
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文檔簡介
1、第二章第二章 食用菌制種技術(shù)食用菌制種技術(shù) v關(guān)于制種的幾個(gè)概念關(guān)于制種的幾個(gè)概念第一節(jié)第一節(jié) 制種場地、設(shè)備、用具及消毒藥品制種場地、設(shè)備、用具及消毒藥品 第二節(jié)第二節(jié) 三級菌種制作技術(shù)三級菌種制作技術(shù)v本章重點(diǎn)本章重點(diǎn)4.5學(xué)時(shí)有關(guān)概念有關(guān)概念1.1.菌種:由人工方法培育出來的純雙核菌絲體。菌種:由人工方法培育出來的純雙核菌絲體。2.2.母種:由孢子或者組織分離而得到的最初菌種。母種:由孢子或者組織分離而得到的最初菌種。3.3.原種:將母種擴(kuò)大到新培養(yǎng)基上培育出來的菌絲體。原種:將母種擴(kuò)大到新培養(yǎng)基上培育出來的菌絲體。4.4.栽培種:由原種再擴(kuò)大接種一次培養(yǎng)而得。直接應(yīng)栽培種:由原種再擴(kuò)大
2、接種一次培養(yǎng)而得。直接應(yīng)用于生產(chǎn)。用于生產(chǎn)。5.5.消毒和滅菌。消毒和滅菌。母 種原 種栽培種第一節(jié)第一節(jié) 制種場地、設(shè)備等制種場地、設(shè)備等一、一、制種場地制種場地二、二、常用設(shè)備常用設(shè)備三、三、制種用具制種用具四、四、消毒消毒藥品藥品一、一、制種場地制種場地閑散房屋均可用。新建時(shí)選擇場地要注意:交通閑散房屋均可用。新建時(shí)選擇場地要注意:交通方便,水電齊全,周圍環(huán)境要衛(wèi)生。方便,水電齊全,周圍環(huán)境要衛(wèi)生。建造可參照建造可參照 “”字型房字型房,以方便生產(chǎn)。包括:,以方便生產(chǎn)。包括:配料室、滅菌室、冷卻室、接種室、菌種培養(yǎng)室、配料室、滅菌室、冷卻室、接種室、菌種培養(yǎng)室、銷售室以及庫房等。銷售室以
3、及庫房等。二、二、常用設(shè)備常用設(shè)備(一)(一)拌料和裝料設(shè)備拌料和裝料設(shè)備(二)(二)滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備(三)(三)接種設(shè)備接種設(shè)備(四)(四)培養(yǎng)設(shè)備培養(yǎng)設(shè)備 (一)(一)拌料和裝料設(shè)備拌料和裝料設(shè)備v 拌料設(shè)備拌料設(shè)備:可人工拌料,也可用拌料機(jī),:可人工拌料,也可用拌料機(jī),有桶式和開放式兩種。有桶式和開放式兩種。v 裝料設(shè)備裝料設(shè)備:人工裝料或用裝瓶裝袋兩用機(jī)。:人工裝料或用裝瓶裝袋兩用機(jī)。關(guān)鍵是料的松緊度,可關(guān)鍵是料的松緊度,可3-53-5人合作,約人合作,約10001000袋袋/h/h。(二)(二)滅菌設(shè)備滅菌設(shè)備v根據(jù)滅菌壓力:高壓滅菌設(shè)備和常壓滅菌設(shè)備。根據(jù)滅菌壓力:高壓滅菌設(shè)備和常
