第二章 微生物分類及微生物基本研究技術(shù).

1、第二章第二章微生物的分類鑒定及微生物的微生物的分類鑒定及微生物的 基本研究技術(shù)基本研究技術(shù)研究微生物的基本技術(shù)手段研究微生物的基本技術(shù)手段微生物的分類鑒定微生物的分類鑒定contents第一節(jié) 微生物的基本研究技術(shù)微生物的基本研究技術(shù)一、一、無菌技術(shù)無菌技術(shù) 在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其它微生物污染的技術(shù)。在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其它微生物污染的技術(shù)。微生物培養(yǎng)的常用器具的滅菌微生物培養(yǎng)的常用器具的滅菌1. 1. 試管、三角瓶、平皿、玻璃燒瓶等試管、三角瓶、平皿、玻璃燒瓶等高溫干熱滅菌：高溫干熱滅菌：160-180160-180 2h2. 2. 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌濕

2、熱滅菌濕熱滅菌 ：121 121 15-30min3. 3. 接種工具接種工具 火焰灼燒火焰灼燒無菌操作無菌操作微生物學(xué)研究中最常用的基本操作。微生物學(xué)研究中最常用的基本操作。 培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，用經(jīng)過滅菌的接種工具，在無菌的條件下接種含菌材培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，用經(jīng)過滅菌的接種工具，在無菌的條件下接種含菌材料于培養(yǎng)基上，這一操作過程稱做無菌操作。料于培養(yǎng)基上，這一操作過程稱做無菌操作。 接種的微生物不能釋放到環(huán)境中，防止環(huán)境污染。接種的微生物不能釋放到環(huán)境中，防止環(huán)境污染。培養(yǎng)皿高壓蒸汽自動高壓蒸汽自動滅菌鍋滅菌鍋手提式高壓蒸手提式高壓蒸汽滅菌鍋汽滅菌鍋無菌操作箱無菌操作箱無菌操作無菌操作二、染色技

3、術(shù)利用染料分子和細(xì)胞物質(zhì)的親和力，而使其牢固結(jié)合，使利用染料分子和細(xì)胞物質(zhì)的親和力，而使其牢固結(jié)合，使細(xì)胞呈現(xiàn)顏色，便于觀察、鑒別細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞呈現(xiàn)顏色，便于觀察、鑒別細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。染料是一種有機化合物，電離后形成帶有正電荷或負(fù)電荷染料是一種有機化合物，電離后形成帶有正電荷或負(fù)電荷的染料離子。的染料離子。微生物細(xì)胞表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)微生物細(xì)胞表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)細(xì)菌的等電點較低，細(xì)菌的等電點較低，pHpH值大約在值大約在2 25 5之間，故在中性、堿性之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷；或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷；G+G+比比G-G-細(xì)菌對

4、堿性染料的親和力高。細(xì)菌對堿性染料的親和力高。根據(jù)電離后所帶電荷的性質(zhì)，染料分為：根據(jù)電離后所帶電荷的性質(zhì)，染料分為：1 1、酸性染料：帶負(fù)電，與堿性物質(zhì)成鹽。如伊、酸性染料：帶負(fù)電，與堿性物質(zhì)成鹽。如伊紅、剛果紅、苯胺黑、酸性復(fù)紅等紅、剛果紅、苯胺黑、酸性復(fù)紅等2 2、堿性染料堿性染料：帶正電，如美藍(lán)、結(jié)晶紫、孔雀：帶正電，如美藍(lán)、結(jié)晶紫、孔雀綠、番紅等綠、番紅等3 3、中性染料：酸性染料和堿性染料的結(jié)合，如、中性染料：酸性染料和堿性染料的結(jié)合，如吉姆薩染料吉姆薩染料4 4、單純?nèi)玖希哼@類物質(zhì)親和力低，不能和被染單純?nèi)玖希哼@類物質(zhì)親和力低，不能和被染物成鹽，染色能力取決于能否溶于被染物。物成

