艾滋病、梅毒和乙肝實驗室檢測

1、梅毒的實驗室檢測梅毒的實驗室檢測永昌縣婦幼保健站永昌縣婦幼保健站楊獻明楊獻明綜合產前檢查服務綜合產前檢查服務+ + 檢測檢測孕產婦參加產前檢查服務檢測前信息HBV 檢測梅毒檢測HIV 檢測全血細胞計數和其它檢測取血樣2 梅毒的實驗室檢測梅毒的實驗室檢測3梅毒篩查檢測梅毒篩查檢測l 篩查檢測篩查檢測 用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染梅毒：梅毒血清學檢測梅毒：梅毒血清學檢測 篩查檢測應篩查檢測應 具有較高的靈敏度和特異度具有較高的靈敏度和特異度 操作簡單、容易獲得、便宜操作簡單、容易獲得、便宜 盡可能在盡可能在“當日當日”獲得結果獲得結果4篩查檢測何

2、時使用何種檢測？篩查檢測何時使用何種檢測？梅毒梅毒檢測方法檢測方法 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（RPRRPR或TRUSTTRUST檢測） 梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗（TPPATPPA、ELISA或梅毒快速檢測）檢測時間檢測時間 第一次產檢（孕早期）第一次產檢（孕早期） 或下一次產檢時 如有必要，孕晚期再次檢測 此前無檢測結果，則在分娩時檢測5梅毒血清學試驗基本實驗室設備梅毒血清學試驗基本實驗室設備檢方法檢方法檢測樣本類型檢測樣本類型必要設備必要設備血清血清血漿血漿全血全血RPR/TRUSTRPR/TRUST水平旋轉儀TPPATPPA震蕩儀ELIS

3、AELISA酶標儀、洗板機POCTPOCT檢測檢測無需特殊設備6血清學試驗檢測梅毒感染相關抗體血清學試驗檢測梅毒感染相關抗體u 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測非特異性抗體）非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測非特異性抗體） RPR（快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗） TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗） VDRL（性病研究實驗室試驗）u 梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測特異性梅毒螺旋梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測特異性梅毒螺旋體抗體）體抗體） TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗） ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗） POC（快速檢測、一站式檢測）梅毒診斷檢測梅毒診斷檢測7l 梅毒早期診斷的依據之一是病原學檢測

4、，即在組織或分泌物中檢測到蒼白螺旋體： 暗視野顯微鏡 鍍銀染色鏡檢 梅毒診斷檢測梅毒診斷檢測8非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 梅毒螺旋體感染可產生非特異性抗體（非梅毒螺旋體抗體）非梅毒螺旋體抗體又稱之為反應素，是抗心磷脂等抗原的抗體 隨菌體和宿主細胞的類脂質抗原量升高 除梅毒外，其他醫(yī)學情況會造成非梅毒螺旋體抗原血清學試驗假陽性結果，包括結核、瘧疾、妊娠和風濕關節(jié)炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學疾病9非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：非梅毒螺旋體抗原血清學試驗： 快速、簡便、便宜 敏感性和特異性較高 硬下疳后1-2周變

5、為陽性 可用于 篩查樣本 評估對治療的反應 鑒別復燃還是再次感染10確保非梅毒螺旋體抗原血清學試驗確保非梅毒螺旋體抗原血清學試驗質量的關鍵點質量的關鍵點1. 按照標準操作程序（SOPs）進行操作2. 推薦使用評價特性較好的試劑*3. 按照統(tǒng)一的標準報告結果4. 開展實驗室質控（QC）和參加室間能力驗證（PT）* 由中國疾病預防控制中心性病中心國家參比實驗室提供11非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗抗體滴度通常與疾病活動度有關。 治療后（可能幾個月）非梅毒螺旋體抗原血清學試驗通常轉變?yōu)椴环磻?如果用同一種實驗，相同試驗滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:3

