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1、第九章第九章 基因突變基因突變第一節(jié)第一節(jié) 寡核苷酸介導的基因突變寡核苷酸介導的基因突變第二節(jié)第二節(jié) 盒式突變法盒式突變法第三節(jié)第三節(jié) 利用利用PCR進行進行DNA序列的突變序列的突變第四節(jié)第四節(jié) 隨機突變隨機突變基因突變是研究基因表達調控和蛋白質的結構功能基因突變是研究基因表達調控和蛋白質的結構功能的重要方法的重要方法 位點特異性突變位點特異性突變 寡核苷酸介導的基因突變；盒式突變；寡核苷酸介導的基因突變；盒式突變；PCR 隨機突變隨機突變第一節(jié)第一節(jié) 寡核苷酸介導的基因突變寡核苷酸介導的基因突變步驟：步驟：（1）正鏈）正鏈DNA的合成的合成（2）突變引物的合成）突變引物的合成 17-19個

2、個特異性特異性避免自身的二級結構避免自身的二級結構位置盡量在中間位置盡量在中間（3）異源雙鏈）異源雙鏈DNA分子的制備分子的制備（4）轉染）轉染（5）突變體的篩選）突變體的篩選（6）突變體的鑒定（測序）突變體的鑒定（測序）1、Kunkel突變法突變法 dUTP dUMP dUTP酶酶 dut- dUTP庫庫 尿嘧啶尿嘧啶N糖基化酶糖基化酶 ung- 胸腺嘧啶殘基被尿嘧啶所取代胸腺嘧啶殘基被尿嘧啶所取代利用利用Kunkel法，以法，以M13噬菌體噬菌體DNA為載體進行為載體進行寡核苷酸介導的位點特異性突變寡核苷酸介導的位點特異性突變2、硫代磷酸硫代磷酸寡核苷酸介導的突變寡核苷酸介導的突變 某些限

3、制性內切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷某些限制性內切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷酸間連鍵酸間連鍵硫代磷酸寡核苷酸介導的突變硫代磷酸寡核苷酸介導的突變第二節(jié)第二節(jié) 盒式突變法盒式突變法第三節(jié)第三節(jié) 利用利用PCR進行進行DNA序列的突變序列的突變1、在基因的、在基因的5或或3末端產生突變末端產生突變2、重疊延伸重疊延伸和基因突變和基因突變（1）取代突變）取代突變（2）插入突變）插入突變（3）缺失突變）缺失突變3、產生分子嵌合體、產生分子嵌合體重疊延伸重疊延伸PCR對對DNA片段進行剪接的原理圖片段進行剪接的原理圖利用雙側重疊延伸利用雙側重疊延伸PCR，產生取代突變，產生取代突變利用雙側重疊延伸利用雙側重疊延伸PCR，產生插入突變，產生插入突變利用雙側重疊延伸利用雙側重疊延伸PCR，產生缺失突變，產生缺失突變雙側重疊延伸及雙側重疊延伸及DNA分子嵌合體形成分子嵌合體形成單側重疊延伸及單側重疊延伸及DNA分子嵌合體形成分子嵌合體形成第四節(jié)第四節(jié) 隨機突變隨機突變1、化學、物理方法、化學、物理方法亞硝酸、亞硫酸鹽、羥胺、肼及弱酸水解亞硝酸、亞硫酸鹽、羥胺、肼及弱酸水解2、酶法、酶法3、PCR法法改變

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