5、鹽，染色能力取決于能否溶于被染物。 簡單染色法簡單染色法 正染色正染色 革蘭氏染色法革蘭氏染色法 鑒別染色法鑒別染色法 抗酸性染色法抗酸性染色法 芽孢染色法芽孢染色法 死菌死菌 姬姆薩染色法姬姆薩染色法細(xì)菌染色法細(xì)菌染色法 負(fù)染色負(fù)染色： 莢膜染色法莢膜染色法等等 活菌：用美藍(lán)或活菌：用美藍(lán)或TTCTTC（氧化三苯基四氮唑）等作活菌染色（氧化三苯基四氮唑）等作活菌染色 染色方法：簡單染色法、鑒別染色法（復(fù)染色法）、負(fù)染色法染色方法：簡單染色法、鑒別染色法（復(fù)染色法）、負(fù)染色法染色的基本程序 制片染色水洗干燥鏡檢。 A. 加小滴水加小滴水 B. 涂成薄層涂成薄層 C. 固定菌體固定菌體 涂片制備

6、過程顯微鏡顯微鏡是微生物研究中的不可缺少的工具。是微生物研究中的不可缺少的工具。顯微技術(shù)顯微技術(shù)是微生物學(xué)研究的重要技術(shù)和基礎(chǔ)。是微生物學(xué)研究的重要技術(shù)和基礎(chǔ)。三、顯微技術(shù)三、顯微技術(shù)顯微鏡的種類：顯微鏡的種類： 普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡。鏡、熒光顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡。1.放大倍數(shù)放大倍數(shù)=接物鏡放大倍接物鏡放大倍數(shù)數(shù)接目鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)2. 顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率 是表示顯微是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：離的能力，可用公式表示

7、為： D=/2nsin(/2 ) 式中式中D D：物鏡分辨出物體兩點間物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。的最短距離。 ：可見光的波長（平均：可見光的波長（平均0.550.55 m) m) n: n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。射率。 ：鏡口角（即入射角）。：鏡口角（即入射角）。（一）油鏡的使用原理：（一）油鏡的使用原理： 油鏡的透鏡很小，光線通過玻片與油鏡頭之油鏡的透鏡很小，光線通過玻片與油鏡頭之間的空氣時，因介質(zhì)密度不同，發(fā)生折射或全間的空氣時，因介質(zhì)密度不同，發(fā)生折射或全反射，使射入透鏡的光線減少，物象顯現(xiàn)不清。反射，使射入透鏡的光線減少，物象顯現(xiàn)不清。1. 香柏

8、油的折射率與玻璃接近香柏油的折射率與玻璃接近（n=1.52） ，提高了視，提高了視野的照明度。野的照明度。2 . 提高了顯微鏡的分辨率提高了顯微鏡的分辨率D=/2nsin(/2 )光學(xué)顯微鏡油鏡的使用光學(xué)顯微鏡油鏡的使用（二）油鏡頭的識別：（二）油鏡頭的識別： 各接物鏡的放大率可由其外形辨認(rèn)，鏡頭長度越大，鏡各接物鏡的放大率可由其外形辨認(rèn)，鏡頭長度越大，鏡片直徑越小，放大倍數(shù)大；反之，放大倍數(shù)小。油鏡頭長片直徑越小，放大倍數(shù)大；反之，放大倍數(shù)小。油鏡頭長度大于低、高倍鏡，鏡頭下緣一般刻有一圈黑線或白線，度大于低、高倍鏡，鏡頭下緣一般刻有一圈黑線或白線，并刻有并刻有100100、1.251.25