6、2）為臨床顯著變化 有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時可持續(xù)終生（血清固定）注意：注意：病人血清學監(jiān)測應在同一個實驗室使用同一種檢測方法（RPR、TRUST）進行連續(xù)多次檢測；RPR和TRUST方法均有效，但檢測的滴度結果不能直接進行比較12治療后非梅毒螺旋體抗原血清學試驗治療后非梅毒螺旋體抗原血清學試驗抗體滴度變化的臨床意義抗體滴度變化的臨床意義一期梅毒和二期梅毒： 成功治療，抗體滴度應 3個月后下降2倍 6個月后下降4倍 一期梅毒：1年后抗體滴度轉陰 二期梅毒：2年后抗體滴度轉陰晚期梅毒： 治療后抗體滴度緩慢下降 50%的病人2年后抗體滴度仍為陽性13梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺

7、旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 檢測梅毒螺旋體抗原特異性抗體 可用于確認非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的陽性 結果，排除其假陽性 陽性結果可持續(xù)存在，即使治療后仍可為陽性。* 梅毒螺旋體抗原血清學試驗與疾病的活動度無關，不能用于鑒別現(xiàn)癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效* 一期梅毒治療病人中，一期梅毒治療病人中，15%-25%15%-25%可在可在2-32-3年后轉為血清學陰性年后轉為血清學陰性14妊娠期梅毒檢測妊娠期梅毒檢測p 所有孕產婦應進行梅毒篩查檢測： 孕期盡早（如果可能，在孕早期時）以及 如果在分娩前/臨產時沒有篩查檢測結果，在分娩時檢測p 篩查檢測

8、可應用以下任何一類方法： 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（滴度）或 梅毒螺旋體抗原血清學試驗p 所有篩查檢測結果陽性的孕產婦都應用另外一類檢測方法進行復檢確認是否為現(xiàn)癥梅毒p 所有產婦及所生嬰兒出院前，產婦梅毒檢測結果都應記錄在病歷中，以確保需要時給予治療15孕產婦梅毒檢測流程孕產婦梅毒檢測流程非梅毒螺旋體抗原血清學非梅毒螺旋體抗原血清學試驗試驗梅毒螺旋體抗原血清學試梅毒螺旋體抗原血清學試驗驗孕產婦孕產婦治療后，隨訪監(jiān)測非治療后，隨訪監(jiān)測非梅毒螺旋體抗原血清梅毒螺旋體抗原血清學試驗學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學非梅毒螺旋體抗原血清學試驗試驗梅毒螺旋體抗原血清學試梅毒螺旋體抗原血清學試驗驗每3個月進行

9、非梅毒螺旋體個月進行非梅毒螺旋體抗原血清學試驗抗原血清學試驗如果需要進行治療如果需要進行治療報告：報告：非梅毒螺旋體抗原非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性血清學試驗陰性報告：兩種檢測均陽性兩種檢測均陽性治療病人治療病人報告：報告： 梅毒螺旋體抗梅毒螺旋體抗原血清學試驗原血清學試驗陰性陰性報告：報告：非梅毒螺旋體抗原非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性血清學試驗陽性梅毒螺旋體抗原血梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性清學試驗陰性報告：報告：梅毒螺旋體抗原血梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性清學試驗陽性非梅毒螺旋體抗原非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性血清學試驗陰性陽性反應陰性反應陰性反應陽性反應陽性反應或陰性反應陽性反應陰

10、性反應陽性反應16HIVHIV感染病人的梅毒血清學試驗感染病人的梅毒血清學試驗一些HIV感染病人，其梅毒血清學試驗結果不典型，包括 滴度超常高或超常低 滴度不斷變動如果臨床表現(xiàn)提示早期梅毒，而血清學試驗結果與此不一致，考慮 病灶活檢 或 暗視野顯微鏡檢查注意：注意：對于大多數HIV感染病人而言，梅毒血清學試驗是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準確、可靠的檢測方法17梅毒血清學檢測結果的解釋梅毒血清學檢測結果的解釋非梅毒螺非梅毒螺旋體試驗旋體試驗梅毒螺旋梅毒螺旋體試驗體試驗臨床參考意義臨床參考意義+ -RPR假陽性 考慮其他醫(yī)學狀況*+ +現(xiàn)癥梅毒現(xiàn)癥梅毒- +既往感染既往感染或極早期梅毒極早期梅毒-

