小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)條件的研究

1、科技創(chuàng)新基金項目申報表項目名稱：小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)條件的研究 一、 項目基本情況項目名稱小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)條件的研究項目類別自然科學研究期限六個月申請經(jīng)費500元項目簡介小葉女貞是重要的綠籬植物，具有很高的觀賞價值和重要的藥用價值。小葉女貞葉斑病是小葉女貞的主要病害之一，該病會導致葉片、枝條生出病斑，甚至枯萎，嚴重地影響小葉女貞的觀賞價值。本項目主要對小葉女貞葉斑病病原菌孢子萌發(fā)的條件進行系統(tǒng)地研究，了解溫度、相對濕度、pH、光照、營養(yǎng)液等因素對病原菌孢子萌發(fā)的影響，探究小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的條件要求，并找出最適合該病原菌萌發(fā)的條件；為小葉女貞小苗的培育以及小葉女貞綠化區(qū)的葉斑

2、病綜合防治提供科學依據(jù)，為宜居城市、綠色城市的建設奉獻力量。二、立論依據(jù)（項目的意義、現(xiàn)狀分析、參考文獻等）(一) 項目研究的意義小葉女貞（學名：Ligustrum quihoui Carr.）是木犀科女貞屬的半常綠小灌木；葉薄且小、革質(zhì)、常綠、耐修剪，生長迅速，是制作盆景的優(yōu)良樹種；此外葉還可入藥、具清熱解毒、治燙傷、外傷等功效。小葉女貞對二氧化硫、氯等多種有毒氣體有較好的抗性，是優(yōu)良的抗污染樹種，在園林上常大量的用作綠籬及色塊搭配，作用十分明顯，不但可以保護城市生態(tài)，還能夠吸收空氣中的粉塵和有害氣體，凈化空氣改善人們的生活環(huán)境。因此，搞好小葉女貞的苗木栽培和管理，對園林、城市的綠化建設具有

3、重要意義。由葉斑病菌引起的葉斑病是小葉女貞主要的病害之一。感病葉片初期出現(xiàn)圓形或近圓形病斑，在潮濕的環(huán)境條件下，病斑上出現(xiàn)黑色霉絲；感病一段時間后，由于病原菌的侵染還使嫩梢和枝條患病生出病斑，致使物質(zhì)運輸受阻嫩葉枯萎、脫落，以至嚴重的影響小葉女貞的生長繁殖及其觀賞價值。因此，對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)條件進行系統(tǒng)的研究，了解溫度、相對濕度、pH、光照等因素對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響，不但對小葉女貞苗木的栽培和城市綠化區(qū)的管理具有指導意義，而且能夠為花農(nóng)及園藝工作者對小葉女貞進行合理密植及根據(jù)當?shù)貧夂蚯闆r及時做好小葉女貞葉斑病的防范工作提供科學的參考依據(jù)。(一) 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析目前，對

4、植物病原真菌孢子萌發(fā)條件的研究國外報道較多。Benlioglu研究了光照對孢子萌發(fā)產(chǎn)生的影響1。在國內(nèi)對孢子萌發(fā)條件的研究也不少。陳昱君等對三七黑斑病病菌孢子萌發(fā)特性的研究結(jié)果表明黑斑病病菌孢子萌發(fā)的適宜溫度和濕度分別為1825,RH90%100%2。王吉霞等研究了溫度對小麥矮腥黑穗病菌冬孢子萌發(fā)的影響得出其萌發(fā)溫度范圍為212，5為萌發(fā)的最佳溫度3。鄭寰宇等對馬鈴薯早疫病病菌分生孢子萌發(fā)條件的研究結(jié)果表明該病原菌孢子萌發(fā)的最適溫度為30、最適pH為7、黑暗條件有利于孢子萌發(fā)4。還有刁家文等對金葉女貞葉斑病發(fā)生機制及綜合防治措施研究的報道5-6。然而，對小葉女貞只見關于栽培管理及用途的研究7，

5、對其葉斑病菌孢子萌發(fā)條件的研究尚未見報道，小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的條件和已報道的病菌孢子萌發(fā)條件是否相同有待研究。（三）主要參考文獻1 Benlioglu S, Delen N.Studies on the sporulation of the early blight agent Alternaria solani (Ell and Mart) Jones and Groat of tomatoes J.Journal of Turkish Phytopatholopy, 1996, 25(1/2):23-282 陳昱君，王勇，馮光泉. 三七黑斑病病菌孢子萌發(fā)特性研究J. 植物保護， 20

6、00，26（5）：24-253 王吉霞，周益林，段霞瑜等.溫度對小麥矮腥黑穗病菌冬孢子萌發(fā)的影響J.植物保護，2006，32：38-404 鄭寰宇，左豫虎，張樹遠，臺蓮梅等.馬鈴薯早疫病病菌分生孢子萌發(fā)條件的研究J 植物保護，2010,36（6）：91-955 刁家文，孫波.金葉女貞葉斑病發(fā)生機制及綜合防治措施J. 貴陽學院學報，2007，2（2）：10-126 張紅梅，李桂芝，王亞，等.金葉女貞常見病蟲害及其防治J.平頂山工學院學報，2006（1）：46-47 王鳳龍，陳金豐 小葉女貞的栽培管理及用途J. 吉林農(nóng)業(yè)，2009，（16） 三、研究方案(一) 研究目標、研究內(nèi)容和擬解決的關鍵問題