9、或或oiloil等字樣。等字樣。 （三）油鏡的使用法：（三）油鏡的使用法： 1 1、使用顯微鏡油鏡時，必須將顯微鏡端正直立桌上，不得、使用顯微鏡油鏡時，必須將顯微鏡端正直立桌上，不得將鏡臂彎曲，使載物臺傾斜，以免香柏油流溢，影響觀察，將鏡臂彎曲，使載物臺傾斜，以免香柏油流溢，影響觀察，污染臺面。污染臺面。 2 2、對光：、對光： 首先打開光圈，使光線集中于集光器。首先打開光圈，使光線集中于集光器。一般用低倍鏡或高倍鏡觀察物象或用油鏡檢查不染色標(biāo)本一般用低倍鏡或高倍鏡觀察物象或用油鏡檢查不染色標(biāo)本時，需下降集光器并適當(dāng)?shù)乜s小光圈，使光度減弱時，需下降集光器并適當(dāng)?shù)乜s小光圈，使光度減弱；若用若用油

10、鏡檢查染色標(biāo)本時，光度宜強。應(yīng)將顯微鏡亮度開關(guān)調(diào)油鏡檢查染色標(biāo)本時，光度宜強。應(yīng)將顯微鏡亮度開關(guān)調(diào)至最亮，光圈完全打開，集光器上升至與載物臺相平。至最亮，光圈完全打開，集光器上升至與載物臺相平。 3 3、調(diào)焦距：、調(diào)焦距： A A、將標(biāo)本片放載物臺上，用標(biāo)本推進器固定，將欲檢、將標(biāo)本片放載物臺上，用標(biāo)本推進器固定，將欲檢部分移至接物鏡下。先用低倍鏡找出標(biāo)本的位置，然部分移至接物鏡下。先用低倍鏡找出標(biāo)本的位置，然后提高鏡筒，在標(biāo)本的待檢部位滴鏡油一滴，再換油后提高鏡筒，在標(biāo)本的待檢部位滴鏡油一滴，再換油鏡觀察。鏡觀察。 B B、轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使載物臺徐徐上升（或使鏡筒漸漸下、轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使載物臺徐

11、徐上升（或使鏡筒漸漸下降），直至降），直至油鏡頭浸沒至油中油鏡頭浸沒至油中。此時眼睛應(yīng)從側(cè)面觀。此時眼睛應(yīng)從側(cè)面觀察，以免壓碎標(biāo)本片和損壞鏡頭。察，以免壓碎標(biāo)本片和損壞鏡頭。 C C、然后雙眼移至接目鏡，一面從接目鏡觀察，一面反、然后雙眼移至接目鏡，一面從接目鏡觀察，一面反方向緩慢地轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器（方向緩慢地轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器（下降載物臺，或上升鏡下降載物臺，或上升鏡筒筒），當(dāng)出現(xiàn)模糊物象時，換用細(xì)調(diào)節(jié)器，轉(zhuǎn)動至物），當(dāng)出現(xiàn)模糊物象時，換用細(xì)調(diào)節(jié)器，轉(zhuǎn)動至物象清晰為止。象清晰為止。D、觀察完畢，應(yīng)先提高鏡筒，并將油鏡頭扭向一側(cè)，再取下標(biāo)本片。油鏡頭使用后，應(yīng)立即用擦鏡紙擦凈鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許

12、二甲苯擦拭鏡頭，并隨即用干的鏡紙擦去殘存的二甲苯，以免二甲苯滲入，溶解用以粘固透鏡的膠質(zhì)物，造成鏡片移位或脫落 四、接種技術(shù)接種技術(shù)是微生物學(xué)實驗及研究中的一項最基接種技術(shù)是微生物學(xué)實驗及研究中的一項最基本的操作技術(shù)。本的操作技術(shù)。接種是將純種微生物在無菌操作條件下移植到接種是將純種微生物在無菌操作條件下移植到已滅菌并適宜該菌生長繁殖所需要的培養(yǎng)基中。已滅菌并適宜該菌生長繁殖所需要的培養(yǎng)基中。為了獲得微生物的純種培養(yǎng)（指一株菌種或一為了獲得微生物的純種培養(yǎng)（指一株菌種或一個培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞或孢子都是由一個細(xì)胞個培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞或孢子都是由一個細(xì)胞分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代），要求接種過程中分裂