11、 -排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可發(fā)生于艾滋病晚期*包括結核、瘧疾、風濕性關節(jié)炎或妊娠。18 暴露嬰兒的梅毒檢測暴露嬰兒的梅毒檢測19梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測 母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過胎盤，所以應謹慎地對嬰兒梅毒血清學試驗結果進行解釋 嬰兒需要接受預防性治療還是規(guī)范的抗梅毒治療應根據： 母親確診梅毒感染 母親治療情況 嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實驗室或放射線檢查結果 母親及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗滴度水平的比較（盡可能在同一個實驗室使用相同的試驗方法）20先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標準：先天梅毒的診斷標準：梅毒暴露嬰兒具有以下條件

12、之一：梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一： 任何先天梅毒臨床表現(xiàn) 暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性（+） 梅毒螺旋體IgM抗體陽性* RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次 滴度高4倍及以上 RPR/TRUST監(jiān)測隨訪中，任何一次滴度不下降或反 而上升 滿18月齡后，TPPA檢測陽性* IgM抗體反映近期感染，可幫助鑒別嬰兒先天梅毒，但我國尚不能廣泛開展21梅毒暴露嬰兒的評估梅毒暴露嬰兒的評估梅毒暴露嬰兒：l 嬰兒RPR檢測 嬰兒RPR檢測不能使用臍帶血，因其易被母體 血液 污染，從而出現(xiàn)假陽性結果l 檢查先天梅毒臨床表現(xiàn)： 非免疫性水腫、黃疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、 末端肢體假性麻痹l 對

13、可疑病灶或體液進行暗視野顯微鏡檢查22先天梅毒檢測流程先天梅毒檢測流程 嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗定量檢測梅毒暴露嬰兒母親、嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗定量檢測（應同時進行梅毒螺旋體抗原血清學試驗，用于隨訪診斷）組織或分泌物暗視野顯微鏡檢，有條件進行IgM抗體檢測報告母親、嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測滴度水平報告嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測滴度水平報告暗視野顯微鏡檢或IgM抗體檢測結果陽性陰性或沒有梅毒感染的癥狀有梅毒感染的癥狀23梅毒梅毒p 早期梅毒診斷可根據在組織或分泌物樣本中通過顯微檢測到早期梅毒診斷可根據在組織或分泌物樣本中通過顯微檢測到蒼白螺旋體而診斷蒼白螺旋體而診

14、斷p 應用梅毒血清學試驗進行梅毒篩查應用梅毒血清學試驗進行梅毒篩查 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測梅毒感染過程中產生的非特異抗體。滴度通常與疾病的活動度有關，因此可用于監(jiān)測對治療的反應 梅毒螺旋體抗原血清學試驗檢測對抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體，可用于確認臨床診斷或非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的陽性結果，可反映任何階段的梅毒暴露p 先天梅毒的診斷復雜，應根據：先天梅毒的診斷復雜，應根據：1. 母親梅毒感染狀態(tài)2. 母親梅毒治療情況3. 嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實驗室或X線檢查結果4. 母親、嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗滴度水平的比較5. 隨訪24HIVHIV和和HBVHBV的實驗室檢測的實驗室

15、檢測HIVHIV和和HBVHBV篩查檢測篩查檢測p篩查檢測篩查檢測n 用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染用于診斷產檢、臨產及分娩的孕產婦是否感染 HIV HIV和和HBVHBV HIVHIV抗體檢測抗體檢測 乙肝表面抗原（乙肝表面抗原（HBsAgHBsAg）檢測）檢測n 篩查檢測應篩查檢測應 具有較高的靈敏度和特異度具有較高的靈敏度和特異度 操作簡單、容易獲得、便宜操作簡單、容易獲得、便宜 盡可能在盡可能在“當日當日”獲得結果獲得結果26何時使用何種檢測？何時使用何種檢測？HIVHBV檢測方法檢測方法 HIV HIV快速檢測快速檢測 和/或 ELISA HBsAg HBsAg檢測檢測 如