4、壓滅菌設(shè)備。1. 高壓滅菌特點(diǎn):高壓滅菌特點(diǎn):溫度高溫度高,滅菌速度快,滅菌徹底,滅菌速度快,滅菌徹底,但每次滅菌量小,投資較大。但每次滅菌量小,投資較大。 高壓滅菌設(shè)備高壓滅菌設(shè)備:手提式高壓滅菌鍋。立式高:手提式高壓滅菌鍋。立式高壓滅菌鍋。臥式高壓滅菌鍋。壓滅菌鍋。臥式高壓滅菌鍋。2.2.常壓滅菌特點(diǎn):容量大常壓滅菌特點(diǎn):容量大(0.5-1(0.5-1噸料噸料/ /次次) ),投資,投資小,但時(shí)間長,滅菌效果較差。小,但時(shí)間長,滅菌效果較差。 常壓滅菌設(shè)備:常壓滅菌設(shè)備:常壓滅菌灶常壓滅菌灶、滅菌室、滅菌室或滅菌包或滅菌包(可利用(可利用節(jié)能型多功能蒸汽爐節(jié)能型多功能蒸汽爐或普通鍋爐)或普
5、通鍋爐)。(三三)接種設(shè)備接種設(shè)備1.1. 潔凈工作臺潔凈工作臺:適合接母種和少量原種。:適合接母種和少量原種。2.2. 接種箱接種箱:成本低,容量較大,適合各級菌種。:成本低,容量較大,適合各級菌種。3.3. 接種帳:適于接栽培袋,但效果稍差。接種帳:適于接栽培袋,但效果稍差。4.4. 接種室接種室:與接種帳類似。:與接種帳類似。5.5. 電爐和蒸汽接種電爐和蒸汽接種:簡易,成功率:簡易,成功率80%80%以上。以上。(四)四)培養(yǎng)設(shè)備培養(yǎng)設(shè)備1.1.培養(yǎng)室培養(yǎng)室:要清潔衛(wèi)生,有調(diào)溫設(shè)備??捎糜谠N、:要清潔衛(wèi)生,有調(diào)溫設(shè)備??捎糜谠N、栽培種培養(yǎng),要做一些培養(yǎng)架,便于菌種檢查和栽培種培養(yǎng),
6、要做一些培養(yǎng)架,便于菌種檢查和提高空間利用率。提高空間利用率。2.2.電熱恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱:溫度可調(diào),容積小。:溫度可調(diào),容積小。三、三、制種用具制種用具、酒精燈;、酒精燈; 、托盤天平;、托盤天平;、地泵;、地泵; 、水桶、盆、鋁鍋;、水桶、盆、鋁鍋;、鑷子;、鑷子; 、接種鉤和接種鏟;、接種鉤和接種鏟;、試管、菌種瓶和菌種袋;、試管、菌種瓶和菌種袋;、漏斗;、漏斗; 、電爐或煤爐;、電爐或煤爐;v另外,還需溫度計(jì)、濕度計(jì)、量筒和量杯、另外,還需溫度計(jì)、濕度計(jì)、量筒和量杯、磨口瓶、塑料繩、報(bào)紙以及磨口瓶、塑料繩、報(bào)紙以及pHpH試紙等。試紙等。四、消毒藥品四、消毒藥品1. 75%酒精
7、酒精 2. 40%甲醛高錳酸鉀甲醛高錳酸鉀3. 汽霧消毒劑汽霧消毒劑 4. 高錳酸鉀(高錳酸鉀(0.1%-0.2%)5. 5%石炭酸石炭酸(苯酚苯酚) 6. 1%-2%來蘇兒來蘇兒7. 2%-5%漂白粉漂白粉 8. 硫磺硫磺v各種藥品最好輪換使用,以防產(chǎn)生抗藥性。各種藥品最好輪換使用,以防產(chǎn)生抗藥性。第二節(jié)第二節(jié) 三級菌種制作技術(shù)三級菌種制作技術(shù)一、母種制作技術(shù)一、母種制作技術(shù)(一)(一)母種培養(yǎng)基制備母種培養(yǎng)基制備 (二)(二)組織分離法組織分離法(三)(三)母種的擴(kuò)大母種的擴(kuò)大二、原種制作技術(shù)二、原種制作技術(shù)(一)(一)原種培養(yǎng)基的制備原種培養(yǎng)基的制備 (二)(二)原種的制作原種的制作三、
