液呈乳樣光澤，遇碘呈紅棕色。這是糖原中葡萄糖長鏈形成的螺旋中，依靠分子間引力吸附碘分子后呈現(xiàn)的顏色。糖原還可被酸水解為葡萄糖，利用呈色反應(yīng)和葡萄糖的還原性，可判定肝組織中糖原的存在。 CuSO4十2NaOH Na2 SO4+Cu(OH)2 2Cu(OH)2十C6H12O6 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O 2CuOH Cu2O(紅色)+H2O Cu(OH)2 CuO(黑色)+H2O第15頁/共17頁 提取糖原時，首先將新鮮的肝組織與石英砂及三氯乙酸共同研磨。這樣當(dāng)肝組織被充分破碎后，其中的蛋白質(zhì)會被三氯乙酸所沉淀。而糖原仍留在溶液中。然后離心除去沉淀，濾液中的肝糖原可通過加入乙醇而沉淀下來。將乙醇沉淀的糖原溶于水，一部分用做碘的顏色反應(yīng)，另一部分經(jīng)酸水解成葡萄糖后，用斑氏試劑進行檢驗。 糖原中葡萄糖螺旋鏈吸附碘產(chǎn)生的顏色與葡萄糖殘基數(shù)的多少有關(guān)。葡萄糖殘基在20個以下的會使碘呈現(xiàn)紅色，2