16、果有條件，其他乙肝 標記物檢測檢測時間檢測時間 第一次產檢（孕早期）第一次產檢（孕早期） 或下一次產檢時 此前未檢測，分娩時應檢測 第一次產檢（孕早期）第一次產檢（孕早期） 或下一次產檢時 此前未檢測，分娩時應檢測27 HIVHIV試驗和檢測試驗和檢測28HIVHIV檢測：抗體檢測檢測：抗體檢測p 一個人感染了一個人感染了HIVHIV病毒后，體內將產生特異性抗體病毒后，體內將產生特異性抗體 對抗對抗HIVHIV病毒病毒* * 。p HIV HIV抗體通常在感染后抗體通常在感染后4 4 6 6周出現(xiàn)，但也周出現(xiàn)，但也有時也會有時也會 在在感染后感染后3 3個月才出現(xiàn)。個月才出現(xiàn)。p 從從感染感染

17、HIVHIV病毒到病毒到出現(xiàn)特異的出現(xiàn)特異的HIVHIV抗體抗體的一段時期的一段時期 稱為稱為“窗口期窗口期”。標準的標準的HIVHIV診斷檢測是識別診斷檢測是識別HIVHIV抗體抗體* *注意：注意： *與其他大多數疾病不同，與其他大多數疾病不同，HIVHIV抗體沒有保護性作用。抗體沒有保護性作用。29HIVHIV檢測：病毒核酸檢測檢測：病毒核酸檢測這些檢測這些檢測 檢測HIV感染者血液或血漿中的病毒 必須由經過專門培訓的實驗室人員操作 實驗室需有資質，并配備專門設備 昂貴，不是針對所有人進行的常規(guī)檢測方法PCRPCR（多聚酶連反應法）檢測（多聚酶連反應法）檢測 HIV DNAHIV DNA

18、定性檢測血液中是否含有病毒，用于診斷診斷 18 18月齡內嬰兒是否感染月齡內嬰兒是否感染HIVHIV HIV RNAHIV RNA定量檢測病毒載量病毒載量，即血漿中的病毒數量， 用于監(jiān)測對抗病毒治療的反應監(jiān)測對抗病毒治療的反應。30HIVHIV篩查檢測結果的含義篩查檢測結果的含義HIV篩查檢測結果“陰性陰性(-)(-)”： 受檢者沒有受檢者沒有感染HIV或者或者受檢者已經感染了HIV，但處于窗口期：3個月后 再次進行檢測HIV篩查檢測結果“陽性陽性(+)(+)”： 病人可能可能已經感染HIV, 但應再次重復檢測31HIVHIV確認試驗結果的含義確認試驗結果的含義l 如果篩查檢測結果陽性陽性，兩

19、次重復檢測中1次 或2次檢測結果為陽性陽性，需要進行確認試驗l 免疫印跡法（WB）確認試驗結果： 陽性陽性病人確認確認感染HIV 陰性陰性受檢者沒有受檢者沒有感染HIV 不確定不確定 結果為“不確定” 受檢者必須在4周后再次采血，重復前述所有步驟進行檢測32產時產時HIVHIV抗體檢測流程抗體檢測流程中國預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰中國預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播傳播HIVHIV檢測流程檢測流程33兒童兒童HIV HIV 檢測檢測34HIVHIV暴露嬰兒和兒童的暴露嬰兒和兒童的HIVHIV抗體檢測抗體檢測 不是所有不是所有HIVHIV感染母親所生兒童都會感染感染母親所生兒童都會感染HIVHIV

20、，但是，但是如果對如果對12-1812-18個月以內的嬰兒進行個月以內的嬰兒進行HIVHIV抗體檢測抗體檢測，所有，所有HIVHIV感染母親所生嬰兒都將是感染母親所生嬰兒都將是HIVHIV檢測結果陽性。檢測結果陽性。 即使嬰兒并沒有感染即使嬰兒并沒有感染HIVHIV 由于母體自身抗體可通過胎盤進入胎兒體內由于母體自身抗體可通過胎盤進入胎兒體內母體傳入的抗體可在嬰兒體內持續(xù)18個月，所以12-18月齡以內的嬰兒不能應用抗體檢測方法進行診斷。35嬰兒感染早期診斷（嬰兒感染早期診斷（EIDEID）HIVHIV病毒檢測（病毒檢測（DNA-PCRDNA-PCR）HIVHIV病毒檢測（病毒檢測（DNA-P