8、栽培種制作技術(shù)三、栽培種制作技術(shù)(一)(一)栽培種培養(yǎng)基制備栽培種培養(yǎng)基制備 (二)(二)栽培種的制作栽培種的制作四、四、菌種污染的原因及防止措施菌種污染的原因及防止措施一、母種制作技術(shù)一、母種制作技術(shù)1.1.培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基的概念2.2.常用的母種培養(yǎng)基配方常用的母種培養(yǎng)基配方3.3.母種培養(yǎng)基的制作母種培養(yǎng)基的制作(一)母種培養(yǎng)基的制備(一)母種培養(yǎng)基的制備1.1.培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基是按照食用菌生長繁殖所需要的各種培養(yǎng)基是按照食用菌生長繁殖所需要的各種營養(yǎng),用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng),用人工方法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。2. 母種培養(yǎng)基配方母種培養(yǎng)基配方(g/1000ml)
9、除配方除配方1 1,其它均需加入,其它均需加入KHKH2 2POPO4 43 3克,克,MgSOMgSO4 41.51.5克,克,VBVB1 12 2片。片。 編號土豆棉籽皮木屑發(fā)酵料麩皮葡萄糖瓊脂蛋白胨120020202200202031001005020202-1041001005020205520020205-103.3.母種培養(yǎng)基的制作母種培養(yǎng)基的制作PDAPDA培養(yǎng)基的制作過程:培養(yǎng)基的制作過程:1)1)煮土豆,取濾液。開鍋后,文火煮煮土豆,取濾液。開鍋后,文火煮3030minmin,適當(dāng)適當(dāng)攪拌,使?fàn)I養(yǎng)充分溶出。攪拌,使?fàn)I養(yǎng)充分溶出。2)2)補(bǔ)足水,加藥品溶化。瓊脂溶解較慢并易溢鍋
10、,補(bǔ)足水,加藥品溶化。瓊脂溶解較慢并易溢鍋,燒開后減小火力并攪拌燒開后減小火力并攪拌1min1min左右。左右。3) 分裝試管。常用試管為分裝試管。常用試管為18mm180mm,每管約,每管約裝培養(yǎng)基裝培養(yǎng)基8-10ml。加棉塞后。加棉塞后3個(gè)一把綁好。個(gè)一把綁好。4) 高壓滅菌。在高壓滅菌。在1.1-1.2kg/cm2壓力下滅菌壓力下滅菌30-40min。滅菌程序:滅菌程序:放入物品,擰緊鍋蓋加熱,當(dāng)壓力達(dá)放入物品,擰緊鍋蓋加熱,當(dāng)壓力達(dá)到到0.5kg/cm2時(shí),排出冷空氣,關(guān)閉放氣閥。壓力時(shí),排出冷空氣,關(guān)閉放氣閥。壓力上去后記時(shí),維持所需時(shí)間。上去后記時(shí),維持所需時(shí)間。5) 擺斜面。滅完
11、菌后,鍋體自然冷涼,壓力降到擺斜面。滅完菌后,鍋體自然冷涼,壓力降到0.5kg/cm2以下時(shí),緩慢放氣,氣排盡后取出試以下時(shí),緩慢放氣,氣排盡后取出試管,趁熱擺斜面,管,趁熱擺斜面,40以下即可凝固。以下即可凝固。母種培養(yǎng)基制作流程母種培養(yǎng)基制作流程(二)菌種組織分離法(二)菌種組織分離法1.1.組織分離的概念、種類和特點(diǎn)組織分離的概念、種類和特點(diǎn)2.2.組織分離的方法組織分離的方法 1 1. .組織分離的概念、組織分離的概念、種類和特點(diǎn)種類和特點(diǎn) 概念:概念:是指在雙核菌絲的組織上切取一塊組織,是指在雙核菌絲的組織上切取一塊組織,使其在培養(yǎng)基上萌發(fā)而獲得純雙核菌絲體的方法。使其在培養(yǎng)基上萌發(fā)