13、、繁殖而產(chǎn)生的后代），要求接種過程中必須嚴(yán)格進行無菌操作，一般是在無菌室內(nèi)，必須嚴(yán)格進行無菌操作，一般是在無菌室內(nèi)，超凈工作臺火焰旁或?qū)嶒炇一鹧媾赃M行。超凈工作臺火焰旁或?qū)嶒炇一鹧媾赃M行。 根據(jù)不同的實驗?zāi)康募芭囵B(yǎng)方式可以采用不同的接種根據(jù)不同的實驗?zāi)康募芭囵B(yǎng)方式可以采用不同的接種工具和接種方法。工具和接種方法。常用的工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、玻璃涂棒，常用的工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、玻璃涂棒，移液管及滴管等。移液管及滴管等。常用的方法有常用的方法有斜面接種，液體接種，穿刺接種和平板斜面接種，液體接種，穿刺接種和平板接種。接種。斜面接種斜面接種穿刺接種操作過程示意圖接種菌名及接種劃線方

14、式、接種工具：接種菌名及接種劃線方式、接種工具：細(xì)菌：如細(xì)菌：如枯草桿菌，大腸桿菌，巨大芽孢桿菌枯草桿菌，大腸桿菌，巨大芽孢桿菌 接種方式：接種方式：“之之”字劃線字劃線，接種工具：，接種工具：接種環(huán)接種環(huán)酵母菌：如酵母菌：如釀酒酵母菌，假絲酵母菌釀酒酵母菌，假絲酵母菌 接種方式：接種方式：劃直線劃直線，接種工具：，接種工具：接種環(huán)接種環(huán)霉菌：如霉菌：如黑曲霉，黃曲霉，根霉黑曲霉，黃曲霉，根霉 接種方式：接種方式：點植或劃直線點植或劃直線，接種工具：，接種工具：接種鉤或接種環(huán)接種鉤或接種環(huán) 各種無菌操作接種技術(shù)示意圖各種無菌操作接種技術(shù)示意圖微生物的分離純化技術(shù)是指從混雜的微生物群體中獲得只含

15、有某一種或某一株微生物的過程。分離純化技術(shù)其實是進行平板接種，即用接種分離純化技術(shù)其實是進行平板接種，即用接種環(huán)將菌種接至平板培養(yǎng)基上，或用移液管、滴環(huán)將菌種接至平板培養(yǎng)基上，或用移液管、滴管將一定體積的菌液移至平板培養(yǎng)基上，然后管將一定體積的菌液移至平板培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)達到。培養(yǎng)達到。平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)，分離純化菌平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)，分離純化菌種，活菌計數(shù)及在平板上進行各種實驗時采用種，活菌計數(shù)及在平板上進行各種實驗時采用的一種接種方法。的一種接種方法。五、分離純化技術(shù)分離純化技術(shù)平板（培養(yǎng)平板）：指熔化的固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，平板（培養(yǎng)平板）：指熔化的固體培養(yǎng)基倒入

16、無菌平皿，冷卻凝固后形成培養(yǎng)平板。冷卻凝固后形成培養(yǎng)平板。培養(yǎng)物：培養(yǎng)物：在人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的在人為規(guī)定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體稱為培養(yǎng)物。微生物群體稱為培養(yǎng)物。純培養(yǎng)物：純培養(yǎng)物：只有一種微生物的培養(yǎng)物。只有一種微生物的培養(yǎng)物。純培養(yǎng)技術(shù)：純培養(yǎng)技術(shù)：把特定的微生物從自然界混雜存在把特定的微生物從自然界混雜存在的狀態(tài)中分離、純化出來的培養(yǎng)技術(shù)。的狀態(tài)中分離、純化出來的培養(yǎng)技術(shù)。以無菌操作方法獲得純培養(yǎng)以無菌操作方法獲得純培養(yǎng)是微生物學(xué)獨有的技是微生物學(xué)獨有的技術(shù)，對微生物學(xué)的發(fā)展有非常重要的意義。術(shù)，對微生物學(xué)的發(fā)展有非常重要的意義。一、幾個概念二、二、微生物的分離純

