A細(xì)胞工程第節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1A細(xì)胞工程第節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交細(xì)胞工程第節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交第一頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。介紹原生質(zhì)體融合方法，了解雜種細(xì)胞的篩選、鑒定和雜種植株的鑒定方法。第1頁(yè)/共48頁(yè)第二頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。將植物細(xì)胞游離成原生質(zhì)體，在適宜的培養(yǎng)條件下，使其再生細(xì)胞壁，進(jìn)行經(jīng)過(guò)培養(yǎng)成完成植株第2頁(yè)/共48頁(yè)第三頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。原生質(zhì)體原生質(zhì)體第3頁(yè)/共48頁(yè)第四頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。細(xì)胞細(xì)胞原生質(zhì)體原生質(zhì)體酶解酶解體細(xì)胞體細(xì)胞融融 合合遺傳轉(zhuǎn)化遺傳轉(zhuǎn)化共培養(yǎng)共培養(yǎng)顯微操作顯微操作基因槍基因槍導(dǎo)導(dǎo) 入入原生質(zhì)體原生質(zhì)體培培

2、養(yǎng)養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)愈傷組織愈傷組織誘誘 導(dǎo)導(dǎo)再生植株再生植株第4頁(yè)/共48頁(yè)第五頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。過(guò)有性過(guò)程，兩種體細(xì)胞原生質(zhì)體相互融合產(chǎn)生雜種細(xì)胞，并使之分化再生,形成新物種或新品種的技術(shù)。第5頁(yè)/共48頁(yè)第六頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。植物細(xì)胞的融合過(guò)程植物細(xì)胞的融合過(guò)程第6頁(yè)/共48頁(yè)第七頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。1978年德國(guó)科學(xué)家梅歇年德國(guó)科學(xué)家梅歇爾斯等人把馬鈴薯爾斯等人把馬鈴薯(potato)和和番茄番茄(tomato)的原生質(zhì)體的原生質(zhì)體融合獲得了體細(xì)胞雜種融合獲得了體細(xì)胞雜種“泡馬豆泡馬豆”（pomato)第7頁(yè)/共48頁(yè)第八頁(yè)，編輯于星

3、期五：二十點(diǎn) 五十九分。等方法，可提高某些材料原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力。第8頁(yè)/共48頁(yè)第九頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第9頁(yè)/共48頁(yè)第十頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。原生質(zhì)體分離的方法原生質(zhì)體分離的方法機(jī)機(jī) 械械 分分 離離 法法酶酶 解解 分分 離離 法法第10頁(yè)/共48頁(yè)第十一頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第11頁(yè)/共48頁(yè)第十二頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。優(yōu)點(diǎn)：該方法可避免酶制劑對(duì)原生質(zhì)體的破壞作用。第12頁(yè)/共48頁(yè)第十三頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。酶和離析酶Macerozyme）、蝸牛酶和胼胝質(zhì)酶。第13頁(yè)/共48頁(yè)第十四頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn)

4、五十九分。第14頁(yè)/共48頁(yè)第十五頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。酶解分離法酶解分離法第15頁(yè)/共48頁(yè)第十六頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。Principle steps in enzymatic isolation第16頁(yè)/共48頁(yè)第十七頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第17頁(yè)/共48頁(yè)第十八頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第18頁(yè)/共48頁(yè)第十九頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。飄浮法飄浮法Protoplast第19頁(yè)/共48頁(yè)第二十頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。分別處于不同液相中，從而純化原生質(zhì)體的方法。n優(yōu)點(diǎn)：可以收集到數(shù)量較大的純凈原生質(zhì)體，同時(shí)避免收集過(guò)程

5、中原生質(zhì)體因相互擠壓而破碎。第20頁(yè)/共48頁(yè)第二十一頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。 加培養(yǎng)基使原加培養(yǎng)基使原生質(zhì)體密度為生質(zhì)體密度為104106/mL原生質(zhì)體混合液原生質(zhì)體混合液收集濾液收集濾液去上清去上清洗液重懸洗液重懸原生質(zhì)體原生質(zhì)體 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 重懸原生質(zhì)體重懸原生質(zhì)體去上清去上清40-100m 過(guò)濾過(guò)濾500rpm1-5 min500rpm1-5 min重復(fù)重復(fù)3次次500rpm1-5 min去上清去上清重復(fù)重復(fù)3次次第21頁(yè)/共48頁(yè)第二十二頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。常球形，放入低滲溶液中，可正常膨大。第22頁(yè)/共48頁(yè)第二十三頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九

6、分。有極性，能自由穿過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜?；罴?xì)胞內(nèi)FDA可以被酯酶裂解，將能發(fā)熒光的極性部分釋放出來(lái)。熒光素則不能自由穿越質(zhì)膜，在完整的活細(xì)胞內(nèi)積累。使用濃度：使用濃度：0.01%第23頁(yè)/共48頁(yè)第二十四頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。染色法(0.025%)：有活力但受損傷的細(xì)胞和死細(xì)胞能夠攝取這種染料，活細(xì)胞不攝取。nn細(xì)胞質(zhì)環(huán)流法和氧電極法第24頁(yè)/共48頁(yè)第二十五頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第25頁(yè)/共48頁(yè)第二十六頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。u遺傳轉(zhuǎn)化的良好受體u多種基礎(chǔ)理論研究的實(shí)驗(yàn)材料第26頁(yè)/共48頁(yè)第二十七頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。1.原生質(zhì)體培養(yǎng)方法原生