12、而獲得純雙核菌絲體的方法。稱作原始母種。稱作原始母種。 種類:種類:據(jù)切取組織的來源,分為子實(shí)體組織分離、據(jù)切取組織的來源,分為子實(shí)體組織分離、菌核、菌索組織分離和基內(nèi)菌絲組織分離。菌核、菌索組織分離和基內(nèi)菌絲組織分離。 特點(diǎn):特點(diǎn):簡單易行;為無性繁殖。簡單易行;為無性繁殖。2.2.平菇子實(shí)體組織分離方法平菇子實(shí)體組織分離方法 培養(yǎng)基制備。培養(yǎng)基制備。 種菇選擇:是指用來進(jìn)行組織分離的子實(shí)體。種菇選擇:是指用來進(jìn)行組織分離的子實(shí)體。要選擇適宜出菇期出菇早、出菇整齊、形態(tài)正要選擇適宜出菇期出菇早、出菇整齊、形態(tài)正常、無病蟲害、產(chǎn)量高的栽培袋,從上選擇肥常、無病蟲害、產(chǎn)量高的栽培袋,從上選擇肥大
13、、肉厚、大、肉厚、6 6成熟的幼嫩子實(shí)體,切去多余菌柄。成熟的幼嫩子實(shí)體,切去多余菌柄。 接種場地消毒。接種場地消毒。 種菇處理:表面消毒。種菇處理:表面消毒。 接種過程接種過程:雙手表面消毒,把種菇帶入接種箱,:雙手表面消毒,把種菇帶入接種箱,點(diǎn)燃酒精燈,種菇表面消毒后從中間縱向撕開,點(diǎn)燃酒精燈,種菇表面消毒后從中間縱向撕開,用無菌小鑷子夾取菌柄、菌蓋交界處的菌肉,迅用無菌小鑷子夾取菌柄、菌蓋交界處的菌肉,迅速放入培養(yǎng)基上,塞上棉塞。速放入培養(yǎng)基上,塞上棉塞。特殊種類特殊種類:靈芝、:靈芝、金針菇、雞腿菇等。金針菇、雞腿菇等。 培養(yǎng)。適宜條件下,培養(yǎng)。適宜條件下,2-3天組織塊上即萌發(fā)出菌絲
14、,天組織塊上即萌發(fā)出菌絲,8-10天可長滿。期間要檢查,從中選留無污染、天可長滿。期間要檢查,從中選留無污染、菌絲潔白濃密、長速正常的菌種。菌絲潔白濃密、長速正常的菌種。 基內(nèi)菌絲組織分離基內(nèi)菌絲組織分離以及菌核和菌索的組織分離過以及菌核和菌索的組織分離過程類似,只是所取部位不同。程類似,只是所取部位不同。 原始母種還可轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁原始母種還可轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁3-4次,以增加母種量。次,以增加母種量。 長滿后暫時(shí)不用的母種要置于長滿后暫時(shí)不用的母種要置于2-5下冷藏。下冷藏。(三)母種的擴(kuò)大(三)母種的擴(kuò)大1.1. 培養(yǎng)基的制備(同前)培養(yǎng)基的制備(同前)2.2. 接種場地的消毒滅菌(同前)接種場地的消毒
15、滅菌(同前)3.3. 母種的擴(kuò)大母種的擴(kuò)大4.4. 培養(yǎng)培養(yǎng)3.3.母種的擴(kuò)大母種的擴(kuò)大要嚴(yán)格無菌操作。母種試管表面消毒,然后靠近要嚴(yán)格無菌操作。母種試管表面消毒,然后靠近燈焰用接種鉤將母種橫切成若干份,再用接種鏟燈焰用接種鉤將母種橫切成若干份,再用接種鏟將橫切的母種分成將橫切的母種分成2-32-3份,取一份帶份,取一份帶1 1 2mm2mm厚的厚的培養(yǎng)基放入新的培養(yǎng)基斜面上。培養(yǎng)基放入新的培養(yǎng)基斜面上。4 4. .培培 養(yǎng)養(yǎng)在適宜條件下培養(yǎng)。在適宜條件下培養(yǎng)。2-32-3天后,檢查菌絲的生長天后,檢查菌絲的生長及雜菌污染情況,若在接種塊或培養(yǎng)基表面上出及雜菌污染情況,若在接種塊或培養(yǎng)基表面上