17、化方法微生物的分離純化方法： （1 1）平板劃線法）平板劃線法 （2 2）稀釋倒平板法）稀釋倒平板法 （3 3）稀釋涂布法）稀釋涂布法 （4 4）選擇培養(yǎng)分離法）選擇培養(yǎng)分離法 （5 5）單細(xì)胞挑取法）單細(xì)胞挑取法 （6 6）利用環(huán)境條件控制法）利用環(huán)境條件控制法 平板劃線分離操作法示意圖平板劃線分離法：平板劃線分離法： 平板劃線菌落分離效果圖稀釋倒平板法稀釋倒平板法稀釋涂布法稀釋涂布法選擇培養(yǎng)分離法選擇培養(yǎng)分離法-選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離比如：分離產(chǎn)蛋白酶菌株比如：分離產(chǎn)蛋白酶菌株在培養(yǎng)基中添加在培養(yǎng)基中添加牛奶或酪素，觀察是否產(chǎn)生蛋白水解圈

18、。牛奶或酪素，觀察是否產(chǎn)生蛋白水解圈。單細(xì)胞挑取法利用環(huán)境條件控制法利用環(huán)境條件控制法 溫度溫度嗜熱菌、嗜冷菌嗜熱菌、嗜冷菌 pHpH耐酸、耐堿微生物耐酸、耐堿微生物 滲透壓滲透壓耐鹽、糖耐鹽、糖二元培養(yǎng)：二元培養(yǎng)： 以某種微生物的純培養(yǎng)為食物（或寄主）來進以某種微生物的純培養(yǎng)為食物（或寄主）來進行另外一種微生物的純培養(yǎng)、稱二元培養(yǎng)。行另外一種微生物的純培養(yǎng)、稱二元培養(yǎng)。什么是微生物分類學(xué)什么是微生物分類學(xué)(microbialtaxonomy):按照微生物的親緣關(guān)系將按照微生物的親緣關(guān)系將其安排成條理清楚的各種其安排成條理清楚的各種分類單元和分類群的科學(xué)分類單元和分類群的科學(xué) 微生物分類的目的

19、微生物分類的目的把各種微生物按照它把各種微生物按照它們的親緣關(guān)系分群歸們的親緣關(guān)系分群歸類，排成系統(tǒng)，以便類，排成系統(tǒng)，以便于人們對微生物進行于人們對微生物進行鑒定和交流鑒定和交流第二節(jié)第二節(jié) 微生物的分類鑒定微生物的分類鑒定微生物分類學(xué)微生物分類學(xué)的主要任務(wù)的主要任務(wù)分類分類(classification)即根據(jù)相似性或親即根據(jù)相似性或親緣關(guān)系緣關(guān)系,將一個有機將一個有機體放在一個單元中體放在一個單元中命名命名(nomenclature)鑒定鑒定(identification)確定一個新的分類物確定一個新的分類物是否歸屬于已經(jīng)命名是否歸屬于已經(jīng)命名的分類單元的過程的分類單元的過程一、微生物的

20、分類單位一、微生物的分類單位界界Kingdom門門Phylum綱綱Class目目Order科科Family屬屬Genus種種Species種以上的系統(tǒng)分類單元種以上的系統(tǒng)分類單元自上而下可依次分為自上而下可依次分為7個等級：個等級：種是最基本的分類單位種是最基本的分類單位, 它是一大群表型特征高度相似，它是一大群表型特征高度相似，親緣關(guān)系極其相近，與同屬內(nèi)其它種有著明顯差異的菌株親緣關(guān)系極其相近，與同屬內(nèi)其它種有著明顯差異的菌株的總稱的總稱?，F(xiàn)代分類學(xué)上規(guī)定種內(nèi)菌株的現(xiàn)代分類學(xué)上規(guī)定種內(nèi)菌株的DNADNA同源性同源性70%70% 常用的幾種分類概念常用的幾種分類概念新種（species nov