7、1. 本項目的研究目標：找出小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的最適條件。2. 本項目的研究內(nèi)容1) 了解小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的環(huán)境，再通過實驗系統(tǒng)地研究探索溫度、相對濕度、pH、光照、營養(yǎng)液等因素對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響；2) 分析實驗數(shù)據(jù)得出小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的最適溫度、相對濕度、pH以及光照時長。3. 擬解決的問題1) 小葉女貞葉斑病菌大量孢子的獲得；2) 實驗環(huán)境的無菌保持。(二) 擬采取的研究方法及可行性分析1. 研究方法：1) 溫度對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響將培養(yǎng)的孢子用水稀釋混勻成懸浮液，把懸浮液平均分成9×3等份放入滅菌的培養(yǎng)皿中，置于不同溫度的恒溫培養(yǎng)

8、箱中培養(yǎng)，然后觀察孢子萌發(fā)情況，統(tǒng)計孢子的萌發(fā)率，每處理重復3次。2) 相對濕度對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響利用不同鹽的飽和溶液控制密閉容器內(nèi)的相對濕度，將鋪有新鮮孢子粉的載玻片懸放于不同濕度的容器內(nèi)，在最適溫度下培養(yǎng)。然后觀察孢子萌發(fā)情況，統(tǒng)計孢子的萌發(fā)率，每處理重復3次。用自來水做對照。3) pH對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響用濃度為1mol/L的HCl和NaOH配制不同pH的溶液，以上述溶液為浮載劑配制孢子懸浮液，將孢子懸浮液放入培養(yǎng)箱中并在最適溫度下培養(yǎng)，之后觀察孢子萌發(fā)情況，統(tǒng)計孢子的萌發(fā)率，每處理重復3次。4) 光照對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響設24h光照（日光連續(xù)光照）

9、、12h光照/12h黑暗（光暗交替）、24h黑暗（連續(xù)黑暗）、自然光照射4個處理，在最適溫度下培養(yǎng)，之后觀察孢子萌發(fā)情況，統(tǒng)計孢子的萌發(fā)率，每處理重復3次。5) 營養(yǎng)液對小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)的影響用不同的碳、氮源營養(yǎng)液和不同濃度的新鮮小葉女貞葉片汁液作為浮載劑配制孢子懸浮液，將孢子懸浮液置于最適溫度下培養(yǎng)，之后觀察孢子萌發(fā)情況，分別統(tǒng)計不同營養(yǎng)液中孢子的萌發(fā)率，每處理重復3次。用自來水做對照。2可行性分析：首先，實驗室已有小葉女貞葉斑病病菌菌株，實驗材料的供應有保證；其次，本項目實驗過程中所用到的實驗儀器和設備較普通常見，大多數(shù)（恒溫箱、干燥器、培養(yǎng)皿等）是基礎生物學實驗室的常規(guī)設備；實驗

10、所需試劑：如葡萄糖、乳糖、蔗糖、尿素、硝酸銨、蛋白胨、HCl和NaOH等都是實驗室常用試劑，并且價格也相對便宜。綜上所述，該項目是完全可行的。(三) 本項目的特色與創(chuàng)新之處1. 本項目是首次針對小葉女貞這種園林綠化小灌木的葉斑病菌孢子萌發(fā)的條件進行系統(tǒng)的研究；2. 本項目考慮了溫度、相對濕度、pH、光照、營養(yǎng)液等多個因素對葉斑病菌孢子萌發(fā)進行探究，其中將新鮮小葉女貞葉片汁液配成培養(yǎng)液來研究葉斑病菌孢子萌發(fā)條件是本項目的又一大創(chuàng)新點。(四) 預期的研究進展和成果1. 預期的研究進展：1） 2011-4-1 到2011-5-15 前期準備工作。2） 2011-5-16到2011-7-30 實驗階段（實驗過程、實驗現(xiàn)象觀察 和數(shù)據(jù)記錄、實驗數(shù)據(jù)處理、實驗總結(jié)得出結(jié)論）。3） 2011-7-31到2011-8-29撰寫論文。2.預期成果1) 得出適合小葉女貞葉斑病病菌萌發(fā)的溫度、濕度、光照等條件， 為該病的預防、治理提供科學依據(jù)。2) 提交小葉女貞葉斑病菌孢子萌發(fā)條件的研究學術(shù)論文一篇。創(chuàng) 作 過 程 中 的 問 題1. 本項目需要購買一定量的實驗藥品，但團隊的經(jīng)費資源有限。2. 本項目需要進行大量的實驗研究，實驗持續(xù)時間較長，需要團隊成員暑期留校。3. 本項目需要申請使用實驗室，為實驗的順利進行提供場所和儀器設備。指導老師意見（一）該項目把“小葉女