293T細胞培養(yǎng)標準操作規(guī)程_第1頁
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文檔簡介

1、百利藥業(yè)生物藥研發(fā)部標準操作規(guī)程題目：293T細胞傳代培養(yǎng)操作規(guī)程編號：SOP-M-e-003-制定者：（簽名）日期：年月日批準者：（簽名）日期：年月日生效日期：年月日修改和追加記錄第1頁共3頁百利藥業(yè)生物藥研發(fā)部編號：SOP-M-e-OO-題目：293T細胞培養(yǎng)操作規(guī)程1目的293T細胞是常用于包裝和擴增病毒載體的工具細胞，因此做好293T細胞的培養(yǎng)，為保證相關實驗的正常進行提供必要條件。2適用范圍本部門293T細胞培養(yǎng)3操作方法31將移液器和移液槍、15ml離心管、離心管架、75cm2新的細胞培養(yǎng)瓶放于生物安全柜中，按照生物安全柜的標準操作規(guī)程，將生物安全柜的紫外開啟半小時。3.2將含10

2、%胎牛血清和100U/ml雙抗的DMEM及PBS放于37°C水浴鍋中預熱。321將已長到80%-90%的293T細胞培養(yǎng)瓶從37C,5%的CO2培養(yǎng)箱中取出，先用75%的酒精噴灑于瓶表面，將細胞培養(yǎng)瓶旋轉放于生物安全柜中，用無菌的移液管吸凈其中的培養(yǎng)基，加5ml的預熱的PBS洗滌一次，吸凈PBS。322將含EDTA-0.25%tyption用PBS稀釋兩陪到五倍，向該75cm2的細胞瓶中加入3ml稀釋好的EDTA-0.25%tyption，讓其充分平鋪于細胞表面。蓋好瓶蓋，將細胞瓶放在顯微鏡下觀察，直到細胞變圓，加含10%胎牛血清的DMEM終止反應，用移液管輕輕將瓶上的細胞吹下，將細胞液移到15ml無菌的離心管中，1000rpm離心3分鐘。323將離心上清吸棄掉，用手指輕輕拍打離心管底將底部細胞分散開，再加3mlDMEM培養(yǎng)基將分散的細胞重懸稀釋開，取一定量的細胞液進行n倍稀釋后計數(shù)，按照細胞計數(shù)標準操作規(guī)程進行。324計數(shù)好之后細胞傳代密度按照25X104個細胞/cm2進行傳代培養(yǎng)，每個75cm2的培養(yǎng)瓶中加10mlDMEM培養(yǎng)基，放于37C,5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。32

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