21、a，sp.nov或nov sp.）是指權(quán)威性的分類、鑒定手冊中從未記載過的一種新分離并鑒定過的微生物。 按國際命名法規(guī)對它命名并在規(guī)定的學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表時，應(yīng)在其學(xué)名后附上“sp. nov”符號。在新種發(fā)表前，其模式菌株的培養(yǎng)物就應(yīng)存放在一個永久性的可靠的菌種保藏機構(gòu)中，并允許研究人員取得該菌種。新記錄種亞種(變種)當(dāng)某一個種內(nèi)的不同菌株存在少數(shù)明顯而穩(wěn)定的變異特征或遺傳性狀而又不足以區(qū)分成新種時，可以將這些菌株細(xì)分成兩個或更多的小的分類單元-亞種。型(form或type) 常指亞種以下的細(xì)分。當(dāng)同種或同亞種不同菌株之間的性狀差異，不足以分為新的亞種時，可以細(xì)分為不同的型。例如抗原特征的差異分為

22、不同的血清型。菌株(品系)(strain): 表示任何由一個獨立分離的單細(xì)胞繁殖成的純遺傳型群體及其一切后代。菌株名稱常用數(shù)字編號、字母、人名、地名等表示。如 枯草桿菌AS1.398(Bacillus subtilis AS1.398)和枯草桿菌BF7658(Bacillus subtilis BF7 658)，分別代表枯草桿菌的兩個菌株(ASI.398和BF7658分別為菌株的編號)，這兩個菌株， 前者可用于生產(chǎn)蛋白酶，后者則可用于生產(chǎn)-淀粉酶。菌株與型的區(qū)別： 菌株之間不存在鑒別性特征的差異，命名不同的菌株無需分類學(xué)依據(jù)； 不同型的細(xì)菌之間存在鑒別性特征的差異，命名或鑒定不同的型必需有分類

23、學(xué)依據(jù)。大腸桿菌的分類地位大腸桿菌的分類地位每一種微生物都有一個自己的專門名稱。學(xué)名是國際上統(tǒng)每一種微生物都有一個自己的專門名稱。學(xué)名是國際上統(tǒng)一使用的名稱。一使用的名稱。以細(xì)菌為例：以細(xì)菌為例：物種的學(xué)名是用拉丁詞或拉丁化的詞組成的。在一般物種的學(xué)名是用拉丁詞或拉丁化的詞組成的。在一般出版物中，出版物中，學(xué)名應(yīng)排斜體字學(xué)名應(yīng)排斜體字，在書寫或打字材料中，在書寫或打字材料中，應(yīng)在學(xué)名之下劃一橫線，以表示它應(yīng)是斜體字母。應(yīng)在學(xué)名之下劃一橫線，以表示它應(yīng)是斜體字母。1.1.雙名法（雙名法（binominal nomenclaturebinominal nomenclature） 命名按照命名按照國

24、際細(xì)菌命名法規(guī)國際細(xì)菌命名法規(guī), , 采用林奈氏雙名法。采用林奈氏雙名法。屬名屬名 + + 種名種名 + +命名人命名人 Escherichia coliEscherichia coli Castellani Castellani et Chalmers 1919 et Chalmers 1919二、微生物的命名二、微生物的命名2. 三名法（trinominal nomenclature）當(dāng)某種微生物是一個亞種（subspecies，簡稱“subsp”）或變種(variety，簡稱“var”，亞種的同義詞)時，學(xué)名就應(yīng)按三名法拼寫該亞種名可譯為：反硝化產(chǎn)堿桿菌氧化木糖亞種 三、微生物的分類鑒定