21、CRDNA-PCR） 檢測細胞內的HIV病毒， 能夠檢測低至1 10 拷貝前病毒DNA，以及 可在HIV暴露嬰兒出生后6周內診斷HIV感染 用于HIV暴露嬰兒HIV感染早期診斷（EID）36應用應用DNA-PCRDNA-PCR方法進行方法進行嬰兒感染早期診斷（嬰兒感染早期診斷（EIDEID）（）（1 1） 如果可以開展HIV DNA-PCR檢測，應用干血斑（DBS）在嬰兒6 6周齡周齡時進行PCR檢測。 如果PCR檢測結果陽性陽性 盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測 如果第二次PCR檢測結果陽性陽性，嬰兒確定感染HIV 如果PCR檢測結果陰性陰性 嬰兒出生后3個月再次進行PCR檢測37應用

22、應用DNA-PCRDNA-PCR方法進行方法進行嬰兒感染早期診斷（嬰兒感染早期診斷（EIDEID）（）（2 2）出生后出生后3 3個月個月再次進行HIV DNA-PCR檢測 如果PCR檢測結果陽性陽性 盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測 如果第二次PCR檢測結果陽性陽性，嬰兒確定感染HIV 如果PCR檢測結果陰性陰性 嬰兒視為未感染HIV 考慮在嬰兒滿12月齡時進行HIV抗體檢測（如有必要，在18月齡時再次進行檢測）檢測結果陰性的檢測結果陰性的嬰兒嬰兒接受接受母乳喂養(yǎng)，必須在停止母乳母乳喂養(yǎng)，必須在停止母乳喂養(yǎng)后喂養(yǎng)后6 6周再次進行周再次進行PCRPCR檢測，以確保嬰兒沒有在母乳檢測，以

23、確保嬰兒沒有在母乳喂養(yǎng)期間感染喂養(yǎng)期間感染HIVHIV。38嬰兒嬰兒HIVHIV感染早期診斷流程感染早期診斷流程39HIVHIV暴露嬰兒暴露嬰兒/ /兒童的兒童的HIVHIV抗體檢測抗體檢測 所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個月未接受早期感染檢測者，應進行HIV抗體檢測。檢測時間： 滿12月齡 和 滿18月齡（必要時，見HIV抗體檢測流程） 出生后3個月（接受早期感染檢測者）檢測結果為陰性的兒童也應接受HIV抗體檢測滿18月齡HIV抗體檢測陽性，可確認兒童HIV感染。40HIVHIV暴露兒童暴露兒童HIVHIV抗體檢測流程抗體檢測流程41HIVHIV感染的實驗室監(jiān)測感染的實驗室監(jiān)測

24、42檢測檢測檢測檢測對象對象原因原因臨床指導臨床指導CD4+ T淋巴細胞計數所有HIV感染孕產婦基線評估是否需要抗病毒治療抗病毒治療：CD4 350個細胞/mm3預防應用抗病毒藥物：CD4 350個細胞/mm3全血細胞計數（CBC）所有HIV感染孕產婦AZT(疊氮胸苷）可引起貧血或白細胞計數降低如果Hb1000萬IU/ml），嬰 兒有免疫保護l 如果HBsAg陰性和抗HBs抗體 1000萬IU/ml， 嬰兒應再次接受3劑乙肝疫苗接種48要點要點- -HIVHIVp 使用快速篩查試驗診斷HIV感染。篩查檢測結果陽性 進行確認試驗以保證結果的準確性。p HIV感染抗病毒治療應根據： CD4+ T淋巴細胞計數檢測結果，反映HIV對免疫系統(tǒng) 的影響 HIV病毒載量檢測結果，反映血液中HIV病毒的數量p 如果有條件，應用 PCR方法檢測HIV-DNA診斷嬰兒 是否HIV感染p 兒童滿12-18月齡，HIV抗體檢測方可確認兒童是否感染49要點要點- -HBVHBVp 通過篩查HBsAg診斷HBV感染p 如有條件，篩查HBsAg結果陽性，可進一步檢測 其他 HBV標記物p HBsAg陽性母親所生嬰兒，出生時接受乙肝疫苗 接種，應在出生后12個月接受HBsAg和抗HBs抗體 檢測50梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗診斷試劑操作操作SOP 一、目的：本試劑采用VD