16、出現(xiàn)獨(dú)立的小菌落或奶油狀小點(diǎn),即為污染,應(yīng)立現(xiàn)獨(dú)立的小菌落或奶油狀小點(diǎn),即為污染,應(yīng)立即淘汰。即淘汰。二、原種制作技術(shù)二、原種制作技術(shù)(一)原種培養(yǎng)基的制備(一)原種培養(yǎng)基的制備(二)原種的制作(二)原種的制作(一)原種培養(yǎng)基的制備(一)原種培養(yǎng)基的制備1.1.常用原種培養(yǎng)基配方常用原種培養(yǎng)基配方(%)(%)麥粒預(yù)處理:麥粒預(yù)處理:冷水浸泡冷水浸泡1212小時(shí)后水煮,開鍋后文火小時(shí)后水煮,開鍋后文火2020minmin左右,麥粒左右,麥粒煮透,脹而不破,用水冷卻后瀝干表面水分,拌入石膏即可。煮透,脹而不破,用水冷卻后瀝干表面水分,拌入石膏即可。 編號編號 麥粒麥粒 棉子皮棉子皮木屑木屑麩皮麩皮
17、玉米面玉米面蔗糖蔗糖石膏石膏1982265332377-8720-10124821051254141151268215122.2.原種培養(yǎng)基制備原種培養(yǎng)基制備 選定配方。分別稱取各物質(zhì)。選定配方。分別稱取各物質(zhì)。 加水拌料。含水量約加水拌料。含水量約60%65%,料水比約,料水比約1:1.31.5。關(guān)鍵是拌勻,用量少的水溶性物質(zhì)。關(guān)鍵是拌勻,用量少的水溶性物質(zhì)要先溶于水,再拌入料中。要先溶于水,再拌入料中。 裝瓶。常用容器為裝瓶。常用容器為750ml罐頭瓶或菌種瓶,每瓶罐頭瓶或菌種瓶,每瓶裝干料裝干料2.53兩。料要裝勻,松緊適度,裝至瓶兩。料要裝勻,松緊適度,裝至瓶肩下肩下1cm處,料面壓平
18、。處,料面壓平。 打洞封口。擦凈瓶口,中央打直徑打洞封口。擦凈瓶口,中央打直徑2cm的孔至瓶的孔至瓶底。用兩層報(bào)紙和一層聚丙烯膜封口。打洞可底。用兩層報(bào)紙和一層聚丙烯膜封口。打洞可增加料底透氣性。增加料底透氣性。 滅菌:高壓滅菌或常壓滅菌。滅菌:高壓滅菌或常壓滅菌。v常壓滅菌:視滅菌量,需常壓滅菌:視滅菌量,需810h以上。以上。注意:注意:一是培養(yǎng)料量要適中,物品排列合理,保證蒸汽一是培養(yǎng)料量要適中,物品排列合理,保證蒸汽流通。二是大火猛燒,防止壓力忽高忽低。三是流通。二是大火猛燒,防止壓力忽高忽低。三是滅菌后悶滅菌后悶46h再出鍋。再出鍋。v高壓滅菌:高壓滅菌:1.41.5kg/cm2壓力
19、下滅壓力下滅1.52h,壓壓力不穩(wěn)或壓力低時(shí)要延時(shí)。力不穩(wěn)或壓力低時(shí)要延時(shí)。高壓滅菌應(yīng)注意高壓滅菌應(yīng)注意:a. 滅菌鍋內(nèi)冷空氣必須排盡。否則會滅菌鍋內(nèi)冷空氣必須排盡。否則會產(chǎn)生假蒸汽壓產(chǎn)生假蒸汽壓。b.b. 培養(yǎng)基必須排放有序,蒸汽暢通。培養(yǎng)基必須排放有序,蒸汽暢通。c.c. 滅菌完畢應(yīng)緩慢減壓。自然降溫或緩慢排氣,防滅菌完畢應(yīng)緩慢減壓。自然降溫或緩慢排氣,防止液體突然沸騰弄臟瓶塞,或瓶、袋脹破。止液體突然沸騰弄臟瓶塞,或瓶、袋脹破。d.d. 棉塞防濕。滅菌時(shí)棉塞不能接觸鍋壁,并蓋報(bào)紙棉塞防濕。滅菌時(shí)棉塞不能接觸鍋壁,并蓋報(bào)紙或防水紙,防止冷凝水打濕棉塞。或防水紙,防止冷凝水打濕棉塞。(二)原