25、方法三、微生物的分類鑒定方法 1. 經(jīng)典鑒定分類法經(jīng)典鑒定分類法(特征分類法）特征分類法） 2.數(shù)值分類法（統(tǒng)計分類法）數(shù)值分類法（統(tǒng)計分類法） 3.遺傳分類法遺傳分類法（一） 特征分類法（經(jīng)典分類法） 隨機地和不系統(tǒng)地根據(jù)一些特征進行分類。主要是隨機地和不系統(tǒng)地根據(jù)一些特征進行分類。主要是形態(tài)形態(tài)、生理生化生理生化特征。特征。1 1、形態(tài)特征（個體和群體）、形態(tài)特征（個體和群體）形態(tài)學(xué)特征可作為微生物分類和鑒定的重要依據(jù)形態(tài)學(xué)特征可作為微生物分類和鑒定的重要依據(jù)之一。包括之一。包括培養(yǎng)特征、細(xì)胞形態(tài)及其染色特性、特殊的培養(yǎng)特征、細(xì)胞形態(tài)及其染色特性、特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、運動性細(xì)胞結(jié)構(gòu)、運動性等等

26、等等形態(tài)學(xué)特征分形態(tài)學(xué)特征分（1 1）細(xì)菌形態(tài)：形狀、大小、排列）細(xì)菌形態(tài)：形狀、大小、排列 （2 2）培養(yǎng)特征：）培養(yǎng)特征：固體固體 菌落，半固體菌落，半固體 穿刺，液體穿刺，液體特特征征（3 3）特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、芽孢、莢膜、孢子）特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、芽孢、莢膜、孢子 （4 4）染色反應(yīng)：革蘭、抗酸）染色反應(yīng)：革蘭、抗酸（5 5）內(nèi)含物：異染顆粒、伴孢晶體）內(nèi)含物：異染顆粒、伴孢晶體（6 6）運動性：滑行、鞭毛泳動）運動性：滑行、鞭毛泳動2、生理生化反應(yīng)、生理生化反應(yīng) 生理生化特征也生理生化特征也是最常用的細(xì)菌分類、鑒定指是最常用的細(xì)菌分類、鑒定指標(biāo)。標(biāo)。營養(yǎng)要求：碳源、氮源、營養(yǎng)類型營養(yǎng)要求：

27、碳源、氮源、營養(yǎng)類型代謝產(chǎn)物：種類、產(chǎn)量、顯色反應(yīng)代謝產(chǎn)物：種類、產(chǎn)量、顯色反應(yīng) 酶：產(chǎn)酶種類、反應(yīng)特性酶：產(chǎn)酶種類、反應(yīng)特性3、生態(tài)學(xué)特征、生態(tài)學(xué)特征相互關(guān)系、宿主種類、與氧關(guān)系等。相互關(guān)系、宿主種類、與氧關(guān)系等。 4、生活史，有性生殖、生活史，有性生殖5、血清學(xué)反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)6、近年又發(fā)展了紅外光譜，、近年又發(fā)展了紅外光譜，GC含量，含量，DNA雜交等。雜交等。 2. 分子與遺傳方法分子與遺傳方法（1 1）DNADNA堿基組成：堿基組成：GC%GC%相同不能說明是同種，但不同則肯定不是同種。相同不能說明是同種，但不同則肯定不是同種。差別差別10%10%不是同種，不是同種，10%85%85%為同種，為同種，65%65%為同屬為同屬3 3、據(jù)數(shù)值繪出矩陣圖并轉(zhuǎn)換成樹狀譜。、據(jù)數(shù)值繪出矩陣圖并轉(zhuǎn)換成樹狀譜。 用用數(shù)理統(tǒng)計的方法數(shù)理統(tǒng)計的方法處理細(xì)菌的各種特征，求出相似值，根據(jù)相似值大小處理細(xì)菌的各種特征，求出相似值，根據(jù)相似值大小決定細(xì)菌在分類學(xué)中的關(guān)系，并進行類群的劃分。決定細(xì)菌在分類學(xué)中的關(guān)系，并進行類群的劃分。四、微生物的快速分類鑒定方法四、微生物的快速分類鑒定方法1、 API 細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)細(xì)菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)Analytica Products INC的簡稱。法國生的簡稱。法國生物物- 梅里埃公司生產(chǎn)的細(xì)菌數(shù)值分類分梅里埃公司生產(chǎn)的細(xì)菌數(shù)值分類分析鑒定系統(tǒng)。約有析鑒定系統(tǒng)