7、質(zhì)體培養(yǎng)方法第27頁(yè)/共48頁(yè)第二十八頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。原生質(zhì)體之間的粘連現(xiàn)象而影響其進(jìn)一步的生長(zhǎng)和發(fā)育。此外，難以跟蹤觀察某一個(gè)細(xì)胞的發(fā)育情況。第28頁(yè)/共48頁(yè)第二十九頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。體分布有一定影響；另外，固體中單細(xì)胞生活能力弱，通氣狀況不良，第一次細(xì)胞分裂時(shí)間會(huì)推遲2d左右。第29頁(yè)/共48頁(yè)第三十頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。n缺點(diǎn)：不易觀察細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程。第30頁(yè)/共48頁(yè)第三十一頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。u植株再生第31頁(yè)/共48頁(yè)第三十二頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。形成不定向的纖維團(tuán)，最后形成完整的細(xì)胞壁。細(xì)胞壁再生

8、是細(xì)胞分裂的先決條件細(xì)胞壁再生是細(xì)胞分裂的先決條件第32頁(yè)/共48頁(yè)第三十三頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第33頁(yè)/共48頁(yè)第三十四頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第34頁(yè)/共48頁(yè)第三十五頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第35頁(yè)/共48頁(yè)第三十六頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。7a: 7a: 分離原生質(zhì)體分離原生質(zhì)體1010天后第天后第1 1次分裂次分裂7b,c:27b,c:2和和3 3周齡小細(xì)胞團(tuán)周齡小細(xì)胞團(tuán) 7d,e: 47d,e: 4和和6 6周齡小愈傷組周齡小愈傷組織織 7f: 7f: 轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)到 B5h B5h 培養(yǎng)基前培養(yǎng)基前8 8周周齡小愈傷組織齡小愈傷組織 8

9、a: 8a: 轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)到 B5H B5H 培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上的小愈傷組織和體細(xì)胞胚的小愈傷組織和體細(xì)胞胚誘導(dǎo)誘導(dǎo) 8b: 8b: 轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)到 Boi2y Boi2y 培養(yǎng)基培養(yǎng)基上的球形胚上的球形胚 8c: 8c: 轉(zhuǎn)到轉(zhuǎn)到MSMS培養(yǎng)基上的子葉培養(yǎng)基上的子葉期胚以轉(zhuǎn)化為小植株期胚以轉(zhuǎn)化為小植株 紫花苜蓿葉片原生質(zhì)體分裂、克隆體的發(fā)育紫花苜蓿葉片原生質(zhì)體分裂、克隆體的發(fā)育及通過(guò)體細(xì)胞胚再生小植株及通過(guò)體細(xì)胞胚再生小植株 第36頁(yè)/共48頁(yè)第三十七頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)( (動(dòng)畫動(dòng)畫) )第37頁(yè)/共48頁(yè)第三十八頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分

10、。體細(xì)胞雜交的意義u實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交，形成新的物種u創(chuàng)造細(xì)胞質(zhì)雜種u培育作物新種質(zhì)和新品種第38頁(yè)/共48頁(yè)第三十九頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。生物種類生物種類細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞來(lái)源成功年代成功年代煙草兩個(gè)種間苷藍(lán)青菜大豆馬唐草矮牽牛龍面花大麥花生大麥大豆小麥矮牽牛油菜大豆玉米大豆大豆野豌豆大麥蠶豆大豆草香木犀酵母菌雞大豆煙草大豆秋水仙番茄馬鈴薯葉葉葉根愈傷組織葉葉花瓣種子種子葉懸浮細(xì)胞葉花瓣葉懸浮細(xì)胞葉懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞葉根懸浮細(xì)胞葉原生質(zhì)體血紅細(xì)胞懸浮細(xì)胞葉懸浮細(xì)胞葉葉根尖197219721972197219721972197219721972197219721972197219721

11、9721972第39頁(yè)/共48頁(yè)第四十頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第40頁(yè)/共48頁(yè)第四十一頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第41頁(yè)/共48頁(yè)第四十二頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。性電擊穿而使原生質(zhì)體融合的方法。第42頁(yè)/共48頁(yè)第四十三頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。第43頁(yè)/共48頁(yè)第四十四頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。分子生物學(xué)鑒定第44頁(yè)/共48頁(yè)第四十五頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。(1)(1)(2)(3)(4)(5)第45頁(yè)/共48頁(yè)第四十六頁(yè)，編輯于星期五：二十點(diǎn) 五十九分。雜雜種種植植株株融合融合的原的原生質(zhì)生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合植物組織培養(yǎng)植物