20、種的制作(二)原種的制作1. 場地消毒:將料瓶和用具放入接種箱熏場地消毒:將料瓶和用具放入接種箱熏0.52h。2. 接種接種:母種表面消毒后帶入接種箱,點(diǎn)燃酒精燈,:母種表面消毒后帶入接種箱,點(diǎn)燃酒精燈,再次對試管外壁消毒。在燈焰范圍內(nèi),用接種鉤再次對試管外壁消毒。在燈焰范圍內(nèi),用接種鉤將母種分成將母種分成46份,取一份放入料面中部,封口。份,取一份放入料面中部,封口。兩人合作既好又快。兩人合作既好又快。3. 培養(yǎng):在適宜條件下培養(yǎng)。定期檢查。菌絲長滿培養(yǎng):在適宜條件下培養(yǎng)。定期檢查。菌絲長滿后,再繼續(xù)培養(yǎng)后,再繼續(xù)培養(yǎng)35天。天。三、栽培種制作技術(shù)三、栽培種制作技術(shù)(一)(一)栽培種培養(yǎng)基的
21、制備栽培種培養(yǎng)基的制備v培養(yǎng)基配方:與原種培養(yǎng)基可以相同。培養(yǎng)基配方:與原種培養(yǎng)基可以相同。1. 菌種袋規(guī)格:選用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料菌種袋規(guī)格:選用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料袋。袋。1732cm,一端開口,每袋裝干料一端開口,每袋裝干料6兩。兩。1740cm,兩端開口,每袋裝干料兩端開口,每袋裝干料1斤。斤。3.3.拌料裝袋,注意:拌料裝袋,注意:1)1)料松緊度適宜;袋壁光滑。料松緊度適宜;袋壁光滑。2)2)料面要平,中間打孔,以利通氣。料面要平,中間打孔,以利通氣。3)3)繩要綁緊,盡量排除袋內(nèi)空氣,防止?jié)q袋。繩要綁緊,盡量排除袋內(nèi)空氣,防止?jié)q袋。4.4.滅菌:與原種相同。滅菌:與原種
22、相同。(二)栽培種的制作(二)栽培種的制作1. 場地消毒:同前。場地消毒:同前。2. 接種方法接種方法:雙手表面消毒后進(jìn)入接種箱;原種:雙手表面消毒后進(jìn)入接種箱;原種表面消毒,放于三角架或空瓶上,瓶口表面消表面消毒,放于三角架或空瓶上,瓶口表面消毒、火焰滅菌;用鑷子把菌種扒成毒、火焰滅菌;用鑷子把菌種扒成1-2cm小塊,小塊,均勻接于料面,綁口。均勻接于料面,綁口。接種時(shí)注意:接種時(shí)注意:1)接種過程應(yīng)在酒精燈旁進(jìn)行。接種過程應(yīng)在酒精燈旁進(jìn)行。2)每瓶原種接栽培種每瓶原種接栽培種1015袋袋(兩頭接種兩頭接種)或或50瓶瓶左右。左右。3)接種用具使用前表面消毒,火焰滅菌。接種用具使用前表面消毒
23、,火焰滅菌。4)接完種后,據(jù)接種量確定封口松緊度。接完種后,據(jù)接種量確定封口松緊度。3. 培養(yǎng):同原種。培養(yǎng):同原種。三級菌種生產(chǎn)的工藝流程三級菌種生產(chǎn)的工藝流程四、菌種污染原因及防止措施四、菌種污染原因及防止措施(一)常見雜菌種類:細(xì)菌、酵母菌、放線菌和(一)常見雜菌種類:細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌。霉菌。(二)污染原因及防止措施(二)污染原因及防止措施1. 培養(yǎng)基滅菌不徹底。表現(xiàn)為瓶壁和袋壁上出現(xiàn)培養(yǎng)基滅菌不徹底。表現(xiàn)為瓶壁和袋壁上出現(xiàn)雜菌菌落。原因:滅菌壓力或時(shí)間不足,或者雜菌菌落。原因:滅菌壓力或時(shí)間不足,或者高壓滅菌時(shí)高壓滅菌時(shí)鍋內(nèi)空氣沒有排盡鍋內(nèi)空氣沒有排盡。措施措施:鍋內(nèi)空氣排盡;保證滅菌壓力和時(shí)間。:鍋內(nèi)空氣排盡;保證滅菌壓力和時(shí)間。2.2.菌種帶雜菌。表現(xiàn)為菌